全 文 ：中单菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月·433·
蒲黄的HPLC指纹图谱研究
马红飞，刘斌’，周军挺
(北京中医药大学中药学院，北京100102)
摘要：目的建立蒲黄药材的指纹图谱分析方法，为蒲黄的质量控制提供新方法。方法采用反相高效液相色谱
法，YWGⅧC色谱柱(250mmX4．6mm，5pm)，流动相为0．05“磷酸水溶液一乙腈系统，线性梯度洗脱，检测波长
264Bill．进样量为5pL。结果建立了蒲黄药材的HPLC指纹图谱，以香蒲新苷峰为参照峰，确立了蒲黄药材指纹
图谱中的12个共有峰，测定了8批蒲黄HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度。结论所建立的HPLC指纹图谱有
很好的精密度、重现性和稳定性，适用于蒲黄药材的质量控制。
关键词：蒲黄；HPLC；指纹图谱；相似度
中国分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)03—043303
HPLCFingerprintofPollenTyphae
MAHong—fei，LIUBin，ZHOUJunring
(SchoolfChineseMateriaMedica，BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Beijing100102，China)
Abstract：ObjectiveToes ablishtheHPLCFingerprintofPollenTyphaeandgiveanewmethodf r
qualityeontrolofPollenTyphae．MethodsRP—HPLCwasusedonaYWG—C18column(250mm×4．6
mm，5pm)withthegradientelutions lventsystemcomposedofacetonitrile0．05％H3PO{watersolu
tion，thedetectionwavelengthwas254nm，sampleinj ctionwas5vL．ResultsHPLCFingerprintof
PollenTyphaewasestablished．Takingtyphaneosideasthereferencepeak，12commonpeaksweres lect
edasthefingerprinteaksofPollenTyphae，thesimilaritybe weenthefingerprintofeightbatchesof
PollenTyphaesamplesandreferencefingerprintwasdetermined．ConclusionThestablishedHPLCfin—
gerprinthasdesirableprecision，reproducibility，andsta canbeappliedtothequalitycontrolof
PollenTyphae．
Keywords：PollenTyphae；HPLC；fingerprint；similarity
蒲黄始载于《神农本草经》，列为上品，为香蒲科
植物水烛香蒲TyphaangustifoliaL．、东方香蒲丁．
orientalisPresl或同属植物的干燥花粉，是一味常
用中药，性味甘平，归肝、心包经，具有止血、化瘀、通
淋的功效，用于吐血、咯m、衄血、崩漏、外伤出血、经
闭痛经、脘腹刺痛、跌仆肿痛、血淋涩痛[13等症。蒲黄
化学成分主要包括黄酮类、甾类、烷烃类等o]，目前，
其质量控制多以一个或几个成分的量为指标，采用
HPLC方法测定。3“J。指纹图谱是一种以现代分析
技术为依托的新的中药质量控制模式，是目前国际
上公认的控制中药质量的理想技术。本实验采用反
相高效液相色谱法建立蒲黄的指纹图谱，对8批不
同蒲黄的质量进行评价。
I仪器与试药
Waters600型高效液相色谱仪(Waters2487
Dualx紫外检测器、四元梯度泵、在线脱气装置)，
Millennium”ChromatographyManage 化学工作
站。蒲黄样品购自北京市(s—luS一5)和内蒙古赤峰
市(s一6uS一8)，采用文献方法“]，经刘斌副教授鉴定
为香蒲科植物水烛香蒲T．angustiJoliaI．．的干燥
花粉。香蒲新苷对照品(自制，经HPLC归一化法测
定，质量分数为99．18％)，乙腈为色谱纯(美国
Fisher公司)，水为娃哈哈纯净水。
2方法与结果
2．1 色谱条件：YWGc18色谱柱(250mm×4．6
mm，5pm，北京分析仪器厂)，柱温为室温，检测波
鉴銎是留：眢薹翠髻磊管理局中医葑科学拄术研究专项中药研究课题(02—3。zPl2)
尊嘉蔫器薯5％≯‘斌1978Tehl：女(01’0内16蒙47古11619治9黑意，毫盒璺吉墨盏：|：；嘉嚣慧毫烹向为中药质量控制方法研究。
万方数据
中草s ChineseTraditionalndHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
长254nm，迸样量5pL，流动相为0．05％磷酸水溶
液(A)一乙腈(B)，线性梯度洗脱：0～3rain，0·跖～
10％B；31～140min，13％B；141～160rain，
13％～23％B，体积流量为1．0mL／min。
2．2对照品溶液制备：精密称取香蒲新苷对照品5
mg，用甲醇溶解并定容至50mL，HPI。C分析前用
0．45gm微孔滤膜滤过。
2．3供试品溶液制备：取不同蒲黄样品约1．0g，精
密称定，分别精密加入甲醇10mL，称定质量，超声
提取30rain后，放玲至室温，补足减失的溶剂质量，
摇匀，静置，HPLC分析前用0．45pm微孔滤膜滤过
上清液，作为供试品溶液。
2．4指纹图谱测定：按照上述色谱条件，对8批不
同蒲黄药材进行了测定，通过比较不同样品色谱蜂，
确定共有峰12个，见图1。相对保留时间和峰面积
见表1和2。取香蒲新苷对照品溶液进样，记录色谱
图，并与样品指纹图谱比较，确认样品图谱中与香蒲
新苷保留时间对应的第10号峰为香蒲新苷，并将其
作为参照物峰。
围1 8批蒲黄药材的HPLC指纹图谱
Fig，1HPLCFingerprintsofeightbatches
ofPollenTyphae
表1 g批蒲黄药材指纹图谱共有峰的相对保留时间
Table1 Relativeretentionmesofcolnmonpeaksfor
fingerprintsofeightbatchesofPollenTyphae
相对保留时阃
峰号1i—孬—iFl百—磊—iFl了—五
蛙1
蛙2
蛙3
晦4
蝰5
峨6
睦7
毪8
峰9
蛙10
蛙11
妊12
o．07】o．072o071o．070o 071o．070 0720．069
0．152O．1520，lSO0．1480-1490．1470。i520，144
0．27l0 2670．26902700．26902660．2720 261
03240．3210 3210．320．320 3180．3270．308
0．3540．3520 35303540．3530．3510．3580 341
0．4350．4360．43604370．4360．4340．4430．424
0 7450．7430．74407470．7450．7410．7490．736
0．8540，8550-8530．8540．8520．8510．8570．849
0．9460 9480．9460 9470．9450．9450．9470 945
1．0001．0001．0001．0001．0001．0001．0001 000
1．1571 1611．1541 1501．1491 1561．1601．168
1．216 1 2201．2151．2101．2101．216i．2191．230
衰2 8批蒲黄药材指纹匿谱共有嶂的相对蜂面积
Table2 Relativepeakareasofcommonpeaksforfinger—
printsofeightbatchesofPollenTyplme
相对峰面积峰号1i—孬—irl百—爵—irli百
晦2 o．2440．3220．2890．2280．2390．2320．3330 159
蛙3 0．0670．0440．0950．1450-0870．1160．1530 239
蟪4 0．0520．0120．0490．0380．0280．0520．0590 071
略5 0．0340，0340．0420．0490．0220．0470．0460 088
略6 0．1670 196 0．5050．319 0．3050．2640．3980 336
畦7 0．1920．1380，i040．11l0．170O．1070．1240．113
崦8 0．1740 1340．0860．0970．1510 0990．0940 093
睦9 0．1070 0860．1010．0640．0840．0510．0820．054
略10i 0001 0001．0001．0001．0001．0001．0001-000
蛙110．3540．4080．4020，2690．3110 2100．3750 209
堡!!!：!!!!：!塑!：!!!!：!竺!：!翌!：!!!!：!!!!：i!i
2．5精密度试验：取蒲黄样品s—l供试品溶液连续
进样5次，记录指纹图谱。以第lo号峰为参照物峰，
计算12个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的
RSD值分别在0．4l％～1．77％和1．34％～
2。88％，符合指纹图谱要求。
2．6重现性试验：精密称取5份蒲黄样品S一1，制
备供试品溶液，分别进样并记录指纹图谱。结果显
示，12个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD
值分别在0．23％～2．51％和1．19％～2+85％，符合
指纹图谱的要求。
2．7稳定性试验：取蒲黄样品s一1供试品溶液分别
于制备后o、3⋯69 12、18、24h进样分析，记录色谱
图，计算12个共有峰相对保留时间和相对峰面积的
RSD值分别在0．42％～3．82％和1．08％～
2．94％，表明样品溶液在24h内基本稳定。
2．8参照图谱生成及相似度计算：用中药指纹图谱
相似度计算软件(国家药典委员会主持开发)，生成
参照图谱，如图2。计算不同蒲黄药材指纹图谱与参
照图谱的相似度为0．915～0．996，见表3。
』』生生【L=．。!14丛厶
图2对照固谱
3 讨论 Fig’2R曲。眦。fj“gerpr‘”‘
3．1流动相条件优化时用了4种流动相：乙腈～水、
乙腈一0．05％磷酸水、甲醇一水、甲醇一0．05％磷酸水，
并尝试了这4种流动相的多种梯度洗脱，结果表明
乙腈一0．05％磷酸水系统最佳，采用该系统各个色谱
峰的峰形和分离度都较好，因此选定该系统为蒲黄
药材指纹图谱检测的流动相。
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerb Drugs第37卷第3期2006年3月·435·
裹3 8批蒲黄药材指纹圈谱与参照圈谱的相似度
Table3 Similaritiesoff ngerprintsofeight
batchesofPollenTyphae
样品 相似度 样品 相似度
S1 o．994 S一5 0．947
S2 0．942 S-6 0．915
S-3 0．989 S一7 0．982
S4 0 986 S-8 0．996
3．2试验过程中选择了210、254、280、360nm等
多个波长分析，发现检测波长为254rim时，色谱峰
的峰强度普遍比较强，基线比较平稳，而且蒲黄的许
多黄酮类成分在此波长都有吸收，所以选择254nm
作为指纹图谱的检测波长。
3．3 由不同蒲黄样品HPLC指纹图谱的相对保留
时间、相对峰面积以及相似度结果可以看出，不同蒲
黄药材之间存在较大差异。因此，采用指纹图谱这种
新的质量控制模式来控制药材质量，对于保证临床
疗效的稳定具有重要意义。
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不同产地甘草的聚类分析
王跃飞1，文红梅“，郭立玮1，高永厚2
(1．南京中医药大学，江苏南京210029；2．鄂尔多斯市药品检验所，内蒙古鄂尔多斯017000)
摘要：目的对不同产地甘草G／ycyrrhizauralensis的HPLC指纹图谱进行研究，并对HPLC指纹图谱结果进行
聚类分析，以探讨产地对甘草药材活性成分积累的影响。方法 以甘草药材所古活性成分为分析对象，选择适宜的
HPI。c条件，建立了甘草指纹图谱分析方法，并对该方法进行了考察。以甘草酸、甘草苷、甘草素、异甘草苷，异甘草
素5个活性成分峰面积的标准化结果对17批样品进行了聚类分析。结果方法学考察结果表明，本研究建立的分
析方法有较好的重现性，不同产地甘草中甘草酸和甘草黄酮的量存在较大差别。结论甘草活性成分的积累与产
地有一定的相关性。
关键词：甘草-指纹图谱}聚类分析
中围分类号：R282．7 文献标识鹤：A 文章编号：0253—2670(2006)03一0435一05
HierarchicalclusteranalysisofRadi，Glycyr砌izaefromdifferenthabitats
WANGYue—feil．WENHong—meil。GU0Li—weil，GA0Yong—hou2
(1．NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210029，China；2．EerduosiInstitute
forDrugContr01．Neimenggu017000，China)
Abstract：ObjectiveTostudyHPLCfingerprintsofRadixGlycyrrhizaefromdifferenthabitats，de—
velopthemethodofhierarchicalclusteranalysisbyusingtheresultsoffingerprints，anddi cussregional
effectonaccumulationofactiveingredientsofRadixG0cyrrhizae．MethodsHPI。CFingerprintanalysis
methodofactiveingredientswasdevelopedandthemethodhabeenevaluated．Basedonthetandardized
resultofpeakareaofglycyrrhizin，liquiritin，liquiritigenin，isoliquiritin，andiS01iquiritigen n，seventeen
batchesofRadixG0cyrrhizaewereclassifiedandi entifiedusinghierarchicalclusteranalysis．Results
Themethodologicalevaluationsh wedthatthismethodhadagoodrepeatability．Theamountsofgly
收疆日期{2005—0612
基金项目：国家“十五”科技攻关项目(2001BA701A41—1)
作者简介：王跃飞(1980)，男，浙江金华人，硬士，南京中医茹大学2003级硬士研究生，从事药物分析研究。
Tel：(025)86798397Email：wangyuefei@mail．chinaeom
*通讯作者文红梅
万方数据
蒲黄的HPLC指纹图谱研究
作者： 马红飞， 刘斌， 周军挺， MA Hong-fei， LIU Bin， ZHOU Jun-ting
作者单位： 北京中医药大学中药学院,北京,100102
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 3次

参考文献(6条)
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引证文献(3条)
1.任永申.张萍.杜晓曦.李燕.王晶彬.金城.段惠娟.肖小河 基于HPLC指纹图谱的茵栀黄注射液质量一致性和稳定性
研究[期刊论文]-中草药 2008(6)
2.王誉洁.刘胤敏.吴红兵.陆金根.邱明丰 HPLC法测定复黄片中香蒲新苷[期刊论文]-中草药 2010(11)
3.杨瑛.王实强.蔡光先 蒲黄药材HPLC指纹图谱标准研究[期刊论文]-中华中医药杂志 2008(5)

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