全 文 ：·412· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3,El
药)。2004，35(6)l665-666． E83
E53LiuJ，WangBC，PengL，eta1．Structure—activityrela—
tionshipofflavonoidsantioxidants[J]．JChongqingUnivl
NatSci(重庆大学学报：自然科学版)，2004，27(2)l1 0-
124． [9]
[6]ChenSH．Theantioxidationandstructure．functionrela-
tionshipofflavanoids口]．Straitpha mJ(海峡药学)，
1998，10(4)：4—6．
[7]ChenQ，WangBC，TangCH，eta1．Ther lationbetween[i03
structureandantioxidativeac ityofflavanoids[J]．J
ChongqingUnivlNatSci(重庆大学学报l自然科学版)，
2003，26(11)l48—55．
MoraA． Stucture—activityrela ionshipof polymethoxy—
favonesandotherflavonoidsasinhibitorsofnon—enzymic
lipidperoxidation[J]．BiodwmPharmacol，1990，40(4)l
793—797．
ChenJW，ZhuZQ，HangK，eta1．Relationshipbetween
structureandactivityofeightnaturaflav noidsagainst
oxidation[J]．JEastChinaNormUniv；NatScl(华东师范
大学学报：自然科学版)，2002，1：91．94．
OandowAV，JoubertE，HansmannCF．Comparisonofthe
antioxidantactivityofaspalathinwiththatofotherplant
phenolsfrooibostea(aspalathuslinearis)，a-tocopherol，
BHT，andBHA[J]．AgricFoodChem，1997，45：632—638．
龙葵碱对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响
季宇彬，万梅绪，高世勇，邹 翔 ．． ，
(哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076)
摘要；目的探讨龙葵碱对S。。。及H船荷瘤小鼠红细胞免疫功能的作用。方法观察S-so荷瘤小鼠和Hzz荷瘤小
鼠的红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力，采用DPH荧光探针，用荧光偏振法测定荧光偏振度(P)，并计算膜的微黏度
(可)研究红细胞膜脂流动性(LFU)。结果龙葵碱能升高S-so和Hzz荷瘤小鼠的红细胞黏附肿瘤细胞的花环率，提
高两种荷瘤小鼠的红细胞膜的流动性。结论龙葵碱可能是通过提高两种荷瘤小鼠的红细胞膜的流动性，从而恢
复荷瘤小鼠红细胞免疫功能进而达到抗肿瘤作用。
关键词；龙葵碱}红细胞免疫；膜流动性I荷瘤小鼠
中图分类号：R286．91 文献标识码；A 文章编号：0253—2670(2007)03—0412一03
EffectofSolanumigrumalkaloidonerythrocyteimmunityfunctionintumor-bearingmice
JIYu—bin，WANMei—XU，GAOShi—yong，ZOUXiang
(PostdoctoralPr gramme，InstituteofMateriaMedica，HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheeffectofSolanumigrumalkaloidnerythrocyteimmunity
function．MethodsS udyingtheadherencebetweenrythrocyteimmunityandtumor—cellofS1∞andH22
tumor—bearingmice；Bydeterminingwithfluorescencepolarization(P)andaccountingthemicroviscosity
(1)withDPHasaprobetherythrocytemembranefluidityof heS180andH22tumor-bearingmicecouldbe
investigated．ResultsS．nigrumalkaloidcouldincreaseth ratioofadherenceanadembetween
erythrocyteandtumor-eellandpromotetherythrocytemembranefluidityof hetwotumor—bearingmice．
ConclusionTheinhibitionofS．nigrumalkaloidntumorcanbeaccomplishedthroughimprovingthe
erythrocytemembranefluidityof wotumor-bearingmicea drenewingerythrocyteimmunityoftumor—
bearingmice．
Keywords：Solanumnigrumalkaloid；erythrocyteimmuni y；membranefluidity；tumor—bearingmic
龙葵碱是从茄科茄属植物龙葵Solanum
nigrumL．中提取出来的一种生物碱。前期研究结
果表明龙葵碱能显著延长H：：荷瘤小鼠的生存时
间，并能显著降低H。。荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性
及膜蛋白水平[13；明显降低H：。荷瘤小鼠肿瘤细胞
膜唾液酸水平和封闭度[23；还可通过影响荷瘤小鼠
肿瘤细胞DNA和RNA水平来实现抗肿瘤作用口3，
研究还发现龙葵碱可提高S。。。小鼠红细胞膜唾液酸
水平及封闭度“]。本实验进一步从红细胞免疫功能
角度来观察龙葵碱的抗肿瘤作用，并研究其可能的
作用机制。
1材料
收藕日期l2006—08—31
基金项目t国家自然科学基金资助项目(30400591)I黑龙江省自然科学基金资助项目(D2004-13)，哈尔滨市青年科学基金资助项目
(2004AFQXJ035)，黑龙江省研究生创新科研资金项目(YJSCX2005—134HLJ)
作者简介：季宇彬(1956一)，男，博士．教授，博士生导师，多年来一直致力于中药药理、肿瘤药理及分子药理学研究．
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·413·
1．1 动物与瘤株：昆明种小鼠，雌雄各半，体重
18～22g，由哈尔滨医科大学动物中心提供，许可证
号001010006。SlS0、H：。荷瘤小鼠瘤株由哈尔滨市肿
瘤医院肿瘤研究所提供。
1．2药品及试剂：龙葵碱由黑龙江省药品检验所提
供，质量分数>99．9％；5一氟尿嘧啶(5一Fu，上海旭
东海普药业有限公司，批号H31020593)；DPH
(Sigma公司)，考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒(南京
建成生物工程研究所)；戊二醛、瑞氏染色剂(黑龙
江省临床检验中心)。
1．3仪器：752可见分光光度计Ck海光谱仪器有
限公司)；水平高速离心机(北京医用离心机厂)；恒
温水浴箱(厦门医疗电子仪器厂)；低温高速离心机
(美国Beckman公司)；水平高速离心机(北京医用
离心机厂)；超净工作台(苏州净化设备厂)；RF一
540荧光分光光度计。
2方法
2．1分组：昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为6组，
每组10只。分别为正常组，模型组，5-Fu(30rag／
kg)组，龙葵碱低、中、高剂量(1．1、2．2、4．4rag／
kg)组。‘
’
2．2模型的建立及给药：无菌条件下，取接种生长
良好的S。。。荷瘤小鼠瘤株，在超净工作台上抽取腹
水，在冰浴条件下，以生理盐水(1。4)稀释、混匀
制成肿瘤细胞混悬液(5×106／mL)，肿瘤细胞混悬
液应为乳白色半透明状态，若有血性腹水不可使用。
将S。。。肿瘤细胞混悬液按每只0．2mL接种于各组
小鼠右侧前肢下；H船肿瘤细胞混悬液接种于各组小
鼠腹腔。正常组不接瘤。接瘤24h后，S。so小鼠ip给
药，H。。小鼠SC给药。模型组按相同体积给予生理盐
水，无菌条件下连续给药7d。正常组不给药。于停
药第2天处死小鼠，眼眶取血，离心、洗涤制成红细
胞悬液(1×108／mL)待用。
2．3龙葵碱对红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力的影
响：小鼠肝癌H：。细胞接种于昆明种小鼠腹腔连续
传代，实验时无菌抽取7d龄腹腔肿瘤细胞，以
Hank7S液洗涤2遍，制成肿瘤细胞悬液(1×106／
mL)。取此悬液0．1mL加等体积豚鼠(或人)的新
鲜血液，37℃水浴1h，洗涤离心2次，弃上清液，
成为血清致敏肿瘤细胞，加0．05mL制备的红细胞
悬液37℃水浴30rain，加0．25％戊二醛固定、涂
片、瑞氏染色，肿瘤细胞蓝色，红细胞红色，一个肿瘤
细胞结合3个以上红细胞为肿瘤红细胞花环。计算
肿瘤红细胞花环百分率。
2．4红细胞影泡的制备
2．4．I不封闭影泡的制备：给药7d后次日小鼠眼
球取血，肝素抗凝，在水平高速离心机下3000r／
min离心10min，生理盐水洗涤2次，最后悬浮在
生理盐水中，得到红细胞悬浮液；按红细胞悬浮液：
预冷的双蒸水(1s 30)加入预冷的双蒸水，在4℃
下溶血，过夜，制成红细胞溶血液。在4℃、2000×
g离心40rain，弃上清，PBS洗涤3次，最后悬浮在
一定量的PBS中，即制成影泡悬浮液。考马斯亮蓝
蛋白试剂盒测定蛋白的量。
2．4．2细胞膜的荧光标记：取新配制的2mmol／L
DPH四氢呋喃液10弘L分别加入10．0mL红细胞
膜缓冲液及10．0mL红细胞悬液，25℃温浴30
min，用PBS液洗涤1次，最后将细胞悬浮于4．0
mLPBS液中，即得DPH标记的细胞膜。
2．4．3荧光偏振度的测定[5]：细胞膜的流动性采用
荧光偏振度(P)并折算微黏度(叩)。本实验采用日
立公司生产的RF一540荧光分光光度计测P。九。
362nm，k432nm，狭缝lOrlm，测温25℃，按公
式计算P值和7值。最终按照公式7=2P／(0．46一
尸)，计算出膜脂流动性(LFU)。
2．5数据处理：用SPSSii．0软件处理，各组数据
以X土5表示，样本比较采用t检验。
3结果
’
3．1龙葵碱对荷瘤小鼠红细胞免疫黏附肿瘤细胞
能力的影响：结果见表1。与正常组比较，S。。。荷瘤小
鼠与H。：荷瘤小鼠的红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力
均有所下降；与模型组比较，龙葵碱低、中、高剂量组
均能显著提高红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力(P<
0．01)，与正常组比较，龙葵碱低、中，高剂量组差异
显著(P>o．05)，即龙葵碱基本上能使红细胞免疫
表1龙葵碱对S。。和H：：荷瘤小鼠红细胞免疫黏附肿瘤
细胞能力的影响G士s，拜=10)
Table1 EffectofS．nigrumalkaloidona hesiveability
oferythrocyteimmunityto umourcellsinSm
andH22tumour—bearingmice(；士j，露一10)
与模型组比较：～P
·414· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
黏附肿瘤细胞能力恢复到正常的生理状态。
3．2龙葵碱对荷瘤小鼠红细胞膜流动性的影响：与
正常组比较，S。。。荷瘤小鼠与H。。荷瘤小鼠的红细胞
叩均有所升高，即LFU降低；与模型组比较，龙葵碱
低、中、高剂量组均能降低两种荷瘤小鼠的红细胞
叩，即提高荷瘤小鼠的红细胞LFU，差异显著(P<
0．05)。结果见表2。
4讨论
表2龙葵碱对S,so和H：：荷瘤小鼠红细胞膜流动性的影响(i士j，露一10)
Table2 EffectofS．nigrumalkaloidonmembranefluidityoferythrocyte
inSl“andH22tumour—bearingmice(；士$，露=10)
与模型组比较l。P
由于红细胞结构简单，因此在很长一段时间里，
人们认为红细胞的功能仅在于氧气及二氧化碳的体
内运输功能。随着研究的不断深入，研究发现红细胞
具有免疫黏附能力，并具有促进白细胞吞噬作用；学
者在发现红细胞有多种免疫能力后，提出了“红细胞
免疫系统”这一概念，使得红细胞免疫学得以迅速的
发展。后又有学者提出红细胞在阻止恶性肿瘤转移
。方面甚至比其他细胞起着更重要的作用。这些发现
及以后的许多研究均证实了红细胞免疫系统是一个
完整的免疫体系，同时也是一个至关重要的免疫子
系统‘6～91。
红细胞膜流动性实际上是指LFU，其中也包含
膜中蛋白质的运动。LFU对红细胞的形态结构、酶
活性、受体活性及物质转运均有影响。大量事实证
明，许多疾病与生物膜脂的流动性变化有关，在细胞
周期的不同时相、代谢过程中、疾病条件下以及药物
作用后细胞膜都会有流动性的变化，而且发现许多
疾病除实质性器官的细胞膜病变外，常伴有红细胞
膜的异常。红细胞的正常功能也与红细胞膜的流变
性质有很大关系，对细胞形态、物质运输、酶活性、抗
原性及受体活性等均有影响。膜流动性增大，吁下
降，血流流速加快，红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力
则会随之增强[5’1引。 。
．
本实验研究表明，龙葵碱可增强S。。。与H。。荷瘤
小鼠的红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力；同时，与正
常组相比，荷瘤小鼠红细胞7升高，LFU下降；在经
过龙葵碱处理后，不同荷瘤小鼠机体内红细胞叩均
有不同程度地降低，即LFU提高。表明龙葵碱对肿
瘤的扩散和转移具有重要的作用，提示龙葵碱可能
是通过提高红细胞的膜流动性和增强红细胞对肿瘤
细胞的免疫黏附作用，从而增强红细胞免疫功能来
进一步激活整个机体免疫系统，进而达到综合的治
疗效果，这可能是龙葵碱抗肿瘤的一个重要机制。
References：
[13JiYB，WangSH，GaoSY，et以．EffectofSolanum
nigrumtotalkaloidonfluidityandmembraneproteinlevel
oftumorcellinH22tumor—bearingmice口]．ChinTradit
HerbDrugs(中草药)，2005，36(2)；239—241．
[2]JiYB，WangSH，GaoSY，et以．EffectofSolanum
nigrumtotal kaloidonsialica idandblockingdegreeof
tumorcellmembraneinHzztumor-bearingmice口]．Chin
TraditHerbDrugs(中草药)，2005，36(I)：78—81．
[3]JiYB，WangHL，GaoSY．EffectofSolanineonDNAand
RNAintumorcelloftumor—bearingmiceD]．ChinTradit
HerbDrugs(中草药)，2005，36(8)l1200-1202．
[4-IJiYB，WanMX，GaoSY。et02．EffectofSolanumnigrum
totalkaloidonsialica idandblockingdegreeoferythrocyte
membraneinSlsomice[J]．ChinTraditHerbDrugs(中草
药)，2005，37(7)：1052—1053．
[5]JiYB，％ouX，JiCF，et02．Effectofaloepolysaccharideon
erythrocytemembranefu ctionofSlsomice[J]．ChinTradit
HerbDrugs(中草药)，2004，35(8)：898—901．
[63GangopaddhyaySK，SarkarS。BegumZ，eta1．Braintumor
inhibitioninexperimentalmodelbyrestorativeimmuno—
therapywithacorpuscularantigen[J]．ExpBiol，2003，41
(8)：805—813．
[7]VanHorssenR，TenHagenTL，EggermontAM．TNF—
alphaincancert eatment：molecularinsights，antitumor
effects，andcli icalutility口]．Oncologist，2006，11(4)l
397—408．
[8]PotseluevaMM，PustovidkoAV，KovalevaInV，eta1．
Cytotoxicactionofpolymorphonuclearleukoeytesontumor
andnormalce lsduringasciteumordevelopmentinvitroand
in口而。口]．Tsitoloqiia，2005，47(1)：57-63．
[9]MurdochWJ，VanKirkEA，SmedtsAM．Complement—
inhibitingeffectofovarianc cerantigenCA一125口]．
CancerL tt，2006，236(1)：54—57．
[10]GaoSY，ZhangYJ，WangSS，eta1．Effectofxianluunt—
canceronpolysaccharideerythroeytemanbranesialica idand
blockingdegree[J]．JHar甜nU ivComm：NatSci(哈尔滨
。商业大学学报：自然科学版)，2005，21(4)；411—414．
万方数据
龙葵碱对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响
作者： 季宇彬， 万梅绪， 高世勇， 邹翔， JI Yu-bin， WAN Mei-xu， GAO Shi-yong， ZOU
Xiang
作者单位： 哈尔滨商业大学药物研究所,博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(3)
被引用次数： 9次
参考文献(10条)
1.Ji Y B;Wang S H;Gao S Y Effect of Solanum nigrum total alkaloid on fluidity and membrane protein
level of tumor cell in H22 tumor-bearing mice[期刊论文]-中草药 2005(02)
2.Ji Y B;Wang S H;Gao S Y Effect of Solanum nigrum total alkaloid on sialic acid and blocking degree
of tumor cell membrane in H22 tumor-bearing mice[期刊论文]-中草药 2005(01)
3.Ji Y B;Wang H L;Gao S Y Effect of Solanine on DNA and RNA in tumor cell of tumor-bearing mice[期刊
论文]-中草药 2005(08)
4.Ji Y B;Wan M X;Gao S Y Effect of Solanum nigrum total alkaloid on sialic acid and blocking degree
of erythrocyte membrane in S180 mice[期刊论文]-中草药 2006(07)
5.Ji Y B;Zou X;Ji C F Effect of aloe polysaccharide on erythrocyte membrane function of S180 mice[期
刊论文]-中草药 2004(08)
6.Gangopaddhyay S K;Sarkar S;Begum Z Brain tumor inhibition in experimental model by restorative
immunotherapy with a corpuscular antigen[外文期刊] 2003(08)
7.Van Horssen R;Ten Hagen T L;Eggermont A M TNFalpha in cancer treatment:molecular
insights,antitumor effects,and clinical utility 2006(04)
8.Potselueva M M;Pustovidko A V;Kovaleva InV Cytotoxic action of polymorphonuclear leukocytes on
tumor and normal cells during ascite tumor development in vitro and in vivo 2005(01)
9.Murdoch W J;Van Kirk E A;Smedts A M Complementinhibiting effect of ovarian cancer antigen CA-125
[外文期刊] 2006(01)
10.Gao S Y;Zhang Y J;Wang S S Effect of xianlu untcancer on polysaccharide erythrocyte manbrane
sialic acid and blocking degree 2005(04)
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1. 季宇彬.王宏亮.高世勇.JI Yu-bin.WANG Hong-liang.GAO Shi-yong 龙葵碱对荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影
响[期刊论文]-中草药2005,36(8)
2. 季宇彬.王胜惠.高世勇.邹翔.汲晨峰.JI Yu-bin.WANG Sheng-hui.GAO Shi-yong.ZOU Xiang.JI Chen-feng 龙
葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸和封闭度的影响[期刊论文]-中草药2005,36(1)
3. 季宇彬.王胜惠.高世勇.汲晨锋.邹翔.JI Yu-bin.WANG Sheng-hui.GAO Shi-yong.JI Chen-feng.ZOU Xiang 龙
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4. 季宇彬.万梅绪.高世勇.邹翔.JI Yu-bin.WAN Mei-xu.GAO Shi-yong.ZOU Xiang 龙葵碱对S180小鼠红细胞膜唾
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6. 贾绍华.王巧玲.彭海生.赵瑛.曲中原.张秀娟 姜黄素对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响[期刊论文]-哈尔滨商业
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7. 周新兰.何祥久.周光雄.叶文才.姚新生.ZHOU Xin-lan.HE Xiang-jiu.ZHOU Guang-xiong.YE Wen-cai.YAO
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8. 赵彦杰.ZHAO Yan-jie 用树脂法提取龙葵果紫红色素的研究[期刊论文]-西北农林科技大学学报（自然科学版）
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9. 安磊.唐劲天.刘新民.高南南.AN Lei.TANG Jin-tian.LIU Xin-min.GAO Nan-nan 龙葵抗肿瘤作用机制研究进展
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2.季宇彬.吴盼.朗朗 龙葵碱对小鼠睾丸生殖细胞线粒体损伤的研究[期刊论文]-药物评价研究 2009(2)
3.宫敬利 超声波辅助法提取大果龙葵色素的工艺研究[期刊论文]-北方园艺 2010(22)
4.巩江.倪士峰.邱莉惠.吴一飞.仝瑛.骆蓉芳.赵桂仿 龙葵素的药理·毒理及药用研究[期刊论文]-安徽农业科学
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5.高世勇.徐丽丽.季宇彬 龙葵碱调控还原型谷胱甘肽和活性氧氧化还原体系损伤线粒体超微结构诱导HepG2细胞凋
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6.秦璐.孙悦.朱劲华.刘美辉 龙葵中的生物活性成分及其抗肿瘤作用的研究进展[期刊论文]-中国肿瘤外科杂志
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7.庞永峰.陈培丰 中药龙葵的化学成分及药理毒理研究进展[期刊论文]-山西中医 2011(1)
8.归小龙 龙葵碱抗肿瘤作用机制研究进展[期刊论文]-中国中医药信息杂志 2009(z1)
9.庞永峰.陈培丰 中药龙葵的化学成分及药理毒理研究进展[期刊论文]-山西中医 2011(1)
10.刘为为.刘延庆.戴小军 龙葵抗肿瘤作用的研究进展[期刊论文]-中药材 2009(3)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200703034.aspx