全 文 ：·1678· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
药理与临床
p1整合素在淋巴瘤中的表达及姜黄素对其的影响
吴秋玲，陈 燕，张 纯，何静
(华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所，湖北武汉430022)
摘 要：目的 研究p1整合素在淋巴瘤中的表达及姜黄紊对其的影响。方法免疫组化法检测B细胞淋巴瘤、T
细胞淋巴瘤和反应性增生淋巴结中p1整合素表达的差异；流式细胞术检测Raji细胞、Daudi细胞和正常人外周血
淋巴细胞p1整合素表达的差异；流式细胞术和RT—PCR方法检测姜黄素对Raji细胞p1整合素mRNA和蛋白水
平的影响。结果 p1整合素在Raji细胞中高表达，Daudi细胞及正常B淋巴细胞中p1整合素表达水平很低；T细
胞淋巴瘤淋巴结和反应性增生淋巴结pl整合素表达显著低于B细胞淋巴瘤淋巴结；低浓度姜黄紊即能显著抑制
p1整合素的表达。结论p1整合素在Raii细胞中高表达，在正常人淋巴结和外周血淋巴细胞中低表达，且p1整合
素在不同类型淋巴瘤中的作用不同。姜黄素能显著抑制口1整合素的表达，有希望成为抑制淋巴瘤侵袭、转移的新药。
关键词：p1整合素；姜黄素；淋巴瘤
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)11—1678—04
PlIntegrinexpressioninlymphomaandodulatoryeffectofcurcuminont
WUQiu—ling，CHENYan，ZHANGChun，HEJing
(InstituteofHematology，UnionHospital，TongjiMedicalCo lege，HuazhongUniversity
ofScienceandTechnology，Wuhan430022，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethexpressionof口1i tegrininlymphomaandodulatoryeffect
ofcurcuminon t．MethodsImmunohistochemistrywasusedtodetectthedifferenceof61integrin
expressioninB—lymphoma，T—lymphoma，andreactivehyperplasiaymphnodes．Flowcytometrywasused
tOdetectthedifferenceof61integrinexpressioninRajicells，Daudicells，andlymphcellsinnormal
humanperipheralblood．Flowcytometryandeversetranscriptase—polymerasechainreaction(RT—PCR)
methodswereusedtOdeterminetheffectofcurcuminon81integrinmRNAandproteinlevelofRajicells．
Results61IntegrinwashighlyexpressedinRajicellsbutlowlyexpressedinDaudicellsandnormalB
lymphocyte．p1IntegrinexpressioninlymphnodeofTlymphomaandreactivehyperplasiaymphnode
weresignificantlylowerthanthatinlymphnodeofBlymphoma．Curcuminatlowconcentrationc n
markedlyinhibitthexpressionofB1integrin．Conclusion61IntegrincabehighlyexpressedinRaji
cellsbutlowlyexpressedinnormalhumanlymphnodesandlymphocyteofperipheralblood．The
expressionlevelfB1integrininvarioustypesoflymphomaisdifferent．Curcumincanmarkedlyinhibit
thexpressionofp1integrinandmaybeanewdrugwhichaninhibittheinvasionandmetastasisof
lymphoma．
Keywords：81integrin；curcumin；tymphoma
整合素是由a和p亚单位通过二硫键形成的异
质性二聚体跨膜糖蛋白，与细胞外基质成分及细胞
骨架结合而形成配体一整合素一细胞骨架跨膜信息系
统，介导肿瘤细胞的黏附和转移，阻抑细胞的凋亡，
具有重要的生理和病理意义。但目前对整合素在淋
巴瘤中的作用及调控因素还不甚了解，本实验对此
进行研究。
1材料与方法
1．1 细胞：入B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞株、
Daudi细胞株(由同济医科大学免疫教研室提供)。
1．2 药物及主要试剂：姜黄素(质量分数99％)，
购自Sigma公司，溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，
配成8mmol／L溶液，等量分装，置于一20℃保
存，临用前解冻。PEanti—humanp1整合素购自
收稿日期：2006一04—19
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30472267)
作者简介：吴秋玲(1975一)，女，湖北武汉人，华中科技大学同济医学院附属协和医院血液科主治医生，博士，主要从事恶性血液病研究。
Tel：f027)85726387E—mail：imax，r@x263。net
万方数据
中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs笫37卷第11期2006年11,El·1679·
Biolegend公司；鼠抗母1整合素购自BD公司；
FITCanti—humanCDl9单克隆抗体购自BD公司。
1．3 细胞培养及处理：Raji细胞、Daudi细胞置于
含10％胎牛血清的RPMI—1640培养基中，37℃、
5％CO。及饱和湿度培养，每3天更换新培养基，取
对数生长期细胞，细胞悬液终浓度为1×106／mL，
分别与不同浓度姜黄素作用24h，流式细胞术和
RT—PCR方法检测81整合素的蛋白和mRNA水
平的变化。
1．4 免疫组化：收集本院2002--2004年资料完整
的住院和门诊患者淋巴结标本30份，其中T细胞
淋巴瘤、B细胞淋巴瘤和反应性增生淋巴结各10
例，淋巴结以10％甲醛固定，常规石蜡包埋，4肛m
厚连续切片备用。免疫组化采用S—P法，p1整合素
单克隆抗体1；50稀释，DAB染色，苏木素复染。
1．5 RT—PCR方法检测B1整合素mRNA的表
达：引物由Premier5．0软件自行设计，经上海生工
工程技术有限公司鉴定后合成，引物序列为上游：5
7
ACCAGCTAAGCTCAGGAACC3’，下 游： 5’
GCCAGGTGACATTGTCCATC37，扩增产物为
315bp。]3-actin引物序列为上游：57TGAGA—
CCTTCAACACCCCAG37，下游：57GCCCATC—
TCTTGCTCGAAGTC37，扩增产物为815bp。
1．5．1细胞总RNA提取：按TRIzol试剂盒说明
书操作步骤进行。取2×106活细胞加TRIzol1mL，
混匀，室温作用5min，加氯仿0．2mL振荡，室温作
用5min，取上层水相层，加等体积的异丙醇混匀，室
温10min，4℃、12000xg离心10min，沉淀物用
75％乙醇溶液洗涤1次，空气干燥，加20pLDEPC
处理双蒸水溶解，所得RNA用紫外分光光度仪测定
纯度(A。。。／A：。。>1．8)，同时进行RNA定量。
1．5．2cDNA链合成：20弘L反应体系中含oligo
(T)180．5pg，10mmol／LdTNP1弘L，RNA1弘g，
DEPC水补足容积，65℃、5min，加5×buffer4
pL，RNase抑制剂50U，37℃、2min，加逆转录酶
200U，37℃、50min，70℃、15min，终止反应。
1．5．3PCR扩增：总体系25肛L中含正义、反义链
引物各10pmol，10mmol／LdNTP0．5t*L，10×
PCRbuffer2．5弘L，25mmol／LMgCl21．5L，
TaqDNA聚合酶1U逆转录产物1弘L，PCR循环
94℃、60S，55℃、50S，72℃、100S，共30个循环。
1．5．4扩增产物分析：取10弘L扩增产物在1．5％
琼脂糖凝胶电泳(电压为5V／cm)30min后，置凝
胶成像仪ISlOOO中，进行B1整合素和paetin条带
吸光度定量分析。
1．6流式细胞术检测p1整合素蛋白的表达：调整
细胞浓度至1×106／mL，吸取100pL细胞悬液至
流式管，PBS洗2次，去上清液，分别加入单抗各10
肛L，放入4℃冰箱孵育30min，PBS洗2次，500
弘LPBS重悬，上流式细胞仪(美国Becton
Dickinson公司)检测。
1．7 统计学处理：所得数据用32±S表示，采用t
检验。
2结果
2．1 免疫组化法检测B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴
瘤和反应性增生淋巴结中B1整合素表达的差异：结
果以不同淋巴结p1整合素阳性表达率表示。胞浆染
成棕黄色为阳性表达，B细胞淋巴瘤阳性表达率为
[(90土4．68)％，胛一103，T细胞淋巴瘤阳性表达率
为[(15土1．23)％，卵一10]，反应性增生淋巴结阳
性表达率为[(20±1．56)％，n—103，B细胞淋巴瘤
阳性表达率显著高于T细胞淋巴瘤和反应性增生
淋巴结(尸巴结阳性表达率无显著性差异(P>0．05)。
2．2 流式细胞术检测Raji细胞、Daudi细胞和正
常人外周血淋巴细胞B1整合素表达的差异：PE一抗
B1整合素抗体单标法测定Raji细胞和Daudi细胞
p1整合素表达，结果显示Raji细胞p1整合素平均
荧光强度为87．38±3．15(咒一3)，显著高于阴性对
照2．83±0．02(n一3，P<0．01)和Daudi细胞
17．86±1．24(以=3，P<0．01)。采用PE一抗B1整
合素抗体和FITC一抗CDl9抗体双标法测定Raji
细胞和正常人外周血CDl9+B淋巴细胞B1整合素
表达，Raji细胞B1整合素平均荧光强度(219．20±
23．38，咒=3)显著高于正常人外周血CDl9+B淋
巴细胞B1整合素平均荧光强度(126．28±14．52，
行=3，P<0．01)。
2．3 RT—PCR方法检测姜黄素对Raji细胞81整
合素mRNA的影响：图1显示6．25tlmol／L姜黄
素作用组p1整合素mRNA略低于空白对照组，无
显著性意义(P>0．05)，12．5、25、50、100pmol／L
姜黄素处理组B1整合素／t3一actin比值分别为
0．43±0．03、0．38±0．02、0．25±0．01、0．19±0．01，
显著低于空白对照组(0．73±0．03，P<0．01)，并且
随着姜黄素浓度的升高，口1整合素mRNA的表达
逐渐降低。
2．4 流式细胞术检测姜黄素对Raji细胞B1整合
素蛋白水平的影响：图2显示0、12．5、25、50、100
万方数据
·1680· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
M—Marker1-对照组
2～6-姜黄素(6．25、12．5、25，50、100tLmol／L)组
M—Marker1-controlg up
2一--6一curcumin(6．25，12．5，25，50，and100t￡mol／I。)groups
图l RT-PCR法检测萎黄素对Raji细胞p1整合素
mRNA表达的影响(露一3)
Fig．1EffectofcurcumlnonBlintegrin
mRNAexpressioninRajicells
detectedbyRT—PCR(一一3)
蜊
般
泉
粼
霹
牟
姜黄素C／(utool·L“)
与0／』mol／I，委黄秉组比较：一P。。P图2流式细胞仪检测不同浓度婪黄素对Raji细胞
pl整合素蛋白表达的影响(；土s，玎一3)
Fig．2Effectofcurcuminatdifferentco centrations
on131integrinproteinxpressioninRajicells
analyzedbyflowcytometor(；土s，厅一3)
Fmol／L姜黄素加入Raji细胞中p1整合素表达的
平均荧光强度分别为87．38±3．15、84．29士2．98、
39．60±1．46、31．34士1．38、25．25±1．22，随着姜黄
素浓度的升高，pl整合素蛋白的表达显著降低。
3讨论
整合素是B细胞上的主要黏附分子，在淋巴造
血微环境中参与B细胞与基质细胞的相互作用，在
正常和恶性B淋巴细胞生存过程中起关键作用。此
外，整合素是淋巴细胞归巢的中心环节，对于淋巴瘤
的扩散有极其重要的作用‘1|。Terol等嘲临床研究发
现，a4、a5和p1整合素中度或强表达与淋巴瘤患者
的结外浸润相关，而a2、a3、a4和p1整合素弱表达
或阴性表达的淋巴瘤患者完全缓解率和无病生存率
显著高于高表达患者。进一步研究淋巴瘤中81整合
素的作用及调控机制必然具有重要意义。
本研究结果显示，B1整合素在B细胞淋巴瘤细
胞系Raji细胞中高表达，与Mikawa等口]研究结果
一致，而另一B细胞淋巴瘤细胞系Daudi细胞p1整
合素表达水平很低，免疫组化结果也提示T细胞淋
巴瘤患者淋巴结阻整合素表达显著低于B细胞淋
巴瘤患者淋巴结，提示p1整合素在不同类型淋巴瘤
中的作用不同。此外，反应性增生淋巴结中p1整合
素的表达显著低于B细胞淋巴瘤，提示p1整合素可
能成为淋巴瘤的一项新的鉴别诊断指标。本实验结
果显示p1整合素在正常人外周血淋巴细胞中表达
水平极低，显著低于Raji细胞(Pp1整合素为靶点筛选治疗淋巴瘤的药物具有良好
的靶向性，具有重要的临床意义。
姜黄素(curcumin)系从中药姜黄中提取的酚
性色素，有抗氧化、抗癌、抗突变、抗炎等广泛药理作
用，进一步研究姜黄素对肿瘤的侵袭与转移方面的
作用是近年来研究的热点。研究显示姜黄素能抑制
多种肿瘤的侵袭，Menon等H1报道，姜黄素可抑制
B16F10黑色素瘤在小鼠体内的肺转移，使肺肿瘤
结节明显减少，生存期延长。Lin等[s1报道，在表现
出较高的MMP一9分泌的高侵袭性的人肝癌细胞系
Sk—Hep一1中，姜黄素10mmol／L可抑制17．4％和
70．6％的细胞转移与侵袭。但姜黄素对于淋巴瘤细
胞黏附、迁移方面的作用尚未见报道。本实验结果显
示，低浓度姜黄素即能显著抑制p1整合素的表达，
提示姜黄素能显著抑制淋巴瘤的侵袭。
恶性淋巴瘤中B细胞非霍奇金氏淋巴瘤占大
多数，传统的化疗使患者长期存活率不到50％，抗
黏附治疗恶性肿瘤是近年来研究的热点[6]，但是寻
找淋巴瘤抗黏附治疗的靶点以及针对此靶点的药物
尚未报道。本实验结果显示81整合素在Raji细胞
中高表达，是一个有前途的抗黏附治疗靶点。姜黄素
来源广泛，价格低廉，研究发现姜黄素能显著抑制
Raji细胞的增殖，并且对正常细胞无不良反应[7]，本
实验结果也显示姜黄素能显著抑制整合素的表达，提
示姜黄素有希望成为抑制淋巴瘤侵袭、转移的新药。
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痛泻要方对肠易激综合征作用机制的实验研究
李佃贵1，赵玉斌1’2+
(1．河北医科大学，河北石家庄050011；2．石家庄市第三医院，河北石家庄050011)
摘 要：目的 探讨痛泻要方对内脏高敏感性肠易激综合征(IBS)模型大鼠的疗效和作用机制。方法采用结肠
慢性刺激法制作内脏高敏感性的IBS大鼠模型。将实验动物分为正常组，模型组，阳性对照(得舒特)组，痛泻要方
低、高剂量组。观察各组大鼠肠道内扩张引起腹部抬起和背部拱起的容量阈值和大鼠肠道内不同容量下扩张期间
腹壁收缩次数，检测5一羟色胺(5一HT)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平。结果与模型组相比，各治
疗组大鼠行为学和电生理指标均有明显改善{各治疗组模型大鼠5一HT、SP水平明显下降，CGRP水平增加，且有
一定的量效关系。结论痛泻药方能降低内脏高敏感性IBS模型大鼠血清5-HT、血浆SP水平，增加CGRP水平，
大剂量痛泻药方疗效优于得舒特。痛泻药方的作用机制可能是通过降低模型大鼠血清5-HT、血浆SP水平，减弱
背角神经元兴奋性，从而提高内脏痛阙、消除肠道过敏而达到治疗目的。
关键词：痛泻要方；肠易激综合征(IBS)；5-羟色胺(5一HT)；P物质(SP)；降钙素基因相关肽
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)11—1681一05
MechanismofTongxieyaofangonirritablebowelsyndrome
LIDian—guil。ZHAOYu-binl’2
(1．HebeiM dicalUniversity，Shijiazhuang050011，China；2．TheThirdHospitalofShijiazhuang，
Shijiazhuang050011，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheffectandthemechanismofTongxieyaofang(TXYF)onrat
modelofirritablebowelsyndrome(IBS)．MethodsMod lratsofIBSwhichwerepreparedbychronic
stimulationincolonwererandomlydividedintogroups：thenormalcontrolgroup(GroupA)，themodel
controlgroup(GroupB)，thepositivecontrolgroup(GroupC)，thelowdosageofTXYFgroup(Group
D)，theighdosageofTXYFgroup(GroupE)．Differentt a mentsweregiventoeverygroupsbyig
administrationforonemonth．Thecapabilitymensofthesacculusthatcausedabdomen—upliftingand
back—archingandthetimesofcontractofabdomenuscleinratsunderdifferentdilatationswere
observed．Thelevelsof5一hydroxytryptamine(5一HT)，substanceP(SP)，andc lcito ingenrelated
peptide(CGRP)wereevaluated．ResultsComparedwiththeGroupB，theTXYFcouldeffectively
improvethindexofthebehaviorandelectrophysiology，italscouldowerthelevelsof5一HTandSP，
andincreasethlevelsofCGRPofratmodelofIBSwithcertaindose—effectr lationship．Conclusion
TXYFcouldowerthelevelsof5-HTinserumandSPinplasma。andincreaseCGRPlevelofmodelratsof
IBS，especiallyinhighdosage．ThemechanismofTXYFmaybeincreasingthepainthresholdofbowel，
eliminatinghypersusceptibilityofbowel，anddecreasingexcitabilityofnervec llsbydecreasingthe5-HT
andSPlevelsinIBSrats．
Keywords：Tongxieyaofang(TXYF)；irritablebowelsyndrome(IBS)；5一hydroxytryptamine(5一
HT)；substanceP(SP)；calcitoningenerelatedp ptide(CGRP)
收稿日期：2006—02—25
基金项目：国家中医药管理局中医药科学技术研究专项计划(04一05JP09)，河北省自然科学基金资助课题(c2006000988)
作者简介：李佃贵(1950一)，男，河北省蔚县人，主任医师，教授，博士生导师，主要从事胃肠道疾病的临床与实验研究工作。
Tel：(0311)85990296E—mail：drzhyubin@sina．corn
*通讯作者赵玉斌
万方数据
β1整合素在淋巴瘤中的表达及姜黄素对其的影响
作者： 吴秋玲， 陈燕， 张纯， 何静， WU Qiu-ling， CHEN Yan， ZHANG Chun， HE Jing
作者单位： 华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所,湖北,武汉,430022
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 2次

参考文献(7条)
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inhibitor regulating B-NHL cell line Raji proliferation[外文期刊] 2005(05)

引证文献(2条)
1.苏菁.徐宗佩 姜黄素药理作用研究进展[期刊论文]-江西中医药 2010(8)
2.黄臣虎.陆茵.孙志广.陈磊.张蕾 莪术抗癌作用机制研究进展[期刊论文]-中草药 2010(10)


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