全 文 ：中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月·1399·
白藜芦醇产量有显著的负影响。
处理后期各处理组对苗期毛脉酸模根中除酸模
素和大黄素外，其他5种次生代谢产物(白藜芦醇
苷、白藜芦醇、大黄酚苷、大黄酚、大黄素甲醚)的产
量都受到了明显的抑制。
4讨论
大斑病长蠕孢001对苗期毛脉酸模根中自藜芦
醇、酸模素、大黄酚的量和产量有影响，其中对白藜
芦醇量的促进影响仅存在于中前期。对酸模素量的
影响表现为中前期促进，中后期抑制。对大黄酚量的
影响仅存在于后期而且为抑制作用。大斑病长蠕孢
001对白藜芦醇的产量表现为前期促进后期抑制，对
酸模素、大黄酚的产量的前期促进作用不显著，后期
抑制作用较明显。
大斑病长蠕孢002对苗期毛脉酸模根中白藜芦
醇、酸模素、大黄酚的量和产量有影响，其中对白藜
芦醇、酸模素量的促进影响仅存在于中前期；对大黄
酚量的促进影响仅存在于前期。但处理后期对上述3
种次生代谢产物量的影响不明显，大斑病长蠕孢002
对上述3种次生代谢产物产量处理前期影响不显
著，处理后期对酸模素、大黄酚产量表现为明显的
抑制。
玉蜀黍长蠕孢对苗期毛脉酸模根中酸模素的量
影响前期不明显，中后期(20～50d)表现为促进，对
酸模素产量在后期表现为明显促进作用。对大黄素
的量和产量在处理中前期促进作用不明显。但处理
后期对其量和产量表现为明显的促进作用。
实验结果证明，3株长蠕孢属真菌叶面侵染苗期
毛脉酸模处理时间超过40d，苗期毛脉酸模根的生
物量开始受到抑制。因此对苗期毛脉酸模的长蠕孢
属真菌诱导处理时间不宜超过40d，如果对其6种
次生代谢产物(大黄素除外)综合考虑应选在毛脉酸
模采收前30d进行诱导处理为最佳。如果仅从生物
活性成分白藜芦醇的角度考虑，选择大斑病长蠕孢
001进行诱导处理，处理时间为采收前30d进行处
理。同时笔者还研究了上述3株真菌对幼苗期毛脉
酸模中的白藜芦醇苷和白藜芦醇的影响。结果表明
采取根部感染的方式，同样可以使幼苗期毛脉酸模
中白藜芦醇的量和产量提高。但是长蠕孢属真菌侵
染毛脉酸模致使其生物活性成分白藜芦醇的量发生
变化的机制并不清楚，有待进一步深入的研究。
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肉苁蓉属4种肉苁蓉可溶性蛋白的SDS—PAGE电泳分析
陈 培，郭玉海+，王保民，翟志席
(中国农业大学农学与生物技术学院中药材研究中心，北京 100094)
摘 要：目的 对肉苁蓉属4个种进行鉴别。方法采用可溶性蛋白质SDS—PAGE凝胶电泳。结果肉苁蓉属4个
种的SDS—PAGE图谱存在显著差异，其多态性条带为81．82％。结论各个种的电泳图谱可以相互区别，肉苁蓉属
可溶性蛋白的SDS—PAGE图谱可作为种间鉴定的蛋白指纹图谱。
关键词：肉苁蓉属，可溶性蛋白；SDS—PAGE；种间鉴定
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)09—1399—04
收稿日期：2005—12-15
基金项目：重大基础研究前期研究专项(2004CCA01200)
作者简介：陈培(1972一)，女，河南叶县人，博士研究生，主要从事肉苁蓉蛋白质组研究。
Tel：(010)62733853E—mail：chenpeil68@sohu．com
*通讯作者郭玉海
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
SDS—PAGEofsolubleproteinsinfourplantsofCistancheHoffing．etLink
CHENPei，GUOYu—hai，WANGBao—min，ZHAlZhi—xi
(CenterofChineseMedicinalMaterials，CollegeofAgronomyandBio—Technology，
ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100094，China)
Abstract：ObjectiveToidentifyfourspeciesofCistancheHoffing．etLink．MethodsSDS—PAGE
Electrophoresisofsolubleproteinswaused．ResultsTheirdegreesofpolymorphismwere81．82％．
Eachspecieswhichhaditsownuniquebandpatterndistinguishfromt eothers．ConclusionThe
electrophoresispatternofSDS—PAGEofsolubleproteinscanberegardedasproteinfingerprintsfor
identificationofvariousspeciesofCistancheHoffing．etLink．
Keywords：CistancheHoffing．etLink；soluble—protein；SDS—PAGE；speciesidentification
受遗传基因控制的蛋白质分子普遍存在于植物
细胞内，其中可溶性蛋白在植物发育过程中具有较
强的异质性和相对稳定性。蛋白质指纹图谱技术已
广泛应用于品种的鉴定和分类，如小麦、大麦、玉米、
水稻、豌豆等作物[1’2]。目前，大麦和小麦品种醇溶蛋
白电泳技术、豌豆属和黑麦草属聚丙烯酰胺凝胶电
泳(SDS—PAGE)以及玉米品种醇溶蛋白超薄等电聚
焦(IEF)已列入国际种子检验规程[3]。小麦醇溶蛋
白品种鉴定和玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方
法也已分别列入“中华人民共和国农作物种子检验
规程”(GB／T3543．5—1995)和农业部行业标准(NY／
T499—2001)。但是，蛋白质指纹图谱技术在肉苁蓉
鉴定和分类中的研究还未见报道。
肉苁蓉为列当科肉苁蓉属(CistancheHoffing．
etLink)多年生寄生草本植物的干燥带鳞叶的肉质
茎，是常用名贵中药E4|。我国有肉苁蓉属植物4种1
变种，分别为荒漠肉苁蓉CistanchedeserticolaY．
C．Ma、盐生肉苁蓉C。salsa(C。A。Mey．)G．
Beck、白花盐苁蓉C．salsavar． lbifloraP．F．Tu
etZ．C．Lou、沙苁蓉C．sinnensisG．Beck和管花
肉苁蓉C．tubulosa(Schenk)R．Wight[5]，其主要
产地、有效成分及质量分数各不相同[6~8]，本研究以
肉苁蓉属的4种肉苁蓉为材料，探索可溶性蛋白电
泳指纹图谱与种鉴定之间的关系，试图为肉苁蓉鉴
别提供一项新的评价指标，同时为建立中药材电泳
图谱库提供材料。
1材料和方法
1．1实验材料：管花肉苁蓉、荒漠肉苁蓉、盐生肉苁
蓉和沙苁蓉分别取自新疆于田、内蒙阿拉善试验基
地和宁夏盐池。试验材料具有代表性，并由郭玉海教
授鉴定，见表1。
1．2样品制备：取同一大小4种肉苁蓉的新鲜肉质
茎各20g，分别切成0．5cm见方的小块。冷冻干燥
表1试验材料的主要特征
Table1 Maincharacteristicsofexperimentalmaterials
一昼夜。称取干燥样品各0．5g加入3mL可溶性蛋
白提取液(0．08mol／LTris—HCl，pH6．8)(稀释4倍
的浓缩胶缓冲液+2％PVP40)。冰浴研磨成匀浆。转
至离心管，提取30min后4℃，1000r／min离心
30min，取上清液加入10倍体积的冷丙醇(一20
℃)，洗涤沉淀3次，每次4℃，100 0r／min离心15
min，沉淀物真空干燥，一20℃贮存，备用。
1．3 电泳：取上述制备的样品0．5mg加入1mL
样品缓冲液E4mL浓缩胶缓冲液(1mol／LTris—
HCl，pH6．8)+10mL10％SDS+13mLp巯基乙
醇+6．25mL87％甘油，用双蒸水稀释50mL3，上
样前将样品在100℃煮3～5min，100 0r／min离
心5rain，上样量20弘L。采用SDS—PAGE垂直板电
泳Laemmli不连续系统，并作适当改变，分离胶质
量分数15％，浓缩胶质量分数3％。分离胶长13
am，浓缩胶长2．5cm，胶板厚度为1mm。电极缓冲
液使用Tris一甘氨酸[9](0．025mol／LTris，0．192
mol／L甘氨酸，0．1％SDS，pH8．3)。指示剂在浓缩
胶时，电压为180V，当指示剂进入分离胶后，电压
调至210V，电压采用稳压档，在常温下进行，当指
示剂迁移至距胶板下缘1am时停止电泳，电泳全过
程约5～6h，电泳结束，迅速进行染色和固定。
1．4 凝胶染色：采用0．25％考马斯R一250(45％甲
醇+45％双蒸水+10％乙醇+0．25％考马斯R一
250)进行染色，染色时间约为4～5h，染色和固定
同时进行。然后进行脱色，多次再换脱色液(45％甲
醇+45％双蒸水+10％乙醇)，至背景清晰为止。
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月·1401·
1．5凝胶成像：采用AlphaImager2200凝胶成像
系统对脱色后背景清楚的凝胶进行成像。
1．6数据处理：电泳图谱中间的M泳道为低相对
分子质量(胁)标准蛋白质，该条带蛋白从上到下分
别为兔磷酸化酶B(Mr97400)、牛血清白蛋白(Mr
66200)、兔肌动蛋白(Mr43ooo)、牛碳酸酐酸(Mr
31000)、胰蛋白酶抑制剂(Mr20lOO)和鸡蛋清溶
菌酶(Mr14400)。用Mr标准蛋白质作标准曲线，
利用AlphaImager2200软件对蛋白带进行分析，测
出每条带的Mr。所有的测量位置在蛋白带的中央。
2结果
肉苁蓉属4个种可溶性蛋白经SDS—PAGE得
到了较好的分离效果，见图1、表2。结果表明，4个
种的肉苁蓉可溶性蛋白电泳图谱共分离出11条蛋
白带，不同种的电泳谱带在数目、迁移率及谱带的强
度方面差异显著。即不同种的肉苁蓉可溶性蛋白的
电泳图谱不同。相对分子质量为30200、2300的2
条带是4个种共有的带，其他9条带有不同程度的
差异。多态性条带占81．82％，根据这9条带的有无
可区分肉苁蓉属的4个种。相对分子质量67500条
带是沙苁蓉和管花肉苁蓉2个种共有的条带。相对
分子质量31200条带是沙苁蓉和荒漠肉苁蓉共有
的条带。相对分子质量24800条带是盐苁蓉和荒漠
肉苁蓉共有的条带。相对分子质量45900、34000、
21100条带是沙苁蓉特有的条带。相对分子质量
65300条带是管花肉苁蓉特有的条带。相对分子质
量158000条带是盐苁蓉特有的条带，相对分子质量
17700条带是荒漠肉苁蓉特有的条带。同时在相对
分子质量23200、21100、15800条带处染色较深，
即这3个带的蛋白量高。
1．管花肉苁蓉2一盐生肉苁蓉
3一沙苁蓉 4一荒漠肉苁蓉
M一标准蛋白
1一Ctubulosa2．C．salsa
3．C曲n蛀，4-C虚．sed／eo／a
M一一cmdardworm
圈1 肉苁蓉可溶性蛋白SDS—PAGE图谱
Fig．1SDS-PAGEofsolubleproteininplants
ofCistancheHoffing．etLink
表2肉苁蓉属可溶性蛋白的SDS—PAGE结果
TaMe2 ResultofsolubleproteininplantsofC妇tanche
Hofflng．etLinkbySDS-PAGE
Mr 管花肉苁蓉 盐生肉苁蓉 沙苁蓉 荒漠肉苁蓉
试验重复次数在5次，+表示有条带，一表示没有条带
Experimentationis repeated5 times，+indicatesprotein
bands，一indicatesnoproteinba ds
经过多次重复试验，每一种内可溶性蛋白电泳
谱带重现性良好，稳定性良好。可溶性蛋白电泳图谱
的特异性，可作为肉苁蓉的种间鉴定和分类的生化
依据。
3讨论
分子生物学研究表明，种之间的差异主要取决
于遗传物质的差异，蛋白质是基因的产物，可作为种
鉴定的依据口0|。蛋白质图谱技术在农作物分类和品
种鉴定中已成为常规技术，但在药用植物中研究较
少，特别是在不同种的肉苁蓉分类和鉴定方面还未
见研究报道。本试验结果表明，肉苁蓉属不同种可溶
性蛋白的SDS—PAGE图谱种间差异明显，不同种都
有各自的特异的可溶性蛋白质，这为肉苁蓉种间鉴
定提供了一个新的生化指标和一种新的鉴定手段。
采用这种方法，对不同种肉苁蓉鉴定具有简单、快
速、准确、微量等优点，在粉末状肉苁蓉材料的鉴定
方面具有明显特点。
研究表明，不同种肉苁蓉有效成分的组成和量
各不相同，不同种肉苁蓉的特异蛋白质与有效成分
相关关系仍是一个值得深入研究的问题。
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一++++一+一
+一++++一++一
一
一
一
一
一
一+++一
一+
++一
一
一+一+一
一
一
mⅪmⅪⅪ沁m
m
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m瓠瓠舛呱孔孔龇孔¨兀趴
7
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2
2
l
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万方数据
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天麻液相色谱指纹图谱研究
王莉，程孟春，肖红斌’，梁鑫淼。
(中国科学院大连化学物理研究所，辽宁大连116012)
摘要：目的建立天麻的液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制天麻质量提供新方法。方法采用HPLC法
分析不同产地的18个天麻样品，确定指纹峰并进行对照药材相似度、共有模式相似度的计算，用纯品随行对照结
合LC—MS对主要指纹峰进行定性鉴定。结果建立了由27个指纹峰和17个共有峰组成的天麻液相色谱指纹图
谱，指纹峰具有特征性，鉴定了其中12个主要的指纹峰。用对照药材相似度，可将天麻样品分为3类：安徽河南产
天麻、陕西四川产天麻和云南产天麻。两个相关系数分界点为0．80和0．58，夹角余弦分界点为0．88和0．73。结论
所选指纹峰有特征性，建立的指纹谱可用来区别3个产地的天麻药材，并为进一步控制天麻质量提供依据。
关键词：天麻；高效液相色谱法，指纹图谱；相似度
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)09—1402一04
HPLCFingerprintofGas rodiaelata
WANGLi，CHENGMeng—chun，XIAOHong—bin，LIANGXin—miao
(DalianInstituteofChemieophysics，TheChineseAcademyofSciences，Dalian116012，China)
Abstract：ObjectiveToestablishHPLCfingerprintforevaluatingandcontrollingthequalityof
Gastrodiaelata．MethodsHPLCAnalysisandsimilaritycalculationwereusedforestablishingfingerprint
chromatogramandcl ssifying18differentoriginals mples；LC—MSandpurecompoundcomparisonswere
employedforthefingerprinteaksidentification．ResultsHPLCFingerprintchromatogramwascons-
tructedwith27fingerprinteaks，17ofwhichwerecommonfi gerpringeaksand12maincompounds
wereidentified．Accordingtothesim laritytos andardizeherbalmedicine，18samplescouldbeclassified
threegroups，Anhui—Henan，Shanxi—Sichuan，andYunnanh bitats．Thetwocriticalpointswere0．80and
0．58forcorrelationcoefficientand0．88and0．73forcosinevalues．ConclusionTheselectedfingerprint
peaksarediagnosticforG．elataandtheconstitutedHPLCfingerprintchromatogramcouldbeusedfor
identifyingdifferenthabitatsandservedasapowerfultooforfurtherqualitycontrolofG．elata．
Keywords：GastrodiaelataBI．；HPLC；fingerprint；similarity
天麻为兰科植物天麻GastrodiaelatBI．的干
燥块茎，主治头痛眩晕、肢体麻木、癫痫抽搐等症。其
质量控制多用高效液相法测定天麻素的量或用毛细
管电泳测定其他几个活性成分的量‘卜3|。指纹图谱
是控制天然药物质量的有效方式之一，已日益成为
国内外广泛接受的中药质量评价模式‘4’5]。本实验通
过收集天麻主产地的18个样品进行指纹图谱研究，
最终建立了由27个指纹峰和17个共有峰组成的天
麻液相色谱指纹图谱；由对照药材相似度及共有模
式相似度的计算，可以较好地区分不同产地的天麻
收稿日期：2005—10—12
基金项目：中科院知识创新工程重要方向项目(KGCX2一SW一213)；国家自然科学基金重点项目“中药药效组分的指纹图谱分析的方法研
究”(20235020)
作者简介：王莉(1975一)，女，博士在读，主要从事中药的分离分析工作。E—mail：wlhws@dicp．ac．ca
*通讯作者肖红斌梁鑫淼
万方数据
肉苁蓉属4种肉苁蓉可溶性蛋白的SDS-PAGE电泳分析
作者： 陈培， 郭玉海， 王保民， 翟志席， CHEN Pei， GUO Yu-hai， WANG Bao-min， ZHAI
Zhi-xi
作者单位： 中国农业大学农学与生物技术学院,中药材研究中心,北京,100094
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(9)
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