全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月·615·
RP—HPLC法测定蓝桉果实总三萜酸中三种三萜酸
刘玉明1，吴玉田，柴逸峰2，娄子洋2
(1．海军医学研究所新药研究中心，上海 200433；2．第二军医大学药学院，上海200433)
蓝桉EucalyptusglobulusLabill．为桃金娘科
植物，蓝桉果实作为民间使用的一种中药，具有治疗
感冒发热、抗菌消炎、跌打损伤、抗癌以及治疗真菌
引起的皮肤病等作用。本课题组已对蓝桉果实进行
过资源调查叫、挥发性成分研究嘲，同时在对蓝桉果
实的有效部位化学成分进行研究时发现蓝桉果实富
含有三萜酸[3]。对其提取所得到的总三萜酸
(Eucalyptustriterpenoidacids，简称ETA)曾用比
色法进行过定量测定[4]，为了进一步深入研究蓝桉
果实中的ETA，本实验采用RP—HPLC法，对其中
成分明确的3种三萜酸——熊果酸、桦木酮酸、白桦
脂酸进行了测定。本研究建立了分离效果好、专属性
强的高效液相色谱法测定其中的3种三萜酸的方
法，结果满意，可作为蓝桉果实中ETA质量控制的
指标之一。
1仪器与试药
高效液相色谱仪，包括Waters510泵(Waters
公司生产)，2487可见一紫外检测器(Waters公司生
产)，威玛色谱工作站；VarianC ry一100紫外分光
光度仪(美国Varian公司生产)；BUCHIR--200旋
转薄膜蒸发仪；SB--3200超声波清洗仪(上海必能
信超声有限公司)；ETA样品为中试工艺自制；熊果
酸、桦木酮酸、白桦脂酸对照品为自制，分别经IR、
MS、1H—NMR、13C—NMR鉴定，HPLC检测质量分
数>99．o％；乙腈、甲醇为色谱纯。蓝桉果实为资源
调查时亲自采集而得，经第二军医大学生药教研室
郑汉臣教授鉴定为桃金娘科植物蓝桉E．globulus
Labill．的果实。
ETA的制备：称取蓝接果实2妇，粉碎，经石
油醚脱脂之后，加入95％乙醇lOL，浸泡，收集渗
漉液，减压回收至质量浓度为2．5g／mL。然后经过
大孔树脂吸附，梯度洗脱后，收集80％乙醇洗脱
物，减压回收，浓缩，得淡黄色粉末12．8g，即总三
萜酸。
2方法与结果
2．1 色谱条件：Hypersil--C18色谱柱(250mm×
4．6mm，5wm)；流动相：乙腈一水(81：19)；柱温：
室温；进样量：20弘L；体积流量：0．8mL／min；灵敏
度：1．00AUFS；检测波长：205nm。
在上述色谱条件下，所测组分的理论塔板数均
大于3000，分离度>1．5。所得的对照品、样品的色
谱分离图见图1。
0 5 10 15 200 5 10 15 20
f，min
1一白桦脂酸2一熊果酸3一桦木酮酸
1-betulinicacid2-ursolicac d3-betulonicacid
围1对照品(A)及样品溶液(B)的HPLC图
Fig．1HPLCChromatogramsfreference
substance(A)andsample(B)
2．2对照品溶液的制备：精密称取对照品熊果酸
12．40mg、白桦脂酸6．18mg、桦木酮酸5．40mg，
以流动相定容至100mL作为对照品储备液，备用。
2．3供试品溶液的制备：精密称取自制ETA供试
品粉末1．01mg，无水乙醇溶解并稀释，配制成100
}tg／mL的溶液，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
2．4线性关系考察：精密量取3种对照品混合溶液
l、3、5、7、10mL，分别用流动相定容至10mL量瓶
中，摇匀。分别精密吸取上述标准系列溶液20肛L，
在上述色谱条件下测定峰面积，以峰面积积分值为
纵坐标，以样品质量浓度为横坐标，进行线性回归，
熊果酸、白桦脂酸、桦木酮酸的线性回归方程依次
为：Y一69573X+27482、Y一52997X+13254、
y一40230X一14722，线性范围分别为12．4～
124、6．18～61．8、5．4～54．0ptg／mL，相关系数分别
为0．9995、0．9990、0．9997。
2．5精密度试验：精密吸取对照品溶液20弘L，重
收稿日期：2006—07—10
基金项目：“十五”军队重点课题基金资助项目(012064)
作者简介：刘玉明(1974一)，男，山西和顺人，药学博士，助理研究员，主要研究方向为质量标准及中药现代化研究。
E—mail：xiaoliu888627@sohu．com
*通讯作者吴玉田E—mail：wuytk@online．sh．ca
万方数据
·616· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4,El
复进样5次，以峰面积计算，熊果酸、白桦脂酸、桦木
酮酸的RSD分别为2．O％、1．3％、0．8％(，z一5)。
2．6重复性试验：精密称取自制ETA粉末1．01
mg，加无水乙醇加热溶解，并定容至10mL量瓶
中，摇匀，滤过，同法制备5份样品。按2．1“色谱条
件”分别进样5次，样品中含熊果酸、白桦脂酸、桦木
酮酸的量分别为7．25％、33．83％、2．42％(咒一5)，
RSD为1．3％、1．8％、0．8％(咒一5)。
2．7 稳定性试验：取已经配制好的样品溶液，按
2．1“色谱条件”，分别在1．0、2．0、4．0、8．0、12．0h
进样，测定各成分的质量分数，样品中熊果酸、白桦
脂酸、桦木酮酸的RSD分别为2．O％、1．9％、1．O％
(挖一5)。说明3成分的乙醇溶液在12h内稳定。
2．8加样回收率试验：精密量取已测定量的溶液样
品3份，向每份样品加入1mL熊果酸(100．5．g／
mL)、1mL白桦脂酸(300．4／19／mL)、1mL桦木酮
酸(5．1ptg／mL)的对照品溶液，然后用流动相定容
于10mL量瓶中，待测。精密吸取供试液20pL注
入HPLC仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，
熊果酸、白桦脂酸、桦木酮酸的平均回收率分别为
102．7％、98．4％、100．9％，RSD分别为1．1％、
0．9％、1．0％。
2．9样品测定：精密吸取供试品溶液20肛L注入
HPLC仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，测
定从3个产地蓝桉果实中制备的ETA样品，样品
中3成分结果见表1。
表1样品中3种三萜酸测定结果(厅一3)
Table1 Determinationofthreetriterpenicacids
insamples(掸一3)
3讨论
3．1检测波长的选择：分别取熊果酸、白桦脂酸、白
桦脂酮对照品溶液，在紫外分光光度计上进行扫描，
各对照品均在205nm处有最大吸收，在其他波长
处无吸收，因此选205nm作为检测波长。
3．2流动相的选择：取熊果酸、白桦脂酸、桦木酮酸
3种对照品混合溶液，进样分析。色谱柱采用
Hypersil--C18柱(250nlm×4．6mm，5gm)，当流
动相为甲醇一水(70：30)时，基本能分离开，但由于
甲醇末端吸收较强，基线不平稳且有漂移；之后采用
甲醇一水系统的不同比例，峰形和分离度很好，但基
线仍不好。改用乙腈一水系统，基线很好，考察了乙
腈一水(70：30)为流动相，基本分离开，但保留时间
较长，白桦脂酸(21．7min)、熊果酸(24．6min)、白
桦脂酮(26．8min)。后经过调整比例到乙腈一水
(81：19)为流动相时，峰形及分离度均较好，故选
此为流动相。
3．3 ETA作为蓝桉果实的主要药用部位，具有明
显的药理活性。本实验通过对ETA中3种三萜酸
的测定，可作为蓝桉果实中ETA质控指标。
References：
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万方数据
RP-HPLC法测定蓝桉果实总三萜酸中三种三萜酸
作者： 刘玉明， 吴玉田， 柴逸峰， 娄子洋
作者单位： 刘玉明(海军医学研究所,新药研究中心,上海,200433)， 吴玉田,柴逸峰,娄子洋(第二军医
大学药学院,上海,200433)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(4)
被引用次数： 1次

参考文献(4条)
1.Liu Y M;Li S F;Wu Y T Resources investigation of medical plants of Eucalyptus L.Herit[期刊论文]-中
草药 2003(10)
2.Liu Y M;Chai Y F;Wu Y T Determination of chemical constituents of essential oil from the fruit of
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3.Chen B;Zhu M;Wu Y T Studies on chemical constituents in fruit of Eucalyptus globulus[期刊论文]-中
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4.Liu Y M;Chai Y F;Wu Y T Determination of total triterpene of fruit of Eucalyptus globulus
Labill.in vanillinglacial acetic acid system by spectrophotometry[期刊论文]-中国医院药学杂志
2005(01)

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引证文献(1条)
1.隋晓丽.娄红祥 一口钟化学成分及质量控制研究概况[期刊论文]-中药材 2011(5)


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