全 文 ：·242· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
板蓝根体外抗单纯疱疹病毒I型作用
方建国1，汤 杰1，杨占秋2，胡 娅1，刘云海1，王文清1
(1．华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部，湖北武汉430030；
2．武汉大学医学院病毒学研究所，湖北武汉430071)
摘 要：目的探讨板蓝根5个化学部位体外抗单纯疱疹病毒I型(HSV—I)的活性及作用机制。方法利用
Hep一2细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性，测定板蓝根不同
化学部位抑制HSV—I对Hep一2细胞感染的作用；以治疗指数(TI)为评价指标，比较各部位抗病毒活性强弱。结
果板蓝根各部位均有抑制HSV—I生物合成作用，其中IV部位活性最强，TI为8．2；Ⅱ部位对HSV—I有直接灭活
作用；各部位均不能阻止HSV—I侵入细胞。结论板蓝根在体外主要通过抑制生物合成而发挥抗HSV—I作用。
关键词：板蓝根；单纯疱疹病毒I型(HSV—I)；抗病毒作用
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)02—0242—03
EffectofRadixIsatidisagainstherpessimplexvirustypeI invitro
FANGJian—gu01，TANGJiel，YANGZhan—qiu2，HUYal，LIUYun—hail，WANGWen—qin91
(1．DepartmentofPharmacy，TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversity
ofScienceandTechnology，Wuhan430030，China；2．InstituteofVirology，
MedicalCo legeofWuhanUniversity，Wuhan430071，China)
Keywords：RadixIsatidis；herpessim lexvirustypeI(HSV—I)；antiviraleffect
单纯疱疹病毒(herpessimplexvirus，HSV)
是人类病毒感染性疾病中最常见的病毒，人群中
HSV感染非常普遍，经统计感染率在90％以上[1]。
其中，单纯疱疹病毒I型(HSV—I)引起的单纯疱疹
病毒性角膜炎(HSK)是一种主要的致盲性角膜
病[2]。板蓝根系十字花科植物菘蓝Isatisindigotica
Fort．的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效，
是公认的有较好抗病毒效果的中药之一。临床运用
板蓝根治疗单纯疱疹病毒性角膜炎取得了良好的效
果[3]。为进一步证实板蓝根抗HSV—I的作用，明确
其抗病毒作用机制，本研究利用Hep一2细胞体外培
养系统，对其不同化学部位进行体外抗HSV—I的
实验。
1材料
1．1药材及其化学部位的制备：板蓝根采自安徽毫
州，经华中科技大学同济医学院附属同济医院
药学部方建国教授鉴定为十字花科植物菘蓝j．
indigoticaFort．的干燥根。药材粉碎成粗粉，以
95％乙醇渗漉提取，渗漉液合并浓缩得到板蓝根乙
醇总提取物(下简称总提取物)。拌以硅藻土采用系
统溶剂分离法，依次以石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁
醇、水加热回流提取，回收溶剂得到5个不同极性的
化学部位浸膏(按原生药量计，得率分别为2．0％、
2．2％、0．6％、1．5％、2．1％，编以代码简称板蓝根
I～V，各部位分别含腺苷0．004％、0．010％、
0．005％、0．042％、0．025％)。各部位按中药注射剂
工艺配液、灌封、灭菌，制备供试品液。
1．2病毒：以HSV—IF株，作为标准株，武汉大学
医学院病毒学研究所提供。在Hep一2细胞上测定
HSV—I病毒半数组织细胞感染剂量TCID。。，实验
用感染量为100TCID。。。
1．3细胞：人喉癌上皮细胞(Hep一2细胞)，武汉大
学临床病毒学研究所提供。培养用MEM培养基+
10％小牛血清，常规加入青霉素(100U／mL)、链
霉素(100pg／mL)。
1．4试剂：噻唑蓝(MTT，FlukaBiochemika公
司)，二甲基亚砜(DMSO，上海菲达有限公司)。
1．5仪器：IF一1型紫外透射反射分析仪(上海长明
光学电子仪器厂)，CO。培养箱(美国Forma公司)，
SIK一202型净化工作台(安徽蚌埠净化设备厂)。
收稿日期：2004—05—18
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39800193)
作者简介：方建国(1965一)，男，河南信阳人，副主任药师，博士，硕士生导师，主要从事中药药效的物质基础与标准化研究，现代中药制
剂与分析研究，现主持、参与国家自然科学基金课题项目2项，在国内外医学权威期刊上发表论文10余篇，参编学术专著2
部。Tel：(027)83649095E—mail：fj93560@sina．tom
万方数据
冲草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·243·
2方法
2．1 药物细胞毒性测定：将细胞悬液稀释成8×
104／mL，接种96孑L细胞培养板中，每孔200弘L，置
37℃、5％CO：、100％相对湿度的培养箱中培养24
h后，分别在各孔中加入总提取物和I～V部位供
试品液，药物质量浓度为2、4、8、16、32、64、128rag／
mL，相同条件下继续培养33h。观察细胞病变
(CPE)情况，并以MTT法检测细胞存活率。每一
药物浓度重复4孑L，另设正常细胞对照。
2．2药物对HSV—I的直接灭活作用：将不同质量
浓度供试品液与100TCID。。／o．1mL的HSV—I等
体积混合，37℃作用90min后，以此病毒药物混合
液感染Hep一2细胞。37℃、5％CO。吸附90min，洗
涤，加细胞维持液置37℃、5％CO。培养。每日观察
CPE，72h后以MTT法检测病毒抑制率。采用治疗
指数(treatmentindex，TI)作为评价指标来衡量
药物对病毒的抑制效力。每一药物浓度重复4孔，
同时设置正常细胞对照、药物对照及病毒对照。
2．3药物对HSV—I侵入细胞的阻断作用：用药物
预先处理细胞90min，洗涤后以100TCID。。／o．1
mL的HSV—I攻击，37℃、5％C0。吸附90min后
洗涤，同2．2项方法培养与检查。
2．4药物对HSV—I生物合成的抑制作用：以100
TCID50／o．1mLHSV—I感染细胞，吸附90min后
洗涤，加入不同浓度供试液，同2．2项培养与检查。
2．5细胞存活率测定：采用改进的MTT法“]，吸
出培养液，每孔加入MTT(5mg／mL)100肛L继续
培养2h，每孔加DMSO100肛L，振荡混匀后立即
在570am波长下测定吸光度A值。
细胞存活率=(药物组平均A值／细胞对照组平均A
值)×100％
病毒抑制率一(实验组平均A值～病毒对照组平均A
值)／(药物组平均A值一病毒对照组平均A值)×100％
治疗指数(TI)一半数毒性浓度(TC。。)／半数抑制浓度
(IC50)
3 结果
3．1 药物对细胞的毒性作用：供试品液对Hep一2
细胞的毒性作用表现为细胞增殖缓慢、颗粒较多、折
光性强、形态改变、部分细胞破碎脱落。由于细胞代
谢活性降低或死亡，MTT法检测到的活细胞数减
少，故A值下降。结果表明，总提取物毒性较大，
TC。。值为3．6mg／mL，I～V部位TC。。值分别为：
15．2、23．9、>128、17．2和38．2mg／mL。
3．2药物对HSV—I的直接杀伤作用：HSV—I感
染所致的Hep一2细胞CPE特征为细胞肿胀、变圆、
细胞间融合、脱落、碎裂。总提取物及I、11I～V各
部位不同浓度组均出现典型的HSV—I感染所致
CPE，且病毒抑制率与病毒对照组差异无显著性，说
明以上各部位不能直接灭活HSV—I。Ⅱ部位在
2～8mg／mL，随着药物浓度增加，HSV—I所致的
CPE程度降低，病毒抑制率与药物浓度呈正相关，
说明该部位具有直接灭活HSV—I的作用。其对
HSV—I的IC。o为4．9mg／mL，TI为2．2。
3．3药物阻止HSV—I侵入细胞的作用；各部位不
同浓度组均出现典型的CPE，且病毒抑制率与病毒
对照组差异无显著性，说明板蓝根各部位对病毒侵
入细胞均无阻断作用。
3．4药物对HSV—I生物合成的抑制作用：实验结
果表明，板蓝根各部位均能明显抑制HSV—I生物
合成，这表现在：随着各部位药物浓度的增加，细胞
肿胀、变圆、脱落、碎裂等典型CPE特征逐渐减弱，
病毒抑制率(细胞存活率)明显升高。根据各部位
抑制HSV—I生物合成的TI值不同，将它们归为3
类：(1)高效：TI>6，即Ⅳ部位；(2)有效：3
部位。结果见表1。
表1板蓝根不同化学部位对HSV—I生物合成的抑制作用
Table1 Inhibitoryeffectsofdifferentchemicalfr ctionsofRadixlsatidisonbiosynthesisofHSV-I
*一表示此项未做
*--undetected
万方数据
·244· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
4讨论
HSV—I的基因为双链DNA，易与宿主DNA
发生整合。病毒严格寄生在细胞内，使得药物杀伤病
毒的同时对机体细胞也有损害。现有的抗疱疹病毒
化学药物因为毒性太大或耐药性的产生，其临床难
以取得令人满意的效果。传统中药的多靶点作用机
制、较少不良反应、无耐药性等优点表现出诱人的应
用前景，筛选高效低毒的抗病毒中药是当前抗病毒
研究热点之一。对清热解毒类中药的现代研究发现
其中不少中药具有抗病毒作用，除杀灭病原微生物
外，还具有多种免疫学活性，能非特异性增强免疫系
统功能，改善机体状况，增强对各种感染的抵抗力。
如果能够明确这类药物的抗疯毒作用，其意义是不
言而喻的。
板蓝根是清热解毒类中药的典型代表，应用于
临床多年，其传统清热解毒功效已得到认同，尤其是
对于病毒感染性疾病的治疗。国内外学者对板蓝根
进行了大量的研究，但是板蓝根中究竟何种成分起
主导作用，是作用于单一靶点还是作用于不同部位
协同表现其抗病毒作用尚无定论。本实验初步研究
了板蓝根的抗病毒的活性成分及作用机制，结果显
示，板蓝根不同化学部位的抗病毒作用强度有较大
差异，但其相关活性物质并未集于某一个单一的化
学部位，表明板蓝根是通过多种有效成分，多环节、
多途径地发挥协同作用而表现出抗病毒功效。抑制
HSV—I的生物合成是板蓝根抗病毒的主要作用途
径，其中Ⅱ部位尚能直接杀灭病毒。HSV—I是有包
膜的病毒，最外层的包膜由脂质和糖蛋白组成，其中
任何一种成分改变，即可使包膜变性，从而灭活病
毒，故推测Ⅱ部位中的某些化学成分能使病毒包膜
变性以灭活病毒。本研究结论将指导笔者进一步提
取分离板蓝根中与抗病毒功效相符的活性物质，并
为深入探讨其作用机制提供科学依据。
References：
Eli WangJ，LiYX，ZhangY．Cloning，expressionofHSV—IgG
genefragmentandidentificationofthexpressedproteinEJ]．
JChinBiotechnol(中国生物工程杂志)，2003，23(6)：55—
63．
Ez3YanM，WangYC，XiaDZ．EffectionofFlosLoniceraeCo
solutionagainstherpessimplexvirusI invitro口]．JChin
PractOphthalmol(中国实用眼科杂志)，1998，16(2)：
82—84．
[3]LiaoZM．ClinicalapproachofBanlangenInjectionreating
herpessimplexk ratitisl-J]．JChinPractOphthalmol(中国
实用眼科杂志)，2003，21(3)：232—233．
I-4]LiDH，TianZG，ZhangJ，eta1．TheuseofMTTassayfor
therapidtestingofcytotoxicityofdrugsagainston—solid
tumorcellsI-J]．Cancer(癌症)，1991，10(3)：226．
蟾蜍灵对白血病U937细胞生长抑制和凋亡诱导作用
贾彩云1，呼文亮2，俞小瑞3，于杰3，徐瑞成2
(1．河南大学医学院细胞和分子免疫学研究室，河南开封475001；2．武警医学院生物化学教研室，天津300162；
3．西安交通大学医学院生物化学教研室，陕西西安710061)
蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一，蟾蜍毒素
具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用，
已被广泛应用于临床。近年来发现，含有蟾蜍毒素的
中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长，诱导白
血病细胞的分化。临床观察提示，含有蟾蜍毒素的中
药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明
显的抑制作用。Numazawa[1]研究表明，蟾蜍毒素的
各种成分以剂量依赖的方式抑制K562细胞生长。
在所有的蟾蜍毒素中，蟾蜍灵是诱导白血病细胞分
化最有效的成分，蟾蜍灵在较低浓度(1×10_8～
1×10_9tool／L)能够在较宽的范围内(有较宽的白
血病细胞谱)引起人白血病细胞分化[2’3]。在较高的
浓度(≥1×10-7mol／L)诱导人白血病细胞凋
亡[4]。本实验以蟾蜍灵单体作用U937细胞株，研究
其抑制自血病细胞生长和诱导凋亡作用。
1材料与方法
1．1药品、试剂和仪器：蟾蜍灵由天津药物研究院
制备，纯度大于99．5％，用无水乙醇配制成母液，用
D—Hanks液稀释，乙醇控制在体积分数小于0．1％
(预试验表明该体积分数的乙醇对细胞没有影响)。
收稿日期：2004—05—18
基金项目：天津市自然科学基金资助项目(013804311)
作者简介：贾彩云(1973一)，女，河南洛阳人，理学硕士，讲师，主要从事药物诱导肿瘤细胞凋亡及分子机制研究。Tel：(0378)5654398
E—mail：jlacy602@sina．eom，caiyunjia@henu．edu．cn
万方数据
板蓝根体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用
作者： 方建国， 汤杰， 杨占秋， 胡娅， 刘云海， 王文清， FANG Jian-guo， TANG Jie，
YANG Zhan-qiu， HU Ya， LIU Yun-hai， WANG Wen-qing
作者单位： 方建国,汤杰,胡娅,刘云海,王文清,FANG Jian-guo,TANG Jie,HU Ya,LIU Yun-hai,WANG
Wen-qing(华中科技大学同济医学院附属同济医院,药学部,湖北,武汉,430030)， 杨占秋
,YANG Zhan-qiu(武汉大学医学院病毒学研究所,湖北,武汉,430071)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(2)
被引用次数： 27次
参考文献(4条)
1.Wang J;Li Y X;Zhang Y Cloning,expression of HSV-IgG gene fragment and identification of the
expressed protein[期刊论文]-中国生物工程杂志 2003(06)
2.Yan M;Wang Y C;Xia D Z Effection of Flos Lonicerae Co solution against herpes simplex virus I in
vitro 1998(02)
3.Liao Z M Clinical approach of Banlangen Injection treating herpes simplex keratitis[期刊论文]-中国
实用眼科杂志 2003(03)
4.Li D H;Tian Z G;Zhang J The use of MTT assay for the rapid testing of cytotoxicity of drugs
against non-solid tumor cells 1991(03)
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2. 方建国.胡娅.汤杰.王文清.杨占秋.FANG Jian-guo.HU Ya.TANG Jie.WANG Wen-qing.YANG Zhan-qiu 大青叶抗
单纯疱疹病毒Ⅰ型的活性研究[期刊论文]-中国中药杂志2005,30(17)
3. 陈百泉.李百成.CHEN Bai-quan.LI Bai-cheng 板蓝根含片的抗病毒作用研究[期刊论文]-河南大学学报（医学
版）2006,25(4)
4. 金明哲 板蓝根提取物增强机体功免疫能及抗流感病毒FM<,1>的作用[学位论文]2006
5. 赵艳玲.肖小河.胡艳.廖庆文.王伽伯.貌盼勇.ZHAO Yan-Ling.XIAO Xiao-He.HU Yan.LIAO Qing-Wen.WANG Jia-
Bo.MO Pan-Yong 生物热力学法比较板蓝根不同提取部位的抗病毒作用[期刊论文]-解放军药学学报2005,21(6)
6. 金明哲.任东鲜.孟繁平.李晓眠.JIN Ming-zhe.REN Dong-xian.MENG Fan-ping.LI Xiao-mian 板蓝根对机体免
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2005,24(2)
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1.解光艳.程惠娟 中药抗单纯疱疹病毒实验研究进展[期刊论文]-安徽中医学院学报 2011(3)
2.麻延峰.王宏艳.傅春泉.周文仙 板蓝根多糖对PRRSV疫苗的免疫增强试验[期刊论文]-家畜生态学报 2011(6)
3.司梁宏.陶震.刘静.刘梅.邱彦 十味板蓝根颗粒剂抗病毒作用的实验研究[期刊论文]-中国药物应用与监测
2011(5)
4.谷中瑞 病毒宁体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的活性研究[期刊论文]-河北医药 2009(12)
5.杜萍.方辉.高万.侯建国.刘圆圆.赵烽 板蓝根提取物对RAW264.7细胞生成NO及表达iNOS的影响[期刊论文]-亚太
传统医药 2012(9)
6.石磊.万宗明.董瓅瑾.赵艳威 四种板兰根提取物抗流感病毒作用实验研究[期刊论文]-武警医学院学报 2010(9)
7.许小琴.李青.郜平光.范燕月.王志刚 板蓝根多糖抗小鹅瘟病毒的作用[期刊论文]-中国兽医学报 2008(11)
8.吴国江.秦桂芳.李术娜.朱宝成 中药制剂病毒宁抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的活性[期刊论文]-河北农业大学学报
2007(4)
9.董伟.张军峰.何立巍.高峰.佟书娟.詹瑧 板蓝根活性部位抗单纯疱疹病毒1型分子机制的研究[期刊论文]-时珍国
医国药 2011(2)
10.李向荣.杭东跃.邱建平.刘奇 综合治疗小儿疱疹性口炎的疗效观察[期刊论文]-中国妇幼保健 2009(4)
11.孙秀霞.张丽莉.孙翠兰 板兰根抗病毒有效部位研究[期刊论文]-中国药理学通报 2007(6)
12.孙秀霞.张丽莉.孙翠兰 板兰根抗病毒有效部位研究[期刊论文]-中国药理学通报 2007(6)
13.徐桂花.张继环.乔建卫.苏瑞强.赵志全.孙宗喜 HPLC波长切换技术同时测定板蓝根中4种活性成分含量[期刊论
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15.叶常青.陈怡禄 中药制剂抗病毒作用的研究进展[期刊论文]-医药导报 2007(12)
16.方建国.万进.汤杰.王文清.刘云海 板蓝根防治病毒感染性疾病的研究概况[期刊论文]-中国中药杂志 2009(24)
17.魏风香.商蕾.曲章义.陈晶.高虹.王鹏.张鸿彦 松针油体外抗腺病毒作用研究[期刊论文]-中草药 2007(7)
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26.方建国.刘云海.王文清.汤杰.施春阳 板蓝根清热解毒实质研究[期刊论文]-中草药 2008(3)
27.孙小兵.盛家荣.王定培 南板蓝根化学成分及药理作用研究[期刊论文]-广西师范学院学报（自然科学版）
2008(4)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200502034.aspx