全 文 :·354· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
制剂与质量
复方丹参缓释片钙拮抗作用及体外缓释作用的综合评价
邱明丰1’2,莫尚武3,罗海燕2,杨远友3,刘宁3,贾 伟1,彭 腾2
(1.上海交通大学药学院,上海200030;2.成都中医药大学药学院,四川成都610075;
3.四川大学原子核科学技术研究所,四川成都610041)
摘 要:目的 采用45Ca跨膜内流测量技术确认复方丹参缓释片及其组分对电压依赖性钙通道(potentital
dependentCa”channel,PDC)钙离子内流的拮抗作用,探讨其体外缓释作用的综合评价方法。方法将缓释制剂
释放度测定法与45Ca跨膜内流测量技术相结合,在规定的时间点取复方丹参缓释片体外释放样品测定。取Wistar
大鼠胸主动脉,分成小段依次置于复合电解质溶液(PSS)、“5Ca—PSS+药”混合液、“5Ca—PSS高钾+药”混合液中,
取出动脉环用冷EGTA洗涤,消化。用液体闪烁计数器测量复方丹参缓释片、其组分及体外释放样品的放射性活
度。结果复方丹参缓释片、复方丹参片、丹参脂溶性部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷、丹参酮IA、丹参素、原儿
茶醛、人参皂苷Rbl和三七皂苷R1均有极显著的钙拮抗作用,冰片有显著的钙拮抗作用;复方丹参缓释片4h开
始有显著钙拈抗作用,6h后有极显著钙拮抗作用,而自制复方丹参片1h即有显著钙拮抗作用,2h后有极显著钙
拮抗作用。结论 复方丹参缓释片为钙拮抗剂;丹参脂溶性部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷为钙拮抗有效部位,
丹参酮1“丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Rbl、三七皂苷R1和冰片为钙拮抗有效成分;与自制复方丹参片比较,复
方丹参缓释片具有延缓起效作用,通过体外释放样品钙拮抗作用测定,可以对治疗心血管疾病的中药及天然药物
制剂的体外缓释作用进行综合评价。
关键词:复方丹参缓释片;“Ca跨膜内流测量技术;体外缓释作用;综合评价
中图分类号:R284.2;R286.02文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)03—0354—05
CalciumantagonizingeffectofCompoundDa shenSustained-releaseTab t
andcomprehensivevaluationofsustained—releaseeffectinvitro
QIUMing—fen91“,MOShang—wu3,LUOHal—yan2,YANGYuan—you3,
LIUNin93,JIAWeil,PENGTen92
(1.SchoolofPharmacy,ShanghaiJi oTongUn versity,Shanghai200030,China;2.SchoolofPharmacy,
ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610075,China;3.InstituteofNuclear
ScienceandTechnology,SichuanUn versity,Chengdu610041,China)
Abstract:ObjectiveTos udythecalciumantagonizingeffectofCompoundDanshenSustained—
releaseTablet(CDST)anditsingredientsonpotential—dependentcalciumchannel(PDC),comprehensive
evaluationmethodofsustained—releaseeff ctinvitroby45Cadeterminationof ra smembraneinflux
technique.MethodsSamplefromreleasesolutionofCDSTatdifferenttimepointsweretakena dtested
accordingtostrippinganalysismethodfsustained—releasepreparationand45Cadeterminationof
transmembraneinfluxtechnique.ThesmallaorticringsfromtheheartofWistarratswerepreparedan
equilibratedinthfollowingsolutions:physicalsalineolution(PSS),45Ca-PSS+drug,and45Ca—PSS+
KCl+drugonebyone,thenri sedwithcoldEGTAsolution,andfinallyigested.Theradioactivityof
theabovesampleswameasuredwithliquidscintillationcounter.ResultsThesampleswithextremely
notablecalciumantagonizingeffectincludedCDST,CompoundDanshenTabler(CDT),water—insoluble
andwater—solublefractionsofDanshen,totalsaponinfromSanqi(notoginseng),tanshinoneⅡA,
danshensu,protocatechuicaldehyde,ginsenosideRbl,notoginsenosideR1,andborne01.CDSTshowed
thesignificantcalciumantagonizingeffect4hlaterafterbeingtakena dextremelysignificantn6h,while
theself—preparedCDTshowedthesignificantcalciumantagonizingeffectl h laterandextremely
significantn2h.Conclusion
water——insolubleandwat r——soluble
ItshowsthatCDSThasnotablecalciumantagonizingeffect,whereas
fractionsofDanshenandtotalsaponinfromSanqiareactivefractionsof
收稿日期:2004—10—03
基金项目:国家自然科学基金青年科学基金资助项目(30000223)
作者简介:邱明丰(1970一),男,山东省滕州人,上海交通大学药学院副教授,中药药剂学博士,主要从事中药新剂型和新制剂研究。
Tel:(021)62932146Fax:(021)62932400E—mail:mfqiu@sjtu.edu.cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·355·
calciumantagonizing;tanshinoneⅡA,da sh nsu,protocatechuicaldehyde,ginsenosideRbl,
notoginsenosideR1,andborneolareactiveingredients.Comparedtoself—preparedCDT,theslower
releasedeffectofCDSTiSavailable.Therefore。sucharadiolabeledtechniqueSaf asiblemethodforthe
comprehensivevaluationofcalciumantagonizingeffectaswellasthesustained—releaseeffectinvitroof
Chinesemedicineor aturalmedicineagentstotreatvasculardisorders.
Keywords:CompoundDanshenSustained—releaseTablet(CDST);45Cadeterminationof
transmembraneinfluxtechnique:sustained—releaseeffectinvitro;comprehensiveevaluation
近代医学研究证明,细胞外的Ca2十大量流入心
血管细胞被认为是冠心病发病的重要原因,用钙拮
抗药物阻滞Ca2+内流是西医临床常用的治疗方法。
这类药物称为钙拮抗剂(calciumantagonist,Ca—
A),又名钙通道阻滞剂(Ca2+channelblocker,
CCB),它的发展是近20年来心血管药物研究的一
大突破[1]。自Fleckenstein1969年首次提出以来[2],
30多年的时间中已取得长足进步[3]。20世纪80年
代初,国内陈可冀教授率先提出关于中药钙拮抗剂
(Chinesemedicinecalciumantagonist,CMCA)的
研究方向,目前已经发现140多种中药具有钙拮抗
作用[4巧]。中药复方制剂,特别是新型制剂方面的钙
拮抗作用研究尚未见文献报道。为探讨治疗冠心病
类复方缓释制剂的缓释作用评价方法,本实验以典
型的钙拮抗剂盐酸维拉帕米注射液为阳性对照,采
用45Ca跨膜流动测量技术,以治疗冠心病名优产品
复方丹参片的新型制剂、体外12h延缓释放、适于
长期用药的“复方丹参缓释片”为样本,研究了复方
丹参缓释片、其组分及体外释放样品对电压依赖性
钙通道(potentital—dependentCa2+channel,PDC)
钙离子内流拮抗作用。
1仪器和试药
FJ一210TP液体闪烁计数器(西安二六二厂),
ZRS一8G智能溶出试验仪(天津大学无线电厂),旋
转薄膜蒸发仪(上海玻璃仪器二厂),离心机(北京医
用离心机厂)。放射性同位素45CaCl。(1570MBq/g
Ca,英国Amersham公司产品),其余试剂均为市售
分析纯。
盐酸维拉帕米注射液(江苏省连云港制药厂,批
号为991115,2mL:5mg×10支)。丹参酮ⅡA、隐
丹参酮、丹参酮I、原儿茶醛、原儿茶酸、人参皂苷
Rbl、人参皂苷Rgl、三七皂苷R1均购自中国药品
生物制品检定所,供含量测定用。丹参素购自上海医
科大学药物化学室,经HPLC测定纯度在98%以
上。Wistar大鼠,体重(200±20)g,雌雄各半,华西
医科大学实验动物中心提供。
丹参为唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根及根茎,购自四川省新世界丹参生
产基地。三七为五加科植物三七Panaxnotoginsen
(Burk)F.H.Chen的干燥根,购自成都同仁堂。冰
片为合成冰片,又称“合成龙脑”,购自成都同仁堂。
均经成都中医药大学药学院严铸云副教授鉴定。
市售复方丹参片由广州白云山中药厂生产,批
号为010308。复方丹参缓释片和自制复方丹参片由
成都中医药大学中药炮制与药剂教研室提供。
复方丹参缓释片:取丹参,乙醇回流两次(10
倍、8倍 ,每次1.5h,滤过,减压回收乙醇,浓缩至
相对密度为1.15(50~60℃),喷雾干燥,得脂溶性
部位;丹参醇回流后的药渣,水煎煮3次,每次10倍
水、1.5h,浓缩至相对密度为1.15(50~60℃)时,
醇沉,滤过,减压回收乙醇,稀释至规定浓度上大孔
吸附树脂柱,水洗除杂,醇洗,收集醇液,减压回收乙
醇,真空干燥,得水溶性部位。取三七,粉碎成最粗
粉,乙醇回流两次,每次加醇8倍量、回流1.5h,滤
过,减压回收乙醇,浓缩后稀释至规定浓度上D一101
皂苷吸附树脂柱,水洗除杂,醇洗,减压回收乙醇近
干,真空干燥,即得三七总皂苷。将冰片粉碎成细粉,
过筛,备用。依次称取羟丙基甲基纤维素、三七总皂
苷粉、丹参脂溶性部位和丹参水溶性部位,等量递加
法混匀,乙醇润湿制粒,50℃以下烘干,过16目筛
整粒,再过50目筛,筛出细粉与冰片、硬脂酸镁、微
粉硅胶混匀,然后与颗粒全部混匀,压片。每片0.5
g,含丹参酮ⅡA5.67mg、丹参素13.82mg、原儿茶
醛2.61mg、三七总皂苷48.24mg、龙脑33.21mg。
自制复方丹参片:除将可溶性淀粉代替羟丙基
甲基纤维素外,均按复方丹参缓释片工艺制备。
复合电解质溶液(PSS溶液):NaCl137mmol/
L、CaCl2 1.5mmol/I—MgCl21.0mmol/L.KCl3.0
mmol/L、HEPES20mmol/L、葡萄糖10mmol/L;
高钾PSS溶液:KCl100mmol/L、NaCl400mmol/
L,其余同PSS溶液;无CaZ+_EGTA[钙螯合剂,乙
二醇双(a一氨基乙酸)醚四乙酸]洗涤液:EGTA10
mmol/L,其余成分同PSS溶液(无CaCl:)。以上溶
液用重蒸水配制,pH7.4。甲苯闪烁液:PPO5.0g,
万方数据
·356· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
乙二醇乙醚300mL,加甲苯定容至1000mL。
2实验方法
2.1样品溶液的制备
2.1.1制剂供试液:取复方丹参缓释片、自制复方
丹参片和市售复方丹参片分别研细,前两者取1片,
后者取相当剂量的4.5片,精密称重,分别加200
mL重蒸水超声振荡20min,滤过,备用。
2.1.2化学成分与提取部位供试液:取丹参脂溶性
部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷、丹参酮ⅡA、丹
参素、原儿茶醛、冰片等,加重蒸水超声振荡20min
配制成与制剂供试液中成分质量浓度相当的溶液,
质量浓度分别为0.72、0.73、0.24、0.03、0.07、
0.01、0.36mg/mL,备用。另取人参皂苷Rbl、三七
皂苷R1、隐丹参酮、丹参酮I、原儿茶酸、人参皂苷
Rgl等,精密称重,加入重蒸水超声振荡20min,配
制成质量浓度均为0.01mg/mL的溶液,备用。
2.1.3空白对照溶液:以重蒸水为空白对照溶液。
2.1.4 阳性对照溶液:以盐酸维拉帕米注射液为阳
性对照溶液。
2.1.5体外释放供试液:复方丹参缓释片的凝胶骨
架材料易吸水膨胀并产生较大的黏性,易粘于溶出
杯底,故采用转篮法进行测定。取复方丹参缓释片及
自制复方丹参片各1片,采用体外释放度测定方法
测定,转速为(100±1)r/min,温度为(37±0.5)
℃,释放介质为蒸馏水1000mL。在上述条件下,于
不同时间点取液5mL(取液后立即补加同温度5
mL相同介质),微孔滤膜滤过,备用。
2.1.6100%释放样品供试液:取复方丹参缓释片
和自制复方丹参片,研细,取平均片重细粉,置于
1000mL量瓶中,加重蒸水至刻度,超声20min,滤
过,备用。
2.2 45Ca跨膜内流的测定:按文献方法[6~8]。击晕
Wistar大鼠,取出胸主动脉,并置于PSS溶液中,轻
轻去除血管外结缔组织,切成长2~3mm的动脉环
(约5mg),将动脉环置于PSS液中37℃下保温1
h,顺次移入“45Ca—PSS+药”混合液中平衡10min,
“45Ca—PSS高钾+药”混合液处理10min。以上步骤
都是在37℃和通O。条件下进行。再将动脉环取出,
置于o~2℃无钙的EGTA溶液中洗涤1h,然后用
滤纸吸干动脉环,称质量,放人测量瓶中,加入70%
HCl0。25肛L、30%H。O。50ttL,于80℃水浴中消化
20min,冷却后加入甲苯闪烁液4mL,黑暗中放置3
h,用FJ一210TP液体闪烁计数器测量放射性活度
(cpm),随行空白对照、阳性对照,分别加入20弘L。
按下式计算,即为对PDC钙通道钙离子内流的拮抗
作用。每个样品测定时用6个动脉环,加入100L,
平行测定,数据用z±s表示,用t检验检查显著性。
c矿内流虱pm/mg)一塑蒹螽铲
3 实验结果
3.1 复方丹参缓释片及其组分钙拮抗作用实验结
果:见表1。复方丹参缓释片、自制复方丹参片、丹参
脂溶性部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷、丹参酮
ⅡA、丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Rbl、三七皂苷R1
均有极显著的钙拮抗作用,市售复方丹参片、冰片有
显著的钙拮抗作用;隐丹参酮、丹参酮I、原儿茶酸、
人参皂苷Rgl在此质量浓度下无钙拮抗作用。
表1复方丹参缓释片及其组分对大鼠主动脉PDC
钙通道ca”跨膜内流的影响“一6)
Table1 InfluenceofCDSTanditsfractionsonCaz+trans.
membraneinfluxofPDCinrataorta锄一6)
与空白对照组比较:’尸
3.2体外释放样品测定结果:见表2。复方丹参缓
释片在1~12h内钙拮抗作用呈增强趋势,从4h
起开始有显著钙拮抗作用,6h后有极显著钙拮抗
作用,18、24h有显著性钙拮抗作用,但比4~15h
作用弱;自制复方丹参片1h起开始有显著钙拮抗
作用,2h后有极显著钙拮抗作用,18、24h有显著
性钙拮抗作用,但比4~15h作用弱。与自制复方丹
参片比,复方丹参缓释片起效缓慢,证明有延缓起效
的作用。
4讨论
据报道,血管平滑肌上至少存在3种钙通道:
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·357·
表2 复方丹参缓释片体外释放样品对大鼠主动脉
PDC钙通道Ca2+跨膜内流的影响(辟=6)
Table2 Influenceof/nvitroeleasesolutionofCDST
onCa2+transmembraneinfluxofPDCinrat
aorta(n一6)
药组名称
质量浓度
/(mg·mL一1)
Ca“PDC内流量
/(cpm·mg一1)
空白对照0
阳性对照0.25
复方丹参缓释片(1h)
(2h)
(4h)
(6h)
(8h)
(10h)
(12h)
(15h)
(18h)
(24h)
i00%样品释放供试液
自制复方丹参片(Ih)
(2h)
(4h)
(6h)
(8h)
(10h)
(12h)
(15h)
(18h)
(24h)
100%样品释放供试液
290,7±54.16
219.0±51.74’。
263.2土10.91
243.8土22.76
230.4士18.24。
214.5±14.02。‘
210.6±14.93+’
202.4±29.93’’
201.5±19.73。’
218.2士28.24。’
225.3±25.45’
231.8±23.63‘
200.8士14.97’。
227.5士13.80”
207.2±16.67。。
208.1土13.9l。’
210.6士25.31。+
211.8土28.72++
213.6±29.68。。
215.4±27.83’。
219.7±17.25。。
225.8土24.34。
229.6土31.55。
206.7士31.90。’
与空白对照组比较:’P
息状态下的Ca2.内流;(2)电压依赖性钙通道
(potentital—depedentCa抖channel,PDC),为细胞
去极化兴奋时的Ca抖内流;(3)受体操纵性钙通道
(receptor—operatedchann l,ROC),去甲肾上腺素
等与膜受体结合后使其活化,除引起细胞外Ca2+内
流,还促进细胞内储存的Ca抖释放到胞浆内[1]。实
验证明,当高钾引起平滑肌细胞去极化,导致PDC
开放时,Ca2+内流量较LC和ROC通道转移都强,
也较为稳定[9J“。因此,本实验中采用PDCCa2+内
流测定方法测定药物的钙拮抗作用。实验结果表明,
经过改进工艺、剂型优化的复方丹参缓释片与自制
复方丹参片、市售复方丹参片都能有效地阻滞
PDC,减少Ca2+内流,均为中药钙拮抗剂;丹参脂溶
性部位、丹参水溶性部位、三七总皂苷为钙拮抗有效
部位,丹参酮ⅡA、丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Rbl、
三七皂苷R1和冰片为钙拮抗有效成分。本实验首
次将45Ca跨膜内流测量技术应用于中药复方缓释制
剂的研究,并确认复方丹参缓释片为钙拮抗剂,为将
此技术用于其缓释作用的综合评价提供了依据。
本实验以复方丹参片为样本,针对中药复方物
质基础较为复杂、具有多成分、多靶点、多层次作用
的特点,以及中药复方缓释剂型研究发展的难点问
题——如何对中药复方缓释剂型进行评价,运用多
学科交叉的手段,将现代中药缓释制剂技术与核技
术、生物技术与药理相结合,在复方丹参缓释片研制
的基础上,引入45Ca跨膜内流测量技术,针对钙离子
内流过多的冠心病发病机制,采用对大鼠主动脉
PDC的拮抗作用,探讨并综合评价复方丹参缓释片
体外缓释作用,结果表明与自制复方丹参片比具良
好的缓释作用。在体内缓释作用情况如何、体内含药
血清钙拮抗作用持续时间有多长,将另文阐述。
本实验采用了45Ca跨膜内流测量新技术进行了
中药复方缓释制剂及体外缓释作用的综合评价,以
期为治疗冠心病类中药复方缓释新剂型的评价探索
出一种新方法,改变测定单一成分或某一有效部位
不能综合评价、用药效实验评价费时费钱且操作烦
琐的局面,并可广泛拓展应用到使用钙拮抗剂治疗
的心律失常、脑血管痉挛、支气管哮喘、食道痉挛、肾
绞痛、脑梗死、癫痫等相关疾病中,具有临床价值。
45Ca跨膜内流测量技术是核技术、生物技术多
学科结合的新技术,基本原理为同位素示踪法,这种
示踪技术的目标是生物细胞膜上的PDC。通过阳性
对照和空白对照组组间t检验来验证测试方法及操
作的可行性;通过药物组和空白对照组组间t检验
检查钙拮抗作用的有无和强弱,具显著性和极显著
性的样品为有钙拮抗作用,具极显著性的样品钙拮
抗作用强于具显著性的样品。复方丹参缓释片与自
制复方丹参片在15h后钙拮抗作用降低,也低于相
应制剂100%释放样品的钙拮抗作用,可能原因是
有效成分在人工胃液中发生变化、冰片挥发减少,或
者多次取样使有效成分浓度有所降低所致。市售复
方丹参片比复方丹参缓释片、自制复方丹参片活性
低,可能与所用制剂原料、制备工艺条件有关。后两
者为相同的中药材原料制成,并对丹参、三七有效部
位进行了分离精制,所以活性基本相近;而市售复方
丹参片是按《中华人民共和国药典>>2000年版制备
工艺要求制备的,与后两者所用中药材原料不同,其
中丹参未分离有效部位,三七采用的是药粉。
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RP—HPLC法测定灌胃赤芍胡椒复方小鼠血浆中芍药苷的含量
裴 瑾1’2,杨祖贻H,刘荣敏1,程佳1,万德光2,胡 荣2
(1.四川省肿瘤研究所,四川成都610041;2.成都中医药大学药学院,四川成都610075)
摘 要:目的 建立小鼠口服赤芍胡椒复方后血浆中芍药苷浓度的RP—HPLC定量分析方法。方法以甲醇一水
(38:62)为流动相。色谱柱为KromasilC18(250mm×4.6mm,7肛m),体积流量为0.5mL/min,以二极管阵列检测
器获取230am波长下数据,采用外标定量法。结果芍药苷与血浆中其他成分能很好分离,芍药苷在5.o~250.0
ng/pL线性关系良好(r一0.9999),最低检测质量浓度为1.49ng/肛L,平均回收率大于90%。结论本方法准确
性、灵敏度、专一性高,可为芍药苷的体内血浆药物浓度分析提供有意义的方法学参考。
关键词:赤芍胡椒复方;芍药苷;高效液相色谱;血药浓度
中图分类号:R286.02 文献标识码:B 文章编号:0253—2670(2005)03—0358—03
Determinationofpae iflorininmouseplasmaafterigcompounddecoction
ofRadixPaeoniaeRubrawithFructusPiperisbyRP—HPLC
PEIJinl”,YANGZu—yil,LIURong—minl,CHENGJial,WANDe—guan92,HURon92
(1.SichuanCancerInstitute,Chengdu610041,China;2.CollegeofPharmacy,ChengduUniversity
ofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610075,China)
Abstract:ObjectiveAnHPLCm thodwasestablishedford terminationofpae iflorininplasma
afterigcompounddecoctionofRadixPaeoniaeRubrawithFructus尸iperistomice.MethodsThe
conditionsofchromatography:KromasilC18column(250mm×4.6mm,7pm)wasusedwithamobile
phaseofCH30H—H20(38:62);flowratewas0.5mL/min;thedet ctingwavelengthwas230nm;
exterHalstandardmethodwasquantitativenalysismethod.ResultsPaeoniflorinwasfullyseparated
ftomtheothercomponentsinplasma.The1inearrangewas5.O一250.0ng/弘L(r一0.9999),thelowest
detectabilitywas1.49ng/弘L,theaveragerecoverywashigherthan90%.ConclusionThismethod
speciallyprovidesanaccuratendsensitivewayindetectingheinvivobloodconcentrationofpae iflorin
inplasma.
Keywords:compounddecoctionofRaidxPaeoniaeRubrawithFructusPiperis;paeoniflorin;HPLC;
bloodconcentration
收稿日期:2004—06-06
基金项目:国家中医药管理局科研基金资助项目(02—03ZP50);四川省中医药管理局科研基金资助项目(200217)
作者简介:裴瑾(1970~),女,四川成都人,博士,讲师,主要从事中药质量研究工作。Tel:(028)81607731
*通讯作者Tel:(028)85420916E—mail:chianghm@163.com
万方数据
复方丹参缓释片钙拮抗作用及体外缓释作用的综合评价
作者: 邱明丰, 莫尚武, 罗海燕, 杨远友, 刘宁, 贾伟, 彭腾, QIU Ming-Feng, MO
Shang-wu, LUO Hai-yan, YANG Yuan-you, LIU Ning, JIA Wei, PENG Teng
作者单位: 邱明丰,QIU Ming-Feng(上海交通大学药学院,上海,200030;成都中医药大学药学院,四川,成
都,610075), 莫尚武,杨远友,刘宁,MO Shang-wu,YANG Yuan-you,LIU Ning(四川大学原子
核科学技术研究所,四川,成都,610041), 罗海燕,彭腾,LUO Hai-yan,PENG Teng(成都中医
药大学药学院,四川,成都,610075), 贾伟,JIA Wei(上海交通大学药学院,上海,200030)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(3)
被引用次数: 12次
参考文献(10条)
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本文读者也读过(10条)
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引证文献(12条)
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