全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1017·
3讨论
各大孑L吸附树脂对肿节风总黄酮的最大吸附能
力差别不大，但各树脂在不同溶剂中的解吸性能却
有很大差异。HPD400树脂表现出较好的解吸性能，
其吸附、分离肿节风总黄酮的工艺条件为：肿节风总
黄酮上样质量浓度为10mg／mL，肿节风总黄酮最
大吸附量为9．5mg／mL，吸附体积流量为2．5mL／
min，洗脱剂为70％乙醇，洗脱剂用量为3倍柱体
积，树脂可重复使用3次。在此条件下，用HPD400
大孔吸附树脂吸附分离肿节风总黄酮，总黄酮回收
率为85％左右。
树脂对化学成分的吸附及解吸研究，目前文献
报道的有动态吸附法和静态吸附法。动态吸附法筛
选大孔吸附树脂工作量大，静态吸附法则相对工作
量小。本实验采用静态吸附法筛选适合目标分离的
大孔吸附树脂，其结果是否与动态法相一致，还有待
进一步研究。
影响树脂吸附分离中药化学成分的因素很多。
目前，大孑L吸附树脂分离纯化中药中的化学成分还
有许多问题尚未解决，如工艺条件研究的规范性方
法和技术要求等[4]。在实际应用中，只有综合考虑各
种因素，才能确定树脂的型号及最佳吸附分离条件。
本文报道的实验结果是在实验室条件下获得，可为
肿节风总黄酮的提取分离提供实验方法，为大孔吸
附树脂在大生产中的应用提供技术参数。
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制备色谱系统从岩黄连中分离岩黄连碱
蒋伟哲，莫长林，黄兴振，凌玲
(广西医科大学第一附属医院新药研究开发中心，广西南宁 530021)
摘要：目的采用制备色谱系统从岩黄连中分离纯化其活性单体岩黄连碱，建立其纯化工艺和技术。方法用
醇一酸水一氯仿的方法从岩黄连中提取出总生物碱，然后采用制备色谱系统AKTAExplorer100从中分离出岩黄连
碱。结果产品经HPLC检测质量分数达99o／／oo以上。结论该方法先进，重复性好，可用于分离纯化岩黄连碱。
关键词：岩黄连；岩黄连碱；制备色谱；AKTAExplorer100
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)07—1017一03
SeparationofdehydrocavidinefromCorydalissaxicolabypreparativechromatography
JIANGWei—zhe，MOChang—lin，HUANGXing—zhen，LINGLing
(CenterofDrugResearchandDevelopment，TheFirstAffiliatedHospital，
GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China)
Keywords：CorydalissaxicolaBunting；dehydrocavidine；preparativechromatography；AKTA
Explorer100
岩黄连是罂粟科紫堇属植物石生黄堇
CorydalissaxicolaBunting的全草，产于广西、贵
州、西藏、湖北、甘肃等地，具有清热、消肿、止痛等作
用。广西民间将其全草用于消肿、止痛、拨毒、治疗疥
疮肿毒，也用于治疗肝炎，肝硬化等疾病Ⅲ。岩黄连
的有效部位为总生物碱。用其总生物碱注射液对
收稿日期：2005—10—15
基金项目：广西科技厅科技攻关项目(桂科攻032204—5G) ⋯
作者简介：蒋伟哲(1968)，男，广西宜州人，副主任药师，副教授，硕士生导师，1991年同济医科大学药学院毕业，从事天然药物、药物
化学研究和新药开发。现承担和参加15项国家和广西省级科研课题，获得2000年度广西壮族自治区科技进步奖三等奖1
项，2005年广西医药卫生适宜技术推广奖一等奖1项，已发表研究论文40篇。
Tel：(0771)5355725E—mail：jiangweizhe6812@yahoo．com．en
万方数据
·1018· 中摹菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
100例肝炎病例观察，发现总的有效达76．5％[2]。其
总生物碱成分包括卡维丁、消旋岩黄连碱、岩黄连
碱、(+)四氢巴马汀等。对其单体进行的药理作用研
究表明，其主要活性成分为岩黄连碱脱氢卡维汀
(dehydrocavidine)，其对金黄色葡萄球菌、乙型溶血
性链球菌、白喉杆菌有抑制作用，对耐青霉素的白色
和金黄色葡萄球菌亦有抑制作用，并有一定的镇静、
止痛作用¨]。
由于岩黄连中生物碱多为性质相近的异喹啉类
生物碱，相对分子质量相差不大，因此对于单体的分
离具有很大的难度。采用传统的分离纯化方法，难以
获得高纯度的单体，本研究运用制备色谱系统
AKTAExplorer100，根据目标产物岩黄连碱的性
质特点，优化色谱条件进行分离纯化，并采用HPLC
进行纯度测定，证实可获得高纯度的岩黄连碱，相比
其他的方法更先进、可靠，适用于工业推广。
1材料和仪器
岩黄连干燥全草由广西河丰药业有限公司提
供，经广西食品药品检验所中药室黄捷副主任药师
鉴定；岩黄连碱对照(中国药品生物制品检定所，批
号111651～200301)；乙腈(色谱纯)；高纯水。所有溶
剂配制后，均用超声溶解，脱气15rain，并在0．45
肛m微孔过滤器中滤过。
制备色谱系统AKTAExplorer100(安玛西亚
公司)；Agilent1100液相色谱系统(德国安捷伦科
技有限公司)；旋转蒸发仪(上海申生仪器厂)。
SartoriusME215S电子天平(北京赛多丽斯仪器系
统有限公司)；AS5150A超声波仪器(天津奥特比赛
恩斯有限公司)；oL一5000B一Ⅱ飞鸽离心机(上海
安亭科学仪器厂制造)。
2实验方法
2．1粗品的制备：将岩黄连药材洗净晒干，粉碎成
粗粉，称取岩黄连粗粉10kg，用5倍量90％乙醇浸
渍24h，回流提取，连续4次，每次1h，合并提取液，
减压回收乙醇并浓缩至相对密度为0．92～1．02(60
℃)的清膏，放冷，滤过，滤液浓缩至相对密度为
1．16～1．20(60℃)的稠膏。于稠膏中加入适量蒸
馏水，用10％盐酸溶液，调节pH值2～3，搅拌充
分，滤过，用10％盐酸溶液洗4～5次，合并酸水液，
用碳酸钠调节pH值9～10，析出棕褐色沉淀，滤过，
滤渣用5倍氯仿提取5～6次，合并氯仿液，加无水
硫酸钠脱水，滤过，回收氯仿至近干，再加少量乙醇，
减压回收溶剂，干燥，即得岩黄连总碱粗品。
2．2样品预处理：称岩黄连总碱粗品约4g，用流动
相溶解并定容至100mL，超声20min，超速离心5
min(5000r／min)，取上清液，用0．45肛m微孔滤膜
滤过，所得的粗品用于分离纯化使用。
2．3 岩黄连碱的分离和纯化：色谱条件：色谱柱
(600mm×16mm，以安玛西亚的SoURCE30
RPC为柱填充料)，流动相为0．2mol／LNa2HPO。
(pH8．5)一乙腈，梯度洗脱(前40rain乙腈比例由
lo％升至40％，40rain之后为50％)，体积流量为3
mL／min，紫外检测波长为347nm。
进样方式：样品泵P一960自动进样，样品环定
量；收集器：Prac一900自动收集器；上样量：2mL。
收集方式：运用Prac一900进行峰收集。方式为
UVSlope，UVStartslope100mAu／min，UVEnd
slope75mAu／min。MininumPeakWidth1．0
min。分离的图谱见图1。
I 收集峰，、
＼
f、
＼
＼～J
50 6030 40
，／mln
图1岩黄连总碱租品的分离图谱
Fig．1PreparativeHPLCchromatogramofcrude
pruductofC．saxicolat talkaloids
2．4样品的去盐处理：把所收集的样品浓缩以后再
次过柱，通过PharmadexG一20的色谱柱，上样量为
2mL，然后以3mL／min的水为流动相冲柱子约3
个柱体积以除去混在样品中的盐，然后用甲醇把样
品洗脱下来并进行收集。经旋转蒸发仪浓缩，浓缩液
冷冻干燥后，可以得到淡黄色粉末。
3岩黄连碱薄层色谱定性鉴别
取20cm×5am的玻璃板，硅胶G(加以0．5％
的羧甲基纤维素钠为黏合剂)制板活化备用，展开剂
为醋酸乙脂一氯仿一甲醇一浓氨(10：2：2：2)，点样
量约为2弘L，展开，取出晾干，置紫外灯(365nm)下
检视，得薄层色谱图，见图2。可以看出：在这个收集
峰样品和对照品相应位置上，显相同颜色荧光斑点，
说明所收集峰的样品里面含有岩黄连碱，初步判断
此收集峰为目标峰。
4 HPLC法对制备的样品进行纯度测定
4．1 色谱条件：色谱柱为日本HiQSilC。。柱(250
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1019·
l一对照品
2一收集峰样品
3一总碱
l-xeferencesubstance
2-elutionpeaksample
3一totalkoloids
图2薄层色谱图
Fig．2TLChromatogram
mm×4．6mm，5pm)；流动相为乙腈一水(50：50，
含0．34％磷酸二氢钾和0．17％十二烷基硫酸钠)；
体积流量为1mL／min；紫外检测波长347nm；柱温
20℃，进样量为20弘L。理论板数按岩黄连碱峰计
算，应不低于6000。
4．2待测液的制备：把制备所得样品，用流动相定
容于100mL量瓶中，超声溶解15min，在0．45弘m
微孔过滤器中滤过，作为待测液。
4．3测定：用外标法测定相应样品纯度，平行测定
5次并取平均值，结果岩黄碱的保留时间为11．968
min，理论塔板数为21055，质量分数为99．17％，见
图3。可以看出，通过对制备色谱系统AKTA
Explorer100的色谱条件优化，从岩黄连粗品中可
分离出岩黄连碱，HPLC纯度测定结果表明其质量
分数达到了99％以上，该方法适用于分离纯化岩黄
连碱单体，为工业生产提供了有利的依据。
0 2 4 68 101214 0 5 10 15 20 02 468 101214
f／min
*一岩黄连碱
*一dehydrocavidine
图3对照品(A)、粗品(B)和纯化品(C)的HPLC色谱图
Fig．3HPLCChromatogramsfreference
substance(A)，crudeproduct(B)，
andpurifiedsamples(C)
5讨论
本实验的探索所用的技术是依托于制备色谱系
统AKTAExplorer100，采用的是SOURCE
30RPC为填充剂，即反向技术。分离生物碱一般都
使用的阳离子交换树脂，但是运用阳离子交换树脂
进行分离的时候，因为岩黄连中生物碱多为性质相
近的异喹啉类生物碱，而且均为季胺类的生物碱，极
性很大，也很接近，较难洗脱下来，而且其梯度洗脱
操作较为麻烦，不利于工业生产。而本法具有简便、
快捷、周期短、自动化程度高、收集全面等优点，而且
样品纯度高，适合工业的推广。
在实验条件的探索中发现当体积流量增大的时
候，岩黄连碱的保留时间会降低，但是分离度也随之
降低，而且压力很大；减小体积流量后虽然分得开但
是峰变宽保留时间变长，因此选择了3mL／min的
体积流量既使保留时间缩短又能达到良好的分离
度。同样在上样量一定的情况下，上样体积的增加使
分辨率逐渐降低，峰扩散；当上样体积大于2mL
后，峰就开始不对称了，所以上样体积定在2mL。
对于梯度洗脱，根据制备色谱系统AKTA
Explorer100本身具有的条件优化功能，经过多次
实验的优化，决定采用前40min乙腈比例由10％
升至40％，40min之后为50％，是由于岩黄连碱在
流动相的pH条件下的极性较小，考虑到系统的平
衡时间所以采取较为缓和的梯度。当梯度拉得太快
的时候分离度也随之减小。而且在除盐的选择上采
用的是葡聚糖凝胶的方法，比离子交换法除盐更为
简便。AKTAExplorer100先进的柱切换技术使之
更容易操作。用安玛西亚的制备色谱系统AKTA
Explorer100进行中药的分离和纯化，具有简便、快
捷、周期短、自动化程度高、收集全面等优点。除此之
外还可以连接网络，进行远程的控制，对于科研和生
产都具有重要的意义。
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止
万方数据
制备色谱系统从岩黄连中分离岩黄连碱
作者： 蒋伟哲， 莫长林， 黄兴振， 凌玲， JIANG Wei-zhe， MO Chang-lin， HUANG Xing-zhen
， LING Ling
作者单位： 广西医科大学第一附属医院,新药研究开发中心,广西,南宁,530021
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(7)
被引用次数： 2次

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引证文献(2条)
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