全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·269·
栽到自然环境中生长。
致谢：在切片，gg,0e曾得到华南农业大学生命
[6]
科学学院严学成教授的热心帮助。
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防己药材的HPLC指纹图谱研究
崔金国1’2，饶 毅“，魏惠珍1，黎 莉2，刘隆洪3，王跃生1，杨世林1
(1．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006；2．江西中医学院，江西南昌330006；
3．江西翔云生物药业有限公司，江西遂川 343900)
摘 要：目的 用HPLC法对防己药材指纹图谱进行研究。方法采用色谱条件：ShimadzuVP—ODS柱(250mm×
4．6ram)；流动相为乙腈一0．1％磷酸溶液，梯度洗脱进行色谱分离；检测波长为282nm；以防己诺林碱作为参照物。
结果 初步建立了防己药材的HPLC指纹图谱，并进行相似度评价。结论方法简单可行，能够有效地控制防己药
材的内在质量。
关键词：防己；指纹图谱；HPLC；相似度
中图分类号：R282．7R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0269—04
HPLCFingerprintofRadixStephaniaeTetrandrae
CUIJin—gu01～，RAOYil，WEIHui—zhenl，LILi2，LIULong～hon93，
WANGYue—shen91，YANGShi—linl
(1．NationalPharmaceuticalEngineeringCenter(NPEC)forSolidPrepa ationinChineseMateriaMedica，Nanchang
330006，China；2．JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330006，China；
3．JiangxiXiangyunBiologyPharmaceuticalCo．，Ltd．，Suichuan343900，China)
Abstract：ObjectiveTos udythefingerprintofRadixStephaniaeTetrandraebyHPI。C．Methods
HPLCcondition：COlumnShimadzuVP一0DS(250mm×4．6mm)；themobilephasewasacetonotrilewith
0．1％phosphoricacidandthegradientelutionm dewasappliedinchromatographicseparation；thedetee—
tivewavelengthwas282nm；fangchinolinewasusedasthereferencecompound，ResultsHPLCFinger—
printofRadixStephaniaeTetrandrawasestablishedandthesimilarityofthefingerprintwascompared．
收稿日期：2006—04—25
作者简介：崔金国(1978一)，男，江西中医学院药物分析专业硕士研究生。E—mail：lanshu2005@163．corn
*通讯作者饶毅Tel：(0791)7119609E—mail：raoyi99@126．com
万方数据
·270· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
ConclusionThemethodissimple，accurate，andc nb usedtocontrolthequalityofRadixStephaniae
Tetrandraeavailably．
Keywords：RadixStephaniaeTetrandrae；fingerprint；HPLC；similarity
防己为防己科粉防己SfephaniatetrandraS．
Moore的干燥根，粉防己根中含有粉防己碱、防己诺
林碱、轮环藤酚碱等成分，具有解热镇痛、风湿止痛、
利尿消肿之功效u]。自古以来临床常用的中药防己
分为汉防己(粉防己)[21和木防己两大类，素有“治风
用木防己，治水用汉防己”之说，可见其品种不一，功
用也有所不同一3]。为了使粉防己药材在GAP生产管
理中更加规范，本实验采用HPLC法建立了防己药
材的指纹图谱。
1仪器与试药
岛津LC一10ATVP高效液相色谱仪，SPD—
M10AVPDAD检测器，SIL一10ADVP自动进样
器，CI。ASSVP色谱工作站；ShimadzuAUw220D
型(十万分之一)电子天平；梅特勒AB一104N型电
子天平。乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为Milli—
pore超纯水。粉防己碱、防己诺林碱(中国药品生物
制品检定所，批号分别为0711-200005供定量测定
用，0793—200003供鉴别用)；防己药材来源于江西
遂川基地和市售样品，见表1，由江西中医学院中药
鉴定教研室傅小梅博士鉴定为粉防己S．tetrandra
S．Mogre的干燥根。
表1防己药材测试样品
Table1 TestsampleofRadixStephaniaeTetrandrae
编号 产地 生长期 编号 产地 生长期
】 江眄遂川(基地一) 3年生 8 江西遂川(基地二) 6年生
z 江西遂川(基地一) 5年生 9 江西遂川(基地二) 7年生
3 江婀遂川(基地一) 6年生 10 江西遂JIJ(基地二)10年生
4 江婀遂川(基地一) 7年生 11 江西九江(市售) 一
5 江瓯遂川(基地一)10年生1 2 江西上饶(市售) 一
6 江艇遂川(基地二) 3年生 13 安徽(市售) 一
7 江曲遂川I(基地二) 5年生 14 浙江(市售) 一
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：ShimadzuVP—ODS柱
(250mrn×4．6mm)；检测波长：282nm；体积流量：
1．0mI，／min；进样体积：10弘L；柱温：25‘C；流动
相：乙腈一0。1％磷酸溶液，梯度洗脱：0min：乙腈一
0．1％磷酸溶液(15：85)；20min：乙腈一0．1％磷酸
溶液(30：70)；40min：乙腈一0．1％磷酸溶液(40：
60)；60min：乙腈一0．1％磷酸溶液(80：20)。
2．2对照品溶液的制备：精密称取粉防己碱、防己
诺林碱对照品适量，用甲醇溶解，含防己诺林碱
0．05mg／mL，含粉防己碱0．1rng／mL，即得，色谱
图见图l。
B
20 25 30 35 40
t／mln
A一防己话林碱B一粉防己碱
A——fangchinolineB——tetrandrine
图1 防己诺林碱和粉防己碱的混合对照品图谱
Fig．1HPLCChromatogramoffangchinOline
andtetrandrine
2．3供试品溶液的制备：取同一批号药材样品粉末
(过3号筛)约0．5g，精密称定，精密加入甲醇溶液
25mL，称定质量，加热回流1h，放冷，再称定质量，
用甲醇补足减失的质量，滤过，即得。
2．4重现性试验：取同一批号防己药材粉末6份，
精密称量，制备供试品溶液，分别进样，测得结果表
明，各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积的
RSD均小于3％，表明样品重现性良好。
2．5精密度试验：取重现性试验供试品溶液，连续
进样5次，测得结果表明，各共有指纹峰的相对保留
时间和相对峰面积的RSD均小于3％，表明仪器精
密度良好。
2．6稳定性试验：取同一批号防己药材粉末，精密
称量，制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24h进
样，测得结果表明，各共有指纹峰的相对保留时间和
相对峰面积的RSD均小于3％，表明供试品溶液在
24h内稳定。
2．7指纹图谱的建立
2．7．1指纹图谱的测定：分别精密吸取对照如溶液
和供试品溶液各10弘L，注入高效液相色培仪，记录
60min的色谱图。
2．7。2共有峰的确定：按照《中药注射剂指纹图谱
研究的技术要求(暂行)》规定[4]，测定14批／f：问产
地不同生长时期及不同产地防己药材的指纹图谱，
其中8个峰为药材的共有指纹峰，以5号峰(防L诺
林碱)作为参照峰，计算各共有指纹峰的柏对保留时
间和相对峰面积的比值，结果见图2、3和表2、3。
～I}ii—
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·271·
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
t／min
图2 1号防己药材的HPLC图谱
Fig．2HPLCChromatogramofRadixStephaniae
Tetrandrae(No．1)
．．J。 』l 1 ．』“ ⋯l 一
StephaniaeTetrandrae
2．7．3指纹图谱的相似度计算：采用药典委员会推
荐的相似度评价软件(A、B版)，对14批防己药材
进行相似度评价。将药材指纹图谱导入相似度评价
软件，没定匹配模版，进行谱峰自动匹配，生成对照
指纹图谱，进行相似度评价，结果见图4和表4。
3讨论
3．1 利用高效液相色谱仪的二极管阵列检测器对
样品的吸收波长进行分析，结果在282nm检测波
长下，基线较稳定，色谱峰较多，信息丰富，故选择
282nnl为最终检测波长。
3．2采用多种提取方法，分别用三氯甲烷、醋酸乙
酯、甲醇、流动相作为溶剂进行回流提取。研究中发
表3 14批防己药材指纹图谱中共有峰的相对峰面积
Table3 Relativepeakareaofcommonpeaks
infingerprintof14batchesofRadix
StephaniaeTetrandrae
6．
——EU。．．．．一。。，：a。
0．00 8．70 17_3926．09 3476
t／rain
。j．．啊====一。=：二二=_==二二二二二
4348 5217 608
图4防己药材对照指纹图谱
Fig．4Comparisonf ngerprintofRadix
StephaniaeTetrandrae
表4 14批防己药材指纹图谱相似度结果
Table4 Similarityoffingerprintin14batches
ofRadixStephaniaeTetrandrae
编号 相似度 编号 相似度
8 0，9761 0．938
9 U．9862 0．969
10 O．9j73 0．965
ll 1)．9504 0．980
12 0，9485 0．951
13 0．9576 0．940
14 O．9697 0．985
万方数据
·272· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
(250mmX4．6mm，5肚m)，ShimadzuVP一0DS
(250mm×4．6ram)，DiamonsilTMC18(250mm×
4．6mm，5弘m)色谱柱，结果显示ShimadzuVP一
0DS(250mm×4．6ram)柱能够将药材各组分峰很
好地分开，达到比较理想的效果。
3．5 由生成指纹图谱可以看出，14批防己药材指
纹图谱中主要色谱峰的整体图貌基本一致。同时相
似度评价结果表明，同一基地和不同产地的相似度
计算结果均在0．9以上，相似度较高，说明地域性差
异不明显。利用药典委员会颁布的指纹图谱软件，能
够很好地对防己药材指纹图谱进行相似度评价。
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青牛胆SRAP标记反应体系的建立与优化
杨 兵，王天志。，罗 禹，陈 璐
(四川大学华西药学院，四J『『成都 610041)
摘要：目的为青牛胆的物种鉴定和遗传图谱的构建寻找一种新的途径。方法采用序列相关扩增多态性(Se—
quencerelatedamplifiedpolymorphism，SRAP)技术对青牛胆DNA进行PCR扩增，逐级优化反应参数。结果优
化得到稳定重复性好的青牛胆SRAP反应体系。结论SRAP技术在分子水平上对青牛胆进行鉴定是一种行之有
效的手段，为今后进一步的青牛胆物种鉴定、遗传图谱的构建等研究奠定基础。
关键词：青牛胆；SRAP；分子标记
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)02—0272—04
EstablishmentandoptimizationofSRAPreactionsysteminTinosporasagittata
YANGBing，WANGTian—zhi，LUOYu，CHENLu
(WestChinaSchoolofPharmacy，SichuanUniversity，Chengdu610041，China)
Abstract：ObjectiveTodevelopanewmethodforTinosporasagittataspeciesdentificationand
geneticmapconstruction．MethodsSequence——relatedamplifiedpolymorphism(SRAP)wasappliedfor
T．sagittatatOcarryonPCRamplificationofitsDNAandoptimizethereactionparametergradebygrade．
ResultsThestableandreproducibleSRAPr actionsystemofT．sagittatahasbeendeveloped．Conclu．．
sionSRAPisaneffectivemethodf rT．sagittataidentificationinmoleculardeg eeandithasetupa
foundationforthefurtherspeciesdentificationandgeneticmapconstructionofT．sagittata．
Keywords：Tinosporasagitt ta(Oliv．)Gagnep；sequence—relatedamplifiedpolymorphism(SRAP)；
mo】ecularm ker
青牛胆Tinosporasagittata(()liv．)Gagnep是
防己科青牛胆属植物，药用其块根，又称金果榄，为
《中国药典》历版所收载。有清热解毒、利咽止痛等功
效。目前药用青牛胆为野生，复杂的野外环境造成其
植株的形态变异。本课题材料采自四川巴中地区，其
植株形态差异极大。因此，从分子水平对青牛胆进行
物种鉴定以控制其药材质量变得日益重要。SRAP
(sequencerelatedamplifiedpolymorphism，序列相
关扩增多态性)是由Li等n3提出的一种新的分子标
记技术。SRAP标记是针对基因外显子中GC丰富
而启动子、内含子里AT丰富的特点来设计引物进
行PCR扩增，因不同个体的内含子、启动子与间隔
收稿日期：2006—08—08
作者简介：杨兵(1981一)，男，四川遂宁人，生药学研究生在读，主要从事天然药物品质评价与化学成分研究。
E—mail：only—miracle@tom．corn
*通讯作者王天志Tel：(028)85503639
万方数据
防己药材的HPLC指纹图谱研究
作者： 崔金国， 饶毅， 魏惠珍， 黎莉， 刘隆洪， 王跃生， 杨世林， CUI Jin-guo， RAO Yi
， WEI Hui-zhen， LI Li， LIU Long-hong， WANG Yue-sheng， YANG Shi-lin
作者单位： 崔金国,CUI Jin-guo(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330006;江西中
医学院,江西,南昌,330006)， 饶毅,魏惠珍,王跃生,杨世林,RAO Yi,WEI Hui-zhen,WANG
Yue-sheng,YANG Shi-lin(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330006)，
黎莉,LI Li(江西中医学院,江西,南昌,330006)， 刘隆洪,LIU Long-hong(江西翔云生物药
业有限公司,江西,遂川,343900)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)

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