全 文 ：· 46· China Pharm acy 2004 Vol.15 No .1 中国药房 2004年第 15卷第 1期
·药品检验 ·
复方小叶枇杷片水煎液中总黄酮和黄芩苷含量测定
邱 雯 ,焦海胜 ,王彦恒 *(兰州医学院附属第二医院药剂科 ,兰州市 730030)
中图分类号 R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2004)01-0046-03
摘 要 目的:建立复方小叶枇杷片水煎液中总黄酮和黄芩苷的含量测定方法 , 为制剂质量控制提供依据 。方法:紫外分光光度
(UV)法测定总黄酮含量;反相高效液相色谱(RP -HP LC)法测定黄芩苷含量 ,采用 ZORBAX SB-C18色谱柱 ,流动相为乙腈-
水(27∶75),流速为 0.7ml/min ,检测波长为 280nm ,柱温为室温 ,外标法计算含量 。结果:UV 法测定总黄酮在 8.09 ～ 48.53μg/ml
浓度范围内线性关系良好 (r=0.9 999), 平均加样回收率分别为 100.33%、 99.79%、99.85%, 标准差分别为 1.53%、 1.27%、
1.76%(n=5)。RP -HPLC法测定黄芩苷在 3.84 ～ 57.60μg/ml浓度范围内线性关系良好 (r=0.9 998), 平均回收率分别为
100.93%、99.07%、100.90%,标准差分别为 1.50%、2.22%、1.09%(n=5)。结论:本方法测定结果准确 、可靠 ,重现性好 ,能满足
制剂中间体质量控制的要求 。总黄酮测定中反应时间和测定时间对测定结果影响较大 ,应严格控制 。
关键词 复方小叶枇杷片;总黄酮;黄芩苷;紫外分光光度法;反相高效液相色谱法
*兰州医学院药学院 1998级专题学生
Determination of the Contents of Total Flavone and Baical in in Decoction of Compound Xiaoyepipa Tablets
Q IU Wen , JIAN Haisheng ,WANG Yanheng(Dept.of Pharmacy , The Second Aff iliated Hospi tal of Lanzhou
M edical Co llege , Lanzhou 730030)
ABSTRACT OBJECTIVE:To determine the contents o f to tal flavone and baicalin in decoc tion o f compound Xiaoyepipa
t ablets so as to provide a basis f or qua lity contro l of the preparation.M ETHODS:The quantit ative de termina tion o f total flavone
w as perfo rm ed with UV -spec tropho tometry and that o f baicalin w ith RP -HPLC.The RP -HPLC conditions w ere :Zorbax
SB-C18 column(4.6mm ×15cm , 5μm)a t room temperature;flow ra te , 0.7m l/min;de tected w aveleng th , 280nm;acetonit rile-
w ate r(25 ∶75)adjusted pH to 2.7 by H 3PO 4 as mobile phase.The content o f baicalin was calcula ted by ex te rnal standard
method.RESU LTS:A linearity w as obtained f rom 8.09μg/m l to 48.53μg/ml of tot al flavone w ith a good corre la tion(r=0.9
999 ,n=6).The average recoveries and relative standard deviations(RSD)o f to tal f lavone were 100.33%,99.79%, 99.85%and
1.53%, 1.27%, 1.76%(n=5)respectively.A linearity w as obtained from 3.84μg/ml to 57.60μg/ml of baicalin w ith a good
correla tion(r=0.9 998 , n=7).The average recoveries and relative standard dev iations(RSD)of baicalin w ere 100.93%,
99.07%, 100.90%, and 1.50%, 2.22%, 1.09%(n=5)respectively.CONCLUSION :This m ethod is accurate , re liable and re-
peat able and can meet the demands of quali ty control fo r midbodies o f the preparation.In de termina tion of to tal flavone , the
dura tion of reaction and time of de termina tion should be strictly cont rolled becasuse o f t heir obv ious influence on the result s
obtained.
KEY WORDS compound Xiaoyepipa tablet ;to tal flavone ;baicalin;UV -spect ropho tometry ;RP -HPLC
复方小叶枇杷片是兰州医学院附属第二医院的院内制剂 ,
它由黄芩 、淫羊藿 、小叶枇杷 、莪术等 4味生药制成 。经 20多
年临床应用证实 , 它具有清热解毒 、化痰平喘 、止咳解痉的作
用 ,治疗慢性支气管炎有较好疗效 。它的有效成分为黄芩苷 、黄
芩素 [ 1 ] 、淫羊藿苷 、淫羊藿次苷 [2 ] 、槲皮素苷 、槲皮素 、棉子素等
黄酮类化合物 。笔者对其水煎液中黄芩苷和总黄酮进行中间体
含量测定 , 旨在为复方小叶枇杷片的制剂生产工艺流程进行动
态的质量控制及剂型改造提供依据 。
1 仪器与试药
1.1 仪器
2401型紫外分光光度计(日本岛津);HITACHI -655高
效液相色谱系统(日本日立);H ITACHI 638-0414可见紫外
检测器 (日本日立);CQ 50超声波清洗器 (上海超声波仪器
厂);YKH-I 型液体快速混合器(江西医疗器械厂);82-1型
离心机(江苏响水医疗器械厂);TGL -16GB小型通用离心机
(上海安亭科学仪器厂);TG2328A 分析天平 (上海天平仪器
厂)。
1.2 试药
芦丁对照品、黄芩苷对
照品 (中国药品生物制品检
定所);甲醇 、乙腈(均为色谱
纯), NaNO 2 、 Al(NO 3) 3 、
NaOH均为分析纯 , 水为重
蒸馏水 。黄芩 、淫羊藿 、小叶
枇杷 、莪术生药由兰州医学
院附属第二医院药剂科提
供 。
2 总黄酮含量测定
2.1 复方小叶枇杷片水煎
液的制备
按复方小叶枇杷片处方
称取生药 1份 ,浸泡 30min ,
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水煎两次 , 每次加 20倍量水 ,煎煮 1.5h [3 ] , 合并两次煎得液并
浓缩至 1g/ml ,备用 。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取恒重的芦丁对照品适量(0.2 022g), 置于 100m l
容量瓶中 ,用适量甲醇超声溶解 ,冷却至室温再用甲醇定容 ,摇
匀 ,即配得含芦丁 2.022mg/ml的对照品溶液 。再取上述溶液
10.0ml ,置于 100ml容量瓶中 ,用甲醇定容 ,摇匀 ,即配得含芦
丁 0.2 022mg/ml的对照品溶液 。
2.3 波长选择
取样品测定项下供试品 , 置于可见紫外分光光度计上进行
扫描 , 总黄酮反应产物在 500nm波长处有最大吸收 ,与文献报
道 [4 ]相一致。因此 , 选择 500nm 为测定波长 , 紫外扫描光谱详
见图 1。
2.4 线性关系及范围
分别精密量取 0.2 022mg/ml的芦丁对照品溶液 0 、 1.0 、
2.0 、 3.0 、 4.0 、 5.0 、 6.0m l , 置于 25m l容量瓶中 , 各加水至
6ml , 加 5%亚硝酸钠溶液 1ml , 混匀 , 放置 6min , 加 10%硝酸
铝溶液 1ml , 混匀 ,放置 6m in ,加 1mol/L 的NaOH试液10ml ,再
加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15min。以第 1管为空白 ,在 500nm波
长处测定吸收度 A [5 ,6 ] ,以吸收度(A)对溶液浓度(C)进行回归 ,得
线性方程 A=1.2 855×10 -2C —7.6 339×10 -4 r=0.9 999
(n=6)。可见 ,在 8.09 ～ 48.53μg/ml浓度范围内线性关系良好 。
2.5 样品含量测定
按处方制备 3批复方小叶枇杷片水煎液 , 每批各取 5份进
行样品测定 。
取复方小叶枇杷片水煎液 0.5ml , 置于 10ml 容量瓶中 ,
加适量甲醇超声 3min ,冷却至室温再用甲醇定容 ,摇匀 ,离心
(3 000r/min)5min , 取上清液 2.0ml , 置于 10ml容量瓶中 , 用
甲醇定容 ,摇匀 ,取 2.0ml置于 25ml容量瓶中 ,按照“2.4”项下
方法 ,自“加水至 6m l起 ,依法测定吸收度 A ,代入标准曲线计
算总黄酮含量 ,结果见表 1 。
表 1 复方小叶枇杷片水煎液中总黄酮含量测定结果(n=5)
Tab 1 Determination results of the contents of total
flavone in decoct ion(n=5)
样品编号 总黄酮含量(mg /ml) RSD(%)
1 31.86 1.52
2 33.95 0.12
3 31.91 1.08
x 32.57
2.6 稳定性考察
取制备好的样品溶液立即测定 ,然后每隔 3m in测定 1次 ,
共测 8次 。结果 , 吸收度值有逐渐下降的趋势 , 20min内测定
RSD=0.63%,详见表 2。
表 2 稳定性考察结果
Tab 2 Results of stability test
时间(min)
0 3 6 9 12 15 18 21
吸收度 0.3 359 0.3 347 0.3 336 0.3 333 0.3 326 0.3 318 0.3 307 0.3 295
2.7 加样回收率试验
取已知含量的复方小叶枇杷片水煎液适量 , 分别加入高 、
中 、低 3种不同浓度的芦丁对照品溶液各 5份进行加样回收试
验 。取复方小叶枇杷片水煎液 0.5ml ,置于 10ml容量瓶中 ,加
入 2.022mg/ml的芦丁标准液适量(1.0 、2.0 、3.0m l),按照样
品测定项下的方法 ,测定其总黄酮含量 ,并依法计算回收率 ,结
果见表 3 。
3 黄芩苷含量测定
3.1 溶液的制备
3.1.1 样品及阴性对照样品的制备:按 “2.1”项下方法制备
复方小叶枇杷片水煎液 。同法称取缺黄芩的处方药 , 制备阴性
对照样品 。
表 3 复方小叶枇杷片水煎液中总黄酮加样回收率测定结果
(n=5)
Tab 3 Results of recovery test for total flavone in decoc-
t ion(n=5)
组分 加入量(mg) 平均回收率(%) RSD(%)总黄酮 2.022 100.33 1.53
4.044 99.79 1.27
6.066 99.85 1.76
3.1.2 对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的黄芩苷对
照品适量 (4.8mg), 置于 25ml容量瓶中 , 用适量甲醇超声溶
解 ,冷却至室温 ,再用甲醇定容 ,摇匀 ,即得含黄芩苷 192μg/ml的对照品溶液 。分别精密量取上述对照品溶液 0.2 、0.5 、1.0 、
1.5、 2.0 、 2.5 、 3.0ml , 置于 10ml容量瓶中 , 用甲醇稀释至刻
度 。
3.1.3 样品溶液及阴性对照溶液的制备:精密吸取复方小叶
枇杷片水煎液 5.0ml , 置于 25ml容量瓶中 , 加水稀释至刻度 ,
摇匀 ,取 0.5ml置于 10ml容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,
离心(10 000r/min)5min ,取上清液 1ml ,加等量甲醇混匀后高
速离心(10 000r/min)5min ,再用 0.45μm滤膜过滤 ,即得样品溶液 。同法将阴性对照样品制成阴性对照溶液 。
3.2 色谱条件
色谱柱:Zorbax SB-C18(150mm×4.6mm , 5μm), 预柱:
S B-C18(12.5mm×4.6mm , 5μm);流动相:乙腈-水 (25∶
75), H3PO 4调 pH=2.7 [ 7 ～10 ] ;流速:0.7ml/min;检测波长:
280nm ;柱温:室温;进样量:20μl 。
3.3 色谱行为
将对照品溶液 、样品溶液及阴性对照溶液于上述色谱条件
下进样测定 ,黄芩苷的保留时间为 11.55min ,结果详见图 2 。
3.4 线性关系及范围
取上述配制的对照品溶液 , 各浓度取样 5次 , 每次进样
20μl ,照上述色谱条件测定 ,以峰高 H(mm)对标准溶液浓度 C
(μg/m l)进行线性回归 , 得线性方程 H=2.142C —2.245 ,
r=0.9 998(n=7)。可见 ,在 3.84 ～ 57.60μg/m l浓度范围内
线性关系良好 。
3.5 回收率试验
取阴性对照样品 5.0ml ,置于 25ml容量瓶中 ,加水稀释至
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刻度 , 摇匀 ,取 0.5ml置于 10ml容量瓶中 , 分别加入黄芩苷标
准溶液适量(2.0 、3.0 、4.0ml),各浓度重复 5份 ,再加甲醇稀释
至刻度 ,摇匀 ,按照样品溶液配制项下的方法 ,自“于试管中高
速离心(10 000r/min)5min”起依法制得溶液 ,进样 20μl ,测其
峰高 , 外标法计算黄芩苷含量 , 并依法计算回收率 , 结果见表
4 。
表 4 复方小叶枇杷片水煎液中黄芩苷回收率测定结果
(n=5)
Tab 4 Results of recovery test for baicalin in decoction
(n=5)
组分 加入量(μg) 平均回收率(%) RSD(%)黄芩苷 384 100.93 1.50
576 99.07 2.22
768 100.90 1.09
3.6 精密度考察
取供试品溶液分别进样 5次 , 每次 20μl , 求得黄芩苷的测定 RSD=0.31%。
3.7 稳定性考察
取浓度为 19.2μg/m l的黄芩苷对照品溶液 , 于 1 、2 、3 、4 、
5 、6 、7 、8h进样 ,结果 ,黄芩苷峰高基本不变 ,RSD=0.65%。
3.8 样品含量测定
分别制备 3个不同批号的样品 , 每批取样 5份 , 制备样品
溶液 , 取 20μl进样 , 按上述色谱条件测定峰高 , 外标法计算黄
芩苷含量 ,结果见表 5。
表 5 复方小叶枇杷片中黄芩苷含量测定结果(n=5)
Tab 5 Determination results of the contents of baicalin in
decoction(n=5)
样品编号 黄芩苷含量(mg /ml) RSD(%)
1 2.988 1.94
2 2.758 1.52
3 2.836 2.67
x 2.861
4 讨论
通过对复方小叶枇杷片中的各药味分析 , 笔者认为 , 其有
效成分为黄芩苷、黄芩素 、淫羊藿苷、淫羊藿次苷 、槲皮素 、棉子
素等组成的黄酮类化合物 ,它们结构相似 ,极性相当 ,很难逐个
进行含量测定 。因此 , 本实验选择建立复方小叶枇杷片中总黄
酮和黄芩苷的含量测定方法 。
由图 1可见 , 总黄酮在碱性条件下与亚硝酸钠 、硝酸铝反
应的产物在 500nm 波长处有最大吸收 ,与文献相符 。在经过多
次实验过程中发现 , 总黄酮反应产物不稳定 , 随着放置时间的
延长吸收度逐渐下降 , 因此测定含量时 , 要在样品溶液制备完
成的 20min内测定 。
参考文献
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(收稿日期:2003-07-15 修回日期:2003-08-19)
法可林滴眼液的稳定性研究
吴 伟 ,唐细兰 ,何梅凤 ,陈茂玲(中山大学眼科中心 ,广州市 510060)
中图分类号 R927.11 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2004)01-0048-02
摘 要 目的:考察法可林滴眼液的稳定性 。方法:采用紫外分光光度法测定法可林的吸收度 ,用初均速法对法可林滴眼液的稳定
性进行研究 。结果:法可林滴眼液的热解反应活化能为 25.681 kcal/mol ,室温(25℃)及 10℃下的贮存期分别为 88d和 878d 。结论:
采用初均速法测定法可林滴眼液的稳定性是切实可行的 。
关键词 法可林;滴眼液;稳定性;初均速法
Study on the Stabil ity of Phacol in Eye Drops
WU Wei , TANG Xilan , HE Meifeng , CHEN M aoling(The Zhong shan O phthalm ic Centre of Sun Yat-sen
University ,Guangzhou 510060)
ABSTRACT OBJECT IVE:To observe the st ability of phaco lin eye drops.M ETHODS:The content and the stability o f pha-
co lin eye drops w ere de termined by ultraviole t spect ropho tometry and the initial ave rage rate method respectively.RESULTS :
The activa tion energy fo r pyroly tic reaction of phcolin eye drops w as 25.681 kcal/mol , the she lflife of phacolin eye drops at
room tempera ture(25℃)and 10℃ were 88 and 878 days respectively.CONCLUSION :The determination o f the st ability o f
phacolin eye drops w ith initial average ra te met hod is useful and simple.
KEY WORDS phaco lin;eye drops;stability ;initial average ra te method