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以血清药理学方法研究复方丹参缓释片的缓释作用
邱明丰1, 2, 彭　腾2, 罗海燕4, 杨远友3, 谢秀琼2, 贾　伟1Ξ
(11 上海交通大学药学院, 上海　200240; 21 成都中医药大学药学院, 四川 成都　610075; 31 四川大学原子核
科学技术研究所, 四川 成都　610041; 41 海南医学院 药学系, 海南 海口　571101)
摘　要: 目的　以含药血清钙拮抗作用为指标, 研究复方丹参缓释片缓释作用。方法　以自制复方丹参片作对照,
心肌缺血模型犬口服复方丹参缓释片后, 在规定时间点取血清样品, 用45Ca 跨膜内流测量技术测定含药血清钙拮
抗作用, 考察含药血清的时间2钙拮抗作用规律。结果　复方丹参缓释片含药血清样品在 2～ 10 h 均有显著或极显
著的钙拮抗作用, 自制复方丹参片含药血清在 1～ 4 h 有显著或极显著钙拮抗作用。结论　复方丹参缓释片与自制
复方丹参片相比, 可延长钙拮抗作用持续的时间, 具有缓释作用, 含药血清钙拮抗作用测定方法可作为其缓释作用
评价的方法之一。
关键词: 复方丹参缓释片; 血清药理学; 45Ca 跨膜内流测量技术; 缓释作用
中图分类号: R 286164　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 03- 0411- 03
　　复方丹参属研制方[1 ] , 其成药复方丹参片和复
方丹参缓释片 (Compound D an shen Su sta ined2
release T ab let, CD ST ) 均为钙拮抗剂, 体外释放样
品钙拮抗作用研究表明, 复方丹参缓释片具有延缓
起效的作用[2 ]。本研究用血清药理学方法, 以含药血
清的钙拮抗作用为指标, 观察犬给予复方丹参缓释
片后, 不同时间含药血清钙拮抗作用的经时变化, 并
与自制复方丹参片进行比较, 旨在探讨复方丹参缓
释片体内缓释作用评价的方法。
1　材料
111　动物:W istar 大鼠, 体重 (200±20) g, 雌雄各
半, 四川大学华西医学院实验动物中心提供。6～ 8
月龄 Begle 犬 (合格证号医动字 2416013123) , 雄
性, (12±2) kg, 四川省医学科学院动物研究所犬养
殖场提供。
112　仪器与试剂: FJ—210T P 液体闪烁计数器 (西
安二六二厂) , 十六道生理记录仪 (美国 B IO PA C
公司)、ECG—6511 心电图机 (上海光电医用电子
仪器有限公司) , 动物呼吸机 (浙江大学医学仪器
厂) , 离心机 (北京医用离心机厂)。放射性同位素
45CaC l2 (1 570 M Bqög, 英国 Am ersham 公司) , 其
余试剂均为市售分析纯。
113　药品: 维拉帕米 (V erapam il, 江苏省连云港制
药厂, 批号为 991115, 2 mL ∶5 m g)。复方丹参缓释
片和自制复方丹参片, 成都中医药大学中药炮制与
药剂教研室自制, 每片 015 g, 含丹参酮Ê A 5167
m g、丹参素 13182 m g、原儿茶醛 2161 m g、三七总
皂苷 4812 m g、冰片 33121 m g [2 ]。
114　实验用溶液: 复合电解质溶液 (PSS 溶液) :
N aC l 137 mmo löL、CaC l2 1. 5 mmo löL、M gC l2 1. 0
mmo löL、KC l 3. 0 mmo löL、H EPES 20 mmo löL、葡
萄 糖 10 mmo löL ; 高 钾 PSS 溶 液: KC l 100
mmo löL、N aC l 400 mmo löL , 其余同 PSS 溶液; 无
Ca2+ 2EGTA [钙螯合剂, 乙二醇双 (Α2氨基乙酸) 醚
四乙酸 ]洗涤液: EGTA 10 mmo löL , 其余成分同
PSS 溶液 (无 CaC l2)。以上溶液用重蒸水配制, pH
为 714。甲苯闪烁液: PP0 510 g, 乙二醇乙醚 300
mL , 加甲苯定容至 1 000 mL。
2　方法
211　溶液制备: 以重蒸水为空白对照溶液, 盐酸维
·114·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 3 期 2008 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2006206208
基金项目: 国家自然科学基金青年科学基金资助项目 (30000223)
作者简介: 邱明丰 (1970—) , 男, 山东省滕州人, 副教授, 博士, 硕士生导师, 主要从事中药新剂型和新制剂研究。
E2m ail: m fqiu@ sjtu. edu. cn3 通讯作者　贾　伟　T el: (021) 62932292　E2m ail: w eijia@ sjtu. edu. cn
拉帕米注射液为阳性对照溶液。
212　心肌缺血模型犬含药血清制备 (冠状动脉结
扎法) [3 ]: 取6～ 8 月龄Begle 犬 10 只, 称重。受试前
禁食不禁水 24 h, 实验前用 3% 戊巴比妥 (45 m gö
kg) 后腿隐静脉麻醉, 仰位固定于手术台上, 用十六
道生理记录仪、ECG—6511 心电图机记录其正常心
电图。颈部皮下作一切口, 分离气管并插入V 形气管
插管, 隐动脉插管取空白血 4～ 5 mL , 同时检测血
压; 腹白线做 3 cm 左右切口, 游离十二指肠, 做一
小切口, 放入 20 倍于人用剂量的药片, 5 只给予复
方丹参缓释片 (018 片ökg) , 5 只给予自制复方丹参
片 (018 片ökg)。30 m in 后接动物呼吸机, 频率 40
次öm in。左锁骨中线第4～ 5 肋间开胸, 开胸器撑开
暴露心脏, 以止血钳轻提起心包膜, 小心剪开, 做心
包摇篮。于左冠状动脉前降支中下部位结扎。然后
缝合关闭胸腔, 记录结扎后的心电图, 比较J 点、T
波的变化, 以T 波的高耸、倒置或低平, J 点的压低
或抬高作为造模成功的标志。于结扎0、1、2、3、4、6、
8、10、14、15、24 h 取血 4～ 5 mL。将血静置 30 m in,
用薄竹签与试管壁剥离, 3 000 röm in 离心 15 m in,
移液枪移入 1 mL 弹头试管, 于水浴 56 ℃ 灭活 15
m in, 冰箱 - 20 ℃ 放置。
213　血清样品的处理: 取出冰箱放置的各时间点的
血清样品, 加入 2 倍量甲醇溶液, 10 000 röm in 离心
20 m in, 取上清液, 吹干, 50% 乙醇定容至 015 mL ,
备用。
214　45Ca 跨膜内流测量: 按文献方法[2, 4～ 6 ] , 击晕
W istar 大鼠, 取出胸主动脉, 并置于 PSS 溶液中轻
轻去除血管外结缔组织, 切成长 2～ 3 mm 的动脉环
(约 5 m g) , 将动脉环置于 PSS 液中 37 ℃ 下保温
1 h, 顺次移入 45Ca2PSS+ 含药血清混合液中平衡
10 m in, 45Ca2PSS 高钾+ 含药血清混合液处理 10
m in, 以上步骤都是在 37 ℃ 和通O 2条件下进行。取
出动脉环, 置于 0～ 2 ℃ 无钙的 EGTA 溶液中洗涤
1 h, 用滤纸吸干动脉环, 称质量, 放入测量瓶中, 加
入 70% HC lO 4 25 ΛL、30% H 2O 2 50 ΛL , 于 80 ℃ 水
浴中消化 20 m in, 冷却后加入甲苯闪烁液 4 mL , 黑
暗中放置 3 h, 用 FJ—210T P 液体闪烁计数器测量
放射性活度 (CPM ) , 随行空白对照、阳性对照, 分别
加入 20 ΛL 药液。按下式计算, 即为对电位依赖性
钙通道 (po ten t ia l dependen t Ca2+ channels, PDC)
钙离子内流的拮抗作用。
Ca2+ 内流量 (cpm öm g) = [各组 cpm 值- 本底 (22) ]ö动
脉环湿质量
215　数据处理: 每只犬每个时间点样品测定时均用
6 个动脉环, 加入 100 ΛL , 平行测定后处理5 只犬数
据 (n= 30) , 用 x ±s 表示, 并用 t 检验检查显著性。
3　结果
　　复方丹参缓释片与自制复方丹参片含药血清对
大鼠主动脉 PDC 钙通道Ca2+ 内流的影响: 见表1。由
表 1 可见, 复方丹参缓释片含药血清 2～ 10 h 与空
白血清组比较, 均有显著或极显著的钙拮抗作用, 自
制复方丹参片含药血清在 1～ 4 h 与空白血清组比
较, 均有显著或极显著的钙拮抗作用。
表 1　复方丹参缓释片及自制复方丹参片含药血清对大鼠主动脉 PDC 钙通道 Ca2+ 内流的影响 (x±s, n= 30)
Table 1　Effect of serum con ta in ing drug of CD ST and self -prepared Compound Dan shen Tablet
on Ca2+ tran smembrane inf lux of PDC in rat aorta (x±s, n= 30)
组别
Ca2+ PDC 内流量ö(cpm·m g- 1)
0 h 1 h 2 h 3 h 4 h 6 h 8 h 10 h 12 h 15 h 24 h
空白对照 290170±54116
维拉帕米 219100±511743 3
复方丹参缓释片 269152±12162 257142±13185 250178±161503 247182±131693 3251174±151603 246160±141843 3245106±161713 3241161±151043 3 252131±15178 255183±16135 257131±14176
自制复方丹参片 262162±15152 240180±161843 3245120±151673 244151±141853 243186±151633 253177±16135 251155±17110 252122±16129 252194±17135 259109±13114 265138±14106
　　与空白对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs b lank con tro l group
4　讨论
　　本研究针对中药复方有效成分的复杂性、微量
性、难测性、疗效综合评价极为困难这一关键难题,
针对钙离子内流过多的冠心病发病机制, 运用多学
科交叉的手段, 科学地引入 45Ca 跨膜内流测量技术
和血清药理学方法, 测定复方丹参缓释片与自制复
方丹参片体内不同时间点含药血清对大鼠主动脉
PDC 钙通道的拮抗作用, 探讨并综合评价复方丹参
缓释片体内缓释作用, 结果表明复方丹参缓释片的
含药血清钙拮抗作用比自制复方丹参片时间延长
6 h, 具有良好的缓释作用。
本实验综合采用45Ca 跨膜内流测量技术和血清
药理学进行中药复方缓释制剂体内缓释作用的综合
评价, 以期为中药缓释新剂型的综合评价探索出一
·214· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 3 期 2008 年 3 月
种新方法, 改变测定单一成分或某一有效部位不能
综合评价的局面, 并可广泛拓展应用到使用中药钙
拮抗剂治疗的心律失常、脑血管痉挛、支气管哮喘、
食道痉挛、肾绞痛、脑梗死、癫痫等相关疾病中, 具有
临床价值。
参考文献:
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莲子心提取物抗心律失常作用及其急性毒性研究
王瑞芳1, 欧来良2Ξ
(11 集美大学 生物工程学院, 福建 厦门　361021; 21 南开大学 生物活性材料教育部重点实验室, 天津　300071)
摘　要: 目的　研究莲子心提取物的抗心律失常药效作用及其急性毒性。方法　采用氯仿、乌头碱诱发心律失常动
物模型, 分别观察了5 个莲子心提取物样品的抗心律失常作用及急毒情况。结果　树脂吸附法制备的提取物的抗心
律失常效果优于3 种单体及溶剂萃取法制备的提取物, 而且毒性也最低。结论　莲子心树脂吸附法提取物药效好、
毒性小, 具有一定的开发前景。
关键词: 莲子心; 乌头碱; 抗心律失常; 急性毒性
中图分类号: R 286122　R 285153　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 03- 0413- 03
　　莲子心为睡莲科莲属植物莲N elum bo nucif era
Gaertn. 种子的绿色幼叶及胚根, 在我国有悠久的
药用历史, 资源丰富。莲子心中含多种组分, 其中主
要有莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱, 它们结构相似,
均有降血压和抗心律失常等作用[1, 2 ]。它们各自的药
理作用文献报道很多[2～ 4 ] , 但这3 种主要成分组成的
总碱的药效未见文献报道。按照中医的传统理论, 纯
度较高的单体的药效不见得比含该单体的有效部位
的药效高。为此本课题组采用树脂吸附法制备了含
莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的总碱, 研究了总碱
抗心律失常效果和急性毒性, 并与各单体及溶剂法
制备的总碱进行对比。
1　材料与方法
111　仪器: ECG—6511 心电图仪 (上海光电医用
电子仪器有限公司) ;W Z—50C2 单道微量注射泵
(浙江大学医学仪器有限公司)。
112　试药: 1# 样品: 莲心碱 (质量分数 9919% ) ;
2# 样品: 异碱心碱 (质量分数9815% ) ; 3# 样品: 甲 基莲心碱 (质量分数9919% ) ; 4# 样品: 溶剂萃取法制备的总碱, 淡黄色粉末 (含莲心碱 49180%、异莲心碱 1016%、甲基莲心碱 2715% ) ; 5# 样品: 树脂吸附法制备的总碱, 棕色粉末 (含莲心碱 3311%、异莲心碱 1510%、甲基莲心碱 3415% ) ; 以上5 种样品均为自制, 均常温干燥保存, 以 pH 值约为 6 的蒸馏水溶解。乌头碱 (生化试剂, 中国药品生物制品鉴定所产品) ; 盐酸利多卡因注射液 (天津金耀氨基酸有限公司产品) ; 氯仿 (分析纯, 天津天河化学试剂厂出品)。113　动物:W istar 大鼠, 雌雄兼用, 体重 180～ 220g; 昆明种小鼠, 雌雄各半, 体重 27～ 32 g, 均由天津药物研究院提供。114　实验方法11411　对氯仿诱发小鼠室颤模型的影响: 取体重27～ 32 g 小鼠, 雌雄各半, 按体重随机分成 7 组, 每组10 只, 分别给予1# 、2# 、3# 、4# 、5# 样品、盐酸利多卡因及生理盐水 (模型)。各组均按 10 m gökg
·314·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 3 期 2008 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2007208227
作者简介: 王瑞芳 (1976—) , 女, 江苏沛县人, 副研究员, 博士, 研究方向为功能高分子材料的应用。
E2m ail: w angrf@ jm u. edu. cn3 通讯作者　欧来良　T el: (022) 23502155　E2m ail: ouyll@nankai. edu. cn