全 文 ：·714· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
得回归方程Y=628366．0X+775．86，r=
0．999。连翘苷在0．078～0．5168gg与峰面积呈
良好的线性关系。
2．7 精密度试验：取同一供试品溶液，精密吸取
10肛L进样，连续进样6次，结果连翘苷峰面积的
RSD为0．84％。
2．8稳定性试验：取同一供试品溶液，精密吸取lo
pL进样，分别在0、4、8、12、16、20h进样，测定连翘
苷峰面积，结果其RSD为0．53％，表明供试品溶液
在20h内稳定。
2．9重现性试验：取同批号(批号040516)5份，制
备供试品溶液，测定连翘苷的质量分数，结果平均质
量分数为0．7463mg／g，RSD为1．42％。
2．10回收率试验：取桑姜感冒片(批号为040516)
0．35g，各5份，精密称定，分别精密加入6．078弘g／
mL连翘苷对照品溶液20mL，制备供试品溶液，测
定，结果连翘苷的平均回收率为98．9％，RSD为
1．47％。
2．11样品的测定：取桑姜感冒片6批样品，制备供
试品溶液，测定，结果见表1。
表1 桑姜感冒片中连翘苷的测定结果(辟一2)
Table1 ResultsofforsythingtnininSa gjiang
GanmaoT blets(n一2)
批号 连翘苷t(mg·g-1)批号 连翘苷／(mg·91)
040204 0．42 040515 0．88
040205 0．60 040516 0．75
040514 0．80 040517 0．63
3讨论
3．1 波长的选择：经紫外光谱扫描，连翘苷在277
nm和230nm均有最大吸收。经对样品的高效液相
色谱图进行对比，采用27712m波长测定，无杂质干
扰，分离度符合规定，故选用277nm为检测波长。
3．2 流动相的选择：文献报道采用乙腈一水(25；
75)和甲醇～乙腈一水(12：18：70)为流动相，通过实
验发现，后者较前者分离效果相对较好，能使连翘苷
峰与杂质峰的分离度符合规定，故选用甲醇一乙腈一
水(12：18：70)为流动相。
3．3提取方法的选择：桑姜感冒片中药味较多，其
他药味及连翘本身的其他成分对连翘苷的分析影响
很大。连翘苷在甲醇、乙醇中有很好的溶解性，同时
亦溶于醋酸乙酯、三氯甲烷、乙醚，采用液液萃取分
离杂质效果不好。曾采用超声处理后直接进样分析、
采用氧化铝柱分离后进样分析、采用醋酸铅沉淀分
离杂质后进样分析，结果本品超声后直接进样分析
时，干扰很大，前沿的杂质峰大，连翘苷峰远达不到
基线分离。采用中性醋酸铅沉淀的方法，连翘苷可被
沉淀裹加一同沉淀，使测定结果偏低。试验中分别选
用氧化铝、聚酰胺、大孔吸附树脂柱处理的办法去除
杂质，结果表明，单纯采用以上方法都存在一定的不
足。采用中性氧化铝柱分离时，前沿杂质多，未完成
达到基线分离。采用大孑L吸附树脂柱处理后的样品，
杂质明显降低，缩短了分析时间，但连翘苷峰前有一
凸坡使连翘峰未达到基线分离。故选用大孔吸附树
脂柱和氧化铝柱处理，可去除大多数杂质，连翘苷峰
也分离到基线。同时，试验中摸索了不同体积分数甲
醇作为洗脱液对测定的影响，结果表明，采用大孔树
脂柱分离时，用45％甲醇40mL洗脱，可去除前沿
的大多数杂质，又不影响被测物质；继续采用70％
甲醇40mL洗脱时，可将被测物质洗脱下来。采用
中性氧化铝柱分离时，用70％甲醇洗脱后，可除去
凸坡的影响，达到基线分离。
HPLC法测定复方咳嗽枇杷颗粒中甘草酸
李海燕1，黄能章2
(1．佛山科技学院医学院，广东佛山528000；2．广东怡康制药有限公司，广东广州510520)
复方咳嗽枇杷颗粒处方含枇杷、桔梗、苦杏仁、
甘草等药材，具有止咳平喘功效，用于上呼吸道感染
的治疗。枇杷叶是方中君药，但无明显的定量测定指
标；桔梗药材主要含总皂苷，但苦杏仁、甘草等均含
有苷类成分，对其构成干扰，缺少专属性；而甘草中
含有甘草酸等成分，在方中无干扰成分，故本实验以
甘草酸单胺盐为指标进行HPLC定量测定方法研
究，以便更好地控制制剂质量。
收稿日期：2005—12一16
作者简介：李海燕(1974一)，女，药学讲师，主要从事天然药物化学成分研究及中药制剂质量标准研究工作。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·715·
1仪器与试药
美国奥泰P。。。型液相色谱仪：P：。。高压泵，
Rheodyne7725i型进样阀，200型紫外检测器，千谱
色谱工作站。
甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物制品检定
所，批号：110736—200423)，复方咳嗽枇杷颗粒(广东
怡康制药有限公司)，甲醇(色谱纯)，水(重蒸馏水)，
其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：HypersilODS2(150
mm×4．6mm．5肚m)；流动相：甲醇一0．2mol／I。醋
酸铵一冰醋酸(63：37：1)；检测波长：250am；进样
量：10肛L。理论板数以甘草酸峰计算不低于2000。
2．2溶液的制备
2．2．1对照品溶液的制备：精密称取甘草酸单铵盐
对照品适量，加甲醇制成0．2mg／mL的溶液(0．2
mg甘草酸单铵盐折合甘草酸为0．1959rag)。
2．2．2供试品溶液的制备：本品适量，研细，取1．0
g，精密称定，置锥形瓶中，加入甲醇50mL，加热回
流1h，滤过，残渣用甲醇洗涤，合并洗液与滤液，浓
缩至约1mI。，加甲醇溶解并定量移入lomL量瓶
中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过微孔滤膜，取续滤
液，即得。
2．2．3阴性对照溶液的制备：按处方制备不含甘草
药材的样品，同法制成阴性对照溶液，即得。
2．3方法可行性考察：取对照品溶液、供试品溶液、
阴性对照溶液，在上述色谱条件下进样10t．tL，结果
见图1。可见阴性对照对甘草酸的测定无干扰。
2．4 线性关系的考察：精密吸取甘草酸单铵盐对照
品溶液(0．2468mg／mL)5．0、7．5、10、12．5、15．0
tzL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以甘草酸的
量(X)为横坐标，峰面积积分值(y)为纵坐标，绘制
标准曲线，计算其回归方程为：y一20689+7．809x
106X，r一0．9994，表明甘草酸在1．234～3．702
pg与峰面积具有良好的线性关系。
2．5精密度试验：精密吸取对照品溶液10弘L，按
上述条件重复进样5次，测定其峰面积，结果其峰面
积的RSD为0．42％。
2．6重现性试验：取同一批供试品，按供试品溶液
制备方法制备6份供试品溶液，结果甘草酸单铵盐
的平均质量分数为1．679mg／g，RSD为0．56％。
2．7稳定性试验：取供试品溶液，精密吸取10弘L，
每隔2h测定1次峰面积，共5次，结果其峰面积的
RSD为1．45％，表明供试品溶液在8h内稳定。
’
： 入 一
j 三 了 Z 。5一—■
|Imin
*一甘草酸单铵盐
*-glycyrrhizinicacidmonoammoniumsalt
图1甘草酸单铵盐对照品(A)、复方咳嗽枇杷颗粒(B)
和缺甘草的阴性对照(C)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsf Iycyrrhizinicacid
monoammoniumsaltreferencesubstance(A)。
compoundKesouPipaGranula(B)·andnega—
tivesample(C)
2．8 回收率试验：采用加样回收法。分别精密称取
含甘草酸单铵盐1．679mg／g的样品6份，各约0．5
g，分别精密加入0．862mg／mL(相当于甘草酸
0．8443mg／mL)甘草酸单铵盐对照品溶液1mL，
制备供试品溶液，测定，计算其平均回收率为
102．88％，RSD为1．11％。
2．9样品测定：分别取10批咳嗽枇杷颗粒(规格5
g／袋)，制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液
和供试品溶液各10肛L，进样，测定，采用外标法计
算，结果见表1。
表1 复方咳嗽枇杷颗粒中甘草酸的测定结果
Table1 ResultsofglycyrrhizinicacidinCompound
KesouPipaGranula
批号 甘草酸／(mg·袋1)批号 甘草酸／(rag·袋-1)
050501 8．495 050201 6．825
050502 8．184 050202 6．162
050503 8．312 050901 8．319
050301 7．792 050902 8．396
050302 8．331 050903 8．136
3讨论
3．1 检测波长的选择：参考《中国药典>>2005年版
一部四逆汤项下方法，选用250nm为检测波长。
3．2 流动相的选择：参考《中国药典>>2005年版一
部四逆汤项下方法，采用甲醇一0．2mol／I。醋酸铵一
冰醋酸(67：33：1)为流动相，经过试验，确定流动
万方数据
·716· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
相为甲醇一0．2mol／L醋酸铵一冰醋酸(63：37：1)
时，样品峰形对称，阴性无干扰。
3．3供试品提取方法的选择：采用甲醇为提取溶
剂，选用超声处理和加热回流两种提取方法进行比
较。结果超声2次，每次30min，仍有有效成分残
留，而加热回热60min时有效成分基本提取完全。
测定结果表明，选用甘草酸作为定量检测指标
以及建立的HPLC色谱条件，方法灵敏度高、专属
性强、重现性好，并通过对10批样品含量进行考察，
可作为复方咳嗽枇杷颗粒质量控制指标之一。
常规粉碎与超微粉碎的丹参中丹酚酸B的比较
张爱军1，戴 宁2
(1．天津天士力集团，天津300402；2．天津达仁堂制药厂，天津300457)
丹参为唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根及根茎，具有祛瘀止痛，活血通经，
清心除烦的作用。其主要成分为脂溶性化合物如丹
参酮ⅡA等，水溶性化合物如丹参素、总酚酸等。丹
酚酸B为总酚酸的主要成分，约占总酚酸的
70％[1]，具有改善血流循环、抗血栓、抗氧化等作
用[2]，临床上广泛应用于治疗心血管系统疾病。
有文献报道采用75％甲醇提取丹酚酸B，回流
提取30min即可达到峰值[3]，超声提取丹参中水溶
性成分20min时最佳[4]。超微粉碎技术采用机械或
流体动力的方式，将物料颗粒粉碎至粒径小于10
pm的颗粒D]，使细胞内的有效成分直接接触到提取
用的溶媒，从而达到缩短药材提取时间及提高药材
中有效成分的转移率。本实验以丹酚酸B为指标，
比较经超微粉碎和常规粉碎对丹酚酸B提取效果
的影响。
1仪器与材料
WatersAllicmce高效液相色谱仪，2695
SeparationsModule四元泵，真空脱气机，自动进样
器，柱温箱，Waters2996二级管阵列检测器，
Empower色谱工作站。DK一98～1型电热恒温水
浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)，JJ2000型精密
电子天平(常熟双杰测试仪器厂)，FW80型高速万
能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，KQ一
100DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)，BFM一6型粉碎机(济南倍力粉技术工程有
限公司)。试剂均为分析纯，纯化水，丹参药材来自陕
西商洛天士力丹参GAP基地，丹酚酸B对照品(中
国药品生物制品检定所)。
2方法与结果
收稿日期：2005—09-05
2．1 色谱条件[6]：色谱柱：KromasilC。。色谱柱(250
mm×4．6mm，5肛m)；流动相：甲醇一乙腈一甲酸一水
(30：10：1：59)；检测波长：286nm；体积流量：1
mL／min；柱温：25℃；进样量：10肛L。理论板数按丹
酚酸B峰计算应不低于2000。
2．2丹酚酸B对照品溶液的制备：精密称取丹酚
酸B对照品适量，加75％甲醇制成0．14mg／mL丹
酚酸B，作为对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：称取常规或超微粉碎的丹
参药材35g，加人75％乙醇350mL超声提取20
min，冷却，用75％乙醇补足质量，摇匀，滤过，取5
mL滤液，过0．45弘m微孔滤膜，取续滤液供HPLC
分析。
2．4 HPLC分析结果的比较：HPLC图谱见图1，
结果见表1。可以看出，常规粉碎的丹参提取液丹酚
酸B的量为1．12％，而超微粉碎为2．92％，为常规
粉碎的2．6倍。
*一丹酚酸B
图1丹酚酸对照品(A)、常规粉碎丹参(B)
和超微粉碎丹参(c)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfsalvianolicacidB
referencesubstance(A)，S．miltiorrhizaby
generalcommunication(B)andsuperfine
3讨论
communication(C)
、
万方数据
HPLC法测定复方咳嗽枇杷颗粒中甘草酸
作者： 李海燕， 黄能章
作者单位： 李海燕(佛山科技学院医学院,广东,佛山,528000)， 黄能章(广东怡康制药有限公司,广东
,广州,510520)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 1次

引证文献(1条)
1.蒋晔.郝福.李艳荣.任淑萌 HPLC同时测定桂枝颗粒中桂皮酸、芍药苷、甘草酸含量[期刊论文]-中国中药杂志
2008(2)


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