全 文 ：收稿日期:2011-08-31; 修订日期:2011-11-08
基金项目:湖北省自然科学基金(No． 2006ABA033)
作者简介:李小莉(1959-) ，女(汉族) ，湖北武汉人，现任湖北工业大学生
物工程学院教授，硕士研究生导师，硕士学位，主要从事新药研发及天然
提取物的药理学研究工作．
* 通讯作者简介:邹 群(1965-) ，男(汉族) ，湖北武汉人，现任湖北工业
大学生物工程学院副教授，硕士学位，主要从事天然产物有效成分分离及
活性研究工作．
落葵多糖抗肿瘤及对红细胞免疫功能的影响
李小莉，邹 群* ，张迎庆，孙寅钧
(湖北工业大学生物工程学院，湖北 武汉 430068)
摘要:目的 研究落葵多糖抗肿瘤及对 S180小鼠红细胞免疫功能的影响。方法 采用小鼠肉瘤(S180)移植性肿瘤模型，观
察分析落葵多糖各组对抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数以及红细胞免疫指标的影响。结果 落葵多糖对荷瘤小鼠的肿瘤生
长均表现出显著的抑制作用，抑瘤率达 48． 16%;与模型组比较，能明显提高荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数，并可增加
荷瘤小鼠肿瘤红细胞花环率，提高红细胞 C3b受体花环促进率，降低红细胞 C3b受体花环抑制率(P ＜ 0． 0 1)。结论 落葵
多糖具有一定的抗肿瘤作用，并能明显提高荷瘤小鼠的红细胞免疫功能。其抗肿瘤机制可能与改善荷瘤小鼠红细胞免
疫功能有关。
关键词:落葵; 多糖; 抗肿瘤; 红细胞免疫
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 01． 021
中图分类号:R962 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)01-0046-02
The Effects of Basella rubra Polysaccharide on Anti － tumor and Erythrocyte Immune
Function
LI Xiao-li，ZOU Qun* ，ZHANG Ying-qing，SUN Ying-jun
(Bioengineering School，Hubei University of Industry，Wuhan 430068，China)
Abstract:Objective To study the anti － tumor effects of the polysaccharide of Basella rubra on erythrocyte immune activity in
Sarcomal 180 (S180)mice．Methods S180 － bearing mice were established and randomly divided into 5 groups:negative control，
positive control，three doses of the polysaccharide of Basella rubra(50，100 and 200 mg· kg －1· d －1)． Tumor inhibition rates，
values of thymus index，spleen index，rosette rate of erythrocyte adhere to cancer cell(RBC － CaR) ，serum rosette forming en-
hancement rate of erythrocyte C3b(RFER)and serum rosette forming inhibitory rate of erythrocyte C3b receptor (RFIR)were re-
corded，observed and analyzed． Results The polysaccharide of Basella rubra depressed the growth of tumor － mice remarkably，and
its tumor inhibitory rate was 48． 16% ． Compared with model control group，the spleen indexes and thymus indexes of mice bearing
tumor in experiment group were increased． The polysaccharide of Basella rubra increased the content of RBC － CaR and RFER，
but decreased the content of RFIR． Conclusion The polysaccharide of Basella rubra exhibits anti － tumor activity． It can improve
the erythrocyte immunologic function of tumor － mice，which may be one of anti － tumor mechanisms．
Key words:Basella rubra; Polysaccharide; Anti － tumor; Erythrocyte immunology
落葵 Basella rubra L．为落葵科落葵属草本植物。《中药大辞
典》中记载，落葵全草入药，具有清热、滑肠、凉血、解毒等功效。
近代药理实验表明，落葵具有解热、抗炎以及体外抗氧化等作
用［1，2］。落葵多糖具有抗疲劳和抗氧化酶活性［3］。由于许多中
药中的多糖成分具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等多种生物活性，
故本研究旨在探讨落葵多糖抗肿瘤及对荷瘤小鼠红细胞免疫功
能的影响。
1 材料
1． 1 动物及瘤株 昆明种小鼠，雄性，体质量(20 ± 2)g;豚鼠，均
由湖北省实验动物研究中心提供。瘤株:S180荷瘤小鼠购自同济
医科大学附属临床药物研究所。
1． 2 药品与试剂 落葵多糖，由湖北工业大学生物工程学院天然
药化研究室提供，其含量为 59． 44%;香菇多糖，由武汉迪奥药业
有限公司提供(批号 080109) ;肝素钠，由上海伯奥生物科技有限
公司提供;戊二醛，由国药集团化学试剂有限公司提供。
2 方法与结果
2． 1 落葵多糖对 S180荷瘤小鼠瘤质量的影响 取昆明种小鼠随
机分为 5 组，每组 10 只，分别为落葵多糖高、中、低剂量(200，
100，50 mg·kg －1)组，模型对照组及香菇多糖(100 mg·kg －1)对
照组。各给药组 ig 给药，模型对照组和正常对照组给予等体积
的溶剂，连续给药 7 d。于第 8 天无菌条件下抽取接种 7d、生长
良好的 S180荷瘤小鼠腹水(癌细胞数为 97%以上) ，用无菌生理盐
水 1∶ 4 稀释(肿瘤细胞数为 5． 6 × 105 个 /ml) ，按每只 0． 2 ml，腋
下接种。继续给药 7d。各组于停药次日将小鼠处死，取胸腺和
脾脏备用。取瘤称质量，计算抑瘤率。结果见表 1。表明落葵多
糖各组对 S180小鼠表现出较好的抑瘤作用(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ，
高剂量抑瘤作用接近阳性对照组。
2． 2 落葵多糖对 S180荷瘤小鼠胸腺和脾指数的影响 将“2． 1”项
方法所取胸腺和脾脏称重，计算每只小鼠胸腺指数(胸腺重量 /
小鼠重量)与脾指数(脾腺重量 /小鼠重量)。结果见表 2。表明
落葵多糖各组能明显提高荷瘤小鼠的脾指数(P ＜ 0． 01 ) ，高剂
量组还使荷瘤小鼠的胸腺指数得到明显提高(P ＜ 0． 01 ) ，并且
作用优于阳性对照组。
2． 3 红细胞对肿瘤细胞免疫粘附能力的测定［4］ 昆明种小鼠随
机分为 6 组，其中一组为正常对照组(不给药) ，另 5 组分别按
“2． 1”项方法接种肿瘤，并按“2． 1”项各组剂量连续 ig 给药 7 d。
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各组于停药后次日，小鼠摘眼球取血，滴入预先加有肝素的试管
内，加 2 ml生理盐水混匀，3 000 r·min －1离心 10 min。弃上清
液，用 1∶ 3 比例的生理盐水洗涤 3 次，红细胞计数，根据计数值，
制成红细胞悬液(1 × 108 /ml)待用。实验前取豚鼠新鲜血液，2
500 r·min －1离心 10 min，取血清，低温保存待用。无菌抽取 7d
龄 S180荷瘤小鼠腹腔肿瘤细胞，生理盐水洗涤 2 次，制成肿瘤细
胞悬液(1 × 106 /ml)。取肿瘤细胞悬液 0． 1 ml 加等体积豚鼠新
鲜血清混匀，37℃水浴 30 min，洗涤、离心 1 次，弃上清液，制成血
清致敏癌细胞，加 0． 05 ml红细胞悬液混匀，37℃水浴 30 min，取
出加 0． 1 ml 生理盐水混匀，再加 0． 25%戊二醛固定、涂片、瑞氏
染色，肿瘤细胞呈蓝色，红细胞呈紫红色，在高倍显微镜下观察肿
瘤细胞粘附 3 个或 3 个以上红细胞为花环，计数 100 个肿瘤细
胞，计算肿瘤红细胞花环百分率。结果见表 3。与正常组比较，
荷瘤小鼠红细胞粘附肿瘤细胞的能力下降，花环率降低。给予落
葵多糖后均有不同程度地提高，荷瘤小鼠肿瘤红细胞花环率明显
高于模型组，其中以中、高剂量组提高程度比较显著(P ＜ 0． 01)。
表 1 落葵多糖对 S180小鼠的抑瘤作用(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg －1
瘤质量
m / g
抑瘤率
(%)
模型 － 1． 25 ± 0． 16 －
香菇多糖 100 0． 46 ± 0． 162) 62． 98
落葵多糖(低) 50 1． 04 ± 0． 111) 16． 69
落葵多糖(中) 100 1． 00 ± 0． 181) 20． 30
落葵多糖(高) 200 0． 65 ± 0． 122) 48． 16
与模型组比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;n = 10
表 2 落葵多糖对 S180小鼠胸腺和脾指数的影响(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg －1
胸腺指数 脾指数
模型 － 2． 71 ± 0． 36 3． 51 ± 0． 25
香菇多糖 100 2． 93 ± 0． 39 4． 03 ± 0． 651)
落葵多糖(低) 50 2． 70 ± 0． 33 4． 15 ± 0． 472)
落葵多糖(中) 100 2． 95 ± 0． 33 4． 52 ± 0． 432)
落葵多糖(高) 200 3． 22 ± 0． 322) 4． 94 ± 0． 472)
与模型组比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;n = 10
表 3 落葵多糖对 S180小鼠红细胞粘附肿瘤细胞能力的影响(珋x ± s)
组别 剂量 C /mg·kg －1 花环率(%)
正常 － 29． 98 ± 1． 86
模型 － 9． 71 ± 1． 313)
香菇多糖 100 22． 49 ± 1． 842)
落葵多糖(低) 50 11． 81 ± 1． 041)
落葵多糖(中) 100 15． 12 ± 1． 132)
落葵多糖(高) 200 18． 17 ± 1． 162)
与模型组比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;与正常组比较，3)P ＜ 0． 01;
n = 10
2． 4 落葵多糖对荷瘤小鼠红细胞免疫调节因子活性的影响 按
“2． 3”项方法分组、接种肿瘤，并按“2． 1”项各组剂量连续 ig给药
7 d。各组于停药后次日，小鼠摘眼球取血，离心，制得新鲜血清
待用。采用郭氏法［4］，取 3 支试管。第 1、第 2 支试管加入待测
新鲜血清各 0． 075 ml，第 1 管放 58℃水浴 30 min，第 2 管放置室
温，第 3 管加 0． 075 ml生理盐水，然后每管再加入洗过 3 次的正
常人红细胞悬液(1． 25 × 107 /ml )0． 05 ml 混匀，放入 37℃水浴
30 min;再加补体致敏酵母菌悬液(1 × 108 /ml)0． 05 ml 混匀，放
37℃水浴 30 min;加 7 滴生理盐水混匀，再加 2 滴 0． 25%戊二醛
混匀。从各试管中取出约 1 /3 细胞悬液水平涂片，吹干，加甲醛
固定，用瑞氏染液染色，高倍镜观察，红细胞呈红色，酵母菌呈蓝
色。每管涂片计数 100 个红细胞，按各自标准，算出花环率，按公
式求出红细胞 C3b(RBC － C3b)受体花环促进率和抑制率。
RBC － C3b受体花环促进率(RFER)=(58℃灭活血清组花环率 －模
型对照组花 环率)/模型对照组花环率
RBC － C3b受体花环抑制率(RFIR)=(58℃灭活血清组花环率 －室温
血清组花环率)/58℃灭活血清组花环率
结果见表 4。与正常组比较，荷瘤小鼠红细胞 C3b受体花环
促进率有非常显著的下降(P ＜ 0． 01) ，C3b受体花环抑制率明显升
高。给予落葵多糖后，这两项指标均有较大地改善，落葵多糖中、
高剂量组的红细胞 C3b受体花环促进率明显升高(P ＜ 0． 01) ，红
细胞 C3b受体花环抑制率显著降低(P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ，且高剂
量组效果与阳性对照组相当(P ＜ 0． 01)。
表 4 落葵多糖对 S180小鼠红细胞免疫调节因子活性的影响(珋x ± s)
组别
剂量
C /mg·kg －1
RFER REIR
正常 － 101． 19 ± 9． 43 33． 86 ± 7． 22
模型 － 25． 54 ± 12． 033) 49． 13 ± 7． 273)
香菇多糖 100 82． 69 ± 17． 052) 33． 36 ± 7． 502)
落葵多糖(低) 50 42． 86 ± 12． 18 47． 31 ± 8． 78
落葵多糖(中) 100 68． 83 ± 14． 602) 35． 29 ± 0． 601)
落葵多糖(高) 200 84． 42 ± 11． 962) 31． 84 ± 0． 592)
与模型组比较，1)P ＜ 0． 05，2)P ＜ 0． 01;与正常组比较，3)P ＜ 0． 01;
n = 10
3 讨论
多糖(Polysaccharide)是生物体内普遍存在的一类生物大分
子，具有许多重要的生物活性，如参与细胞骨架的构成，作为多种
内源性生物活性分子的组成成分等。近年来，各国学者研究发现，
多糖不仅对促进机体特异性免疫与非特异性免疫、细胞免疫与体
液免疫有广泛的影响，同时还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、
抗衰老、抗炎等一系列作用。本实验结果表明，落葵多糖具有一定
的抗肿瘤作用。对于 S180荷瘤小鼠的抑瘤作用，高剂量的抑瘤率
为 48． 16%，与模型对照组相比差异显著(P ＜0． 01 )。脾脏和胸腺
是淋巴细胞成熟的重要场所，这两个免疫器官的萎缩是导致淋巴
细胞数量减少的重要原因。落葵多糖能显著提高荷瘤小鼠的胸脾
脏指数，说明落葵多糖的抗肿瘤活性可能是通过促进荷瘤小鼠脾
脏与胸腺的发育，从而增加淋巴细胞增殖来实现的。
红细胞免疫是机体免疫系统的重要组成部分，其在天然免疫
反应中的最大作用是识别、黏附和运输抗原至巨噬细胞网状内皮
系统销毁。红细胞免疫功能主要是通过 RBC 膜上所含 C3b受体
(CR1)介导实现的。肿瘤细胞可旁路激活和黏附补体 C3b，而红
细胞膜上的 CR1 能与肿瘤细胞表面的 C3b相黏附，使 RBC得以发
挥其携带清除免疫复合物，识别储存抗原，促进吞噬细胞吞噬［5］
的功能。所以 CR1 的活性降低必然会导致 RBC对癌细胞的调理
促吞噬能力下降及循环免疫复合物(CIC)清除障碍，从而使肿瘤
细胞逃脱免疫系统的攻击，癌细胞得以生长繁殖。本实验结果表
明，模型组小鼠肿瘤红细胞花环率与正常组比较明显降低，提示
荷瘤小鼠红细胞免疫功能下降，其机制可能为肿瘤细胞分泌的抗
原物质入血后，造成循环血液中的肿瘤抗原 －抗体 －补体形成免
疫复合物增高，CR1 被消耗或被 CIC 覆盖，占位封闭 CR1，使 C3b
空位减少，抑制其作用而出现 RBC － CaR下降。而落葵多糖可明
显提高荷瘤小鼠(S180)肿瘤红细胞花环率。其机理可能是落葵
多糖通过增强红细胞 CR1 数量或提高其活性，清除、消毁了 CIC，
减少了 CIC的封闭作用，从而提高荷瘤小鼠的红细胞免疫黏附肿
瘤细胞的功能。
有研究发现［5］，血清中还同时存在对 RBC免疫功能具有正、
负调节作用的两种物质，即免疫抑制因子(REIR)和免疫促进因
子(RFER)。RBC免疫粘附作用的强弱不仅与 RBC 补体数目与
活性有关，而且与血清中存在的 RBC 免疫黏附抑制因子和促进
因子有关。在正常人血清中促进因子活性明显大于抑制因子，肿
瘤患者抑制因子活性上升，促进因子活性下降，因而认为机体内
存在着红细胞免疫正负调节机制，该调节机制紊乱可能是某些疾
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 1 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 1 期
病发生发展的原因。落葵多糖还能通过提高荷瘤小鼠红细胞
CR1 花环促进率，降低花环抑制率的途径改善机体的免疫状态，
以增强红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力。总之，落葵多糖具有一
定的抗肿瘤作用，并能使荷瘤小鼠的红细胞免疫功能明显提高。
参考文献:
［1］ 李育浩，吴清和，李茹柳，等． 落葵的解热抗炎作用［J］． 中药材，
1992，15(6) :32．
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清除效应［J］．贵州农业科学，2007，35(2) :12．
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酶活性的影响［J］．中国医院药学杂志，2010，30(5) :377．
［4］ 郭 峰． 现代红细胞免疫学［M］． 上海:第二军医大学出版社，
2002:62，87．
［5］ 季宇彬，汲晨锋，邹 翔，等． 2 种仙人掌多糖对 S180 小鼠红细胞免
疫功能影响的研究［J］．中国中药杂志，2005，30(9) :690．
收稿日期:2011-03-29; 修订日期:2010-09-08
基金项目:广东省自然科学基金(No． 9151052005000003) ;
广东省中医药管理局资助项目(No． 2010233)
作者简介:邹玉繁(1975-) ，女(汉族) ，江西樟树人，现任广东食品药品职
业学院副教授，硕士学位，主要从事药物新剂型新制剂研究工作．
* 通讯作者简介:汪小根(1970-) ，男(汉族) ，安徽歙县人，现任广东食品
药品职业学院教授，博士学位，主要从事中药新药研究工作．
广藿香酮巴布剂体外释放度与体外透皮相关性研究
邹玉繁，汪小根*
(广东食品药品职业学院，广东 广州 510520)
摘要:目的 探讨广藿香酮巴布剂的药物释放机理。方法 以广藿香酮为指标成分，溶出仪测定广藿香酮巴布剂体外释放
度，扩散池法测定其体外透皮吸收，并采用 Ritger － Peppas数学模型进行拟合。结果 两种方法结果均表明释放模式符合
Higuchi方程。结论 广藿香酮释放符合 Fick＇s扩散，其释放机理为扩散和骨架溶蚀协同作用。
关键词:广藿香酮巴布剂; 体外释放度; 体外透皮; 相关性
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 01． 022
中图分类号:R283 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)01-0048-02
体外释放度检查是衡量透皮制剂释放性能的重要参数，在
TDDS系统中，药物首先从储库中释放至皮肤表面，再透过角质
层和活性皮肤层，在局部或吸收进入体内发挥作用。因此，药物
的释放度与 TDDS系统的透皮率及制剂的药效有密切关系。本
文分别采用扩散池法与溶出仪法对广藿香酮巴布剂的体外释放
度进行了测定，并进行释放量和时间(Q － t)线性回归和比较，采
用 Ritger － Peppas模型进行拟合，以期阐明广藿香酮巴布剂的释
放机制。
1 材料与仪器
TRACE GC气相色谱仪，X calibur色谱工作站(美国 Finnigan
公司) ;RYJ － 6A 型药物透皮扩散试验仪(上海黄海药检仪器
厂) ;十万分之一电子分析天平(德国 Sartorius 公司) ;LD5 － 2A
型高速离心机(北京医用离心机制造厂) ;ZRS － 8 型智能药物溶
出仪(天津大学无线电厂) ;广藿香酮对照品，自制;色谱甲醇，天
津市四友生物医学技术有限公司出品;广藿香酮巴布剂(6 cm × 9
cm) ，自制。水为双蒸水，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 扩散池法研究广藿香酮巴布剂的体外释放度 采用 Franz
装置(接受池体积 6． 5 ml，接受池有效接触面积 2． 8 cm2) ，固定
装置，将巴布剂夹在扩散室与接受室之间，背衬层向上。接受室
加满含 50%无水乙醇的生理盐水作为扩散介质，夹层以(32 ±
1)℃水浴保温，磁力搅拌子以(200 ± 5)r /min 的速度搅拌，预平
衡 1h，分别于 1，2，4，6，8，12，16，24 h 取出 3 ml 置于 10 ml 具塞
玻璃离心管内，加入 5 ml正己烷∶ 二氯甲烷(1∶ 1) ，涡旋混匀器
混匀 1 min后 3 000 r /min × 5 min 离心，用干燥的刻度吸管精密
吸取 4 ml萃取液，50℃的 N2 吹干，500 μl甲醇涡旋 1 min溶解残
渣后转移到 0． 5 ml的 EP 管中，离心 10 000 r /min × 5 min 后，吸
取 5μl注入气相色谱仪测定［1，2］。按以下公式计算单位面积累
积释放量(Q，μg /cm2)。
Q =
Cn × 6． 5 +∑
n － 1
i = 1
Ci × 3
2． 8
式中，Cn:第 n个取样点测得的药物浓度(μg /ml) ;Ci:第 i(i = n
－ 1)个取样点测得的药物浓度(μg /ml) ;A:有效扩散面积(2． 80
cm2)
2． 2 溶出仪法研究广藿香酮巴布剂的体外释放度 取巴布剂一
片，按体外释放度测定法［3］，采用溶出度测定法第 3 法装置，以含
50%无水乙醇的生理盐水 250 ml 为释放介质，预温至(32 ±
0． 5)℃，将巴布剂(面积约 50 cm2)固定于两层碟片的中央，释放
面向上，再将网碟置于烧杯下部，并使贴剂与桨底旋转面平行，两
者相距(25 ± 2)mm，开始搅拌，转速 100r /min，分别于 1，2，4，6，
8，12，16，24 h取样 2 ml，取样位置在介质液面与桨叶上端之间正
中，离溶出杯壁距离 1 cm，并立即补充等量的空白释放介质，释
放液以 0． 45μm的微孔滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液 1 ml，
置于 5 ml具塞玻璃离心管内，加入 5 ml正己烷∶ 二氯甲烷(1∶
1) ，照“2． 1”项下“涡旋混匀器混匀 1 min 后 3 000 r /min × 5 min
离心…”操作，注入液相色谱仪测定。按以下公式计算单位面积
累积释放量(Q，μg /cm2)。
Q =
Cn × 250 +∑
n － 1
i = 1
Ci × 2
50． 265
式中，Cn:第 n个取样点测得的药物浓度(μg /ml) ;Ci:第 i(i
= n － 1)个取样点测得的药物浓度(μg /ml) ;A:有效扩散面积
(50． 265 cm2)。结果见表 1 ～ 3。
表 1 扩散池法测定体外透皮吸收结果
时间 t /h 累积释放量 A /μg·cm －2 累积释放百分率(%)
1 0． 356 8． 90
2 0． 498 4 12． 46
4 0． 648 16． 22
6 0． 908 22． 70
8 1． 116 27． 90
12 1． 395 34． 88
16 1． 622 40． 55
24 2． 146 53． 65
n = 4
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