全 文 ：·60· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
HPLC—ELSD法测定胡芦巴提取物中4一羟基异亮氨酸
惠玉虎，杨朝昆，寇玉锋，任静
(西安皓天生物工程技术有限责任公司，陕西西安 710075)
胡芦巴Trigonellafoe删m—graecumL．，又名香
豆子、香苜蓿、芦巴子，为豆科蝶形花亚科胡芦巴属
一年生草本植物。胡芦巴种子中主要含有半乳甘露
聚糖等多糖物质、蛋白质、芹菜香脂等。此外，还含胡
芦巴碱、游离氨基酸、甾体皂苷、香豆素和黄酮类物
质。4一羟基异亮氨酸是胡芦巴中存在的一种非蛋白
质氨基酸，在调节血糖，促进肌肉形成方面有独到的
功效E1|。胡芦巴中4一羟基异亮氨酸的测定方法文献
报道有HPLC—ELSD法[2]。本实验的目的是对胡芦
巴中4一羟基异亮氨酸的测定方法进行改进，改进后
的检测方法不仅简便、快速、准确性、重现性好，而且
更加稳定。
1仪器与试药
Watersl525高效液相色谱仪、Empower色谱
工作站(美国Waters公司)；AlltechELSD2000ES
蒸发光散射检测器(美国Alheeh公司)。4一羟基异亮
氨酸对照品(美国ChromeDex公司，质量分数为
99％)。胡芦巴提取物为西安皓天生物工程技术有限
责任公司生产。三氟乙酸为分析纯，水为二次重蒸水。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱：IntersilODS一3(150mm×
4．6mm，5lLtm)；流动相：0．1％三氟乙酸水溶液；柱
温：室温；体积流量：1mL／min；进样量：5弘L。ELSD
检测器条件：漂移管温度：115℃；载气体积流量：
3．0L／min。在此条件下，4一羟基异亮氨酸保留时间
约7．5rain，4一羟基异亮氨酸与其他组分达到基线分
离，分离度>1．5。理论塔板数按4一羟基异亮氨酸计
大于3500(图1)。
2．2 对照品溶液制备：精密称取4一羟基异亮氨酸对
照品适量，加水超声溶解，制成含4一羟基异亮氨酸
0．141mg／mL的对照品溶液，作为对照品储备液。
2．3供试品溶液制备：精密称取胡芦巴提取物约
10mg，置50mL量瓶中，加入约40mL水超声30
rain，放置至室温，加水至刻度，即得。
2．4线性关系考察：精密吸取0．141mg／mL4一羟
基异亮氨酸对照品储备液2．0、3．0、5．0、6．0mL于
收稿日期：2006—07—12
0 2 4 6 S 10 0 2 4 6 8 10
t|rain
*一4一羟基异亮氨酸
*一4-hydroxyisoleucine
图1 4-羟基异亮氨酸对照品溶液(A)和葫芦巴提
取物供试品溶液(B)的HPLC—ELSD色谱图
Fig．1HPLC—ELSDChromatogramsf4-hydroxy—
isoleucineref rencesubstance(A)andT．
foenum-graecumextract(B)
10mL量瓶中，加水至刻度，配制成质量浓度分别为
0．028、0．056、0．071、0．085mg／mL的对照品溶液，
在上述色谱条件下与4一羟基异亮氨酸对照品储备
液分别进样5vtL，进行HPLC—ELSD分析。以峰面
积的常用对数为纵坐标，以质量浓度常用对数为横
坐标绘制标准曲线。其回归方程为lgy=1．6461l
X+6．7676，r=0．9990。由此可知，4一羟基异亮氨
酸在0．028～0．141mg／mL线性关系良好。
2．5精密度试验：精密吸取同一份供试品溶液，在
上述色谱条件下重复进样5次，测定4一羟基异亮氨
酸峰面积，计算得其RSD为1．14％。
2．6稳定性试验：将同一份供试品溶液分别在0、2⋯46 8、10h内进样测定4一羟基异亮氨酸峰面积，
计算得其RSD为1．52％。结果表明，供试品溶液在
10h内基本稳定。
2．7重现性试验：取同一批胡芦巴提取物样品，按
供试品溶液的制备方法分别制备5份，依法进样测
定。结果4一羟基异亮氨酸的平均质量分数为414．7
mg／g，RSD为0．81％。
2．8加样回收率试验：精密称取批号为20051025
的含4一羟基异亮氨酸为226mg／g的葫芦巴提取物
5份，每份0．1g，分别精密加入0．141mg／mL4一羟
基异亮氨酸对照品储备液2mL，制备供试品溶液，
在上述色谱条件下进样测定。结果平均回收率为
。
万方数据
中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·61·
98．75％，RSD为1．81％。
2．9样品测定：分别精密称取5批样品，各3份，依
法测定4一羟基异亮氨酸的峰面积，代入标准曲线计
算其质量浓度，计算胡芦巴提取物中4一羟基异亮氨
酸的质量分数，结果见表1。
表1胡芦巴提取物中4一羟基异亮氨酸的
测定结果(开一3)
Table1 Determinationof4一hydrOxyisoleucine
inT．foenum—graecumextract(一一3)
3讨论
由于4一羟基异亮氨酸在紫外条件下没有特征
吸收，故选用HPLC—ESLD法测定。在ESLD检测
条件的选择上，由于在流动相配比中水相的比例较
高，所以设定漂移管的温度为115℃，在该温度条件
下流动相能充分汽化，出峰效果好。由于三氟乙酸比
其他酸更易挥发，在检测过程基线噪音影响较小，而
且样品分离效果也很好。
在流动相的选择上，开始选用0。1％冰醋酸水
溶液一乙腈(90：10)作为流动相[1]，但在试验中发现
在该流动相下，检测器基线噪音较大，保留时间也不
重复，影响4一羟基异亮氨酸的检测。经多次试验选
择0．1％三氟乙酸水溶液作为流动相，不仅峰形对
称，保留时间重复稳定，而且4一羟基异亮氨酸与杂
质的分离度效果好。
该方法准确性、稳定性及重现性能够符合测定
要求，可作为胡芦巴提取物中4一羟基异亮氨酸的测
定方法。
References：
Eli JiangsuNewMedicalCo lege．DictionaryofChineseMateria
Madica(中药大辞典)EM]．Shanghai：ShanghaiPeople‘S
PublishingHouse，2004．
[2]FangJ，LiuZY，XiongZT．Determinationof4-hydroxy—
isoleucineo tentsinTrigonellafoenungraecumbyHPLC—
ELSD口]．WestChinaJPharmSci(ep西药学杂志)，2004，
】9(5)：355—356．
川芎提取物中阿魏酸大鼠在体肠吸收动力学的研究
杨星钢1，李 丁1，郭 宏1’2，张国华3，张立波1，潘卫三”
(1．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016；2．佳木斯大学化学与药学院，黑龙江佳木斯154007
3．沈阳药科大学成人教育学院，辽宁沈阳 110016)
阿魏酸是当归、川芎、阿魏等的有效成分之一，
具有抗氧化、清除自由基、抗血栓、降血脂、防治冠心
病、抗菌、抗病毒、抗突变、防癌、增加免疫功能、清除
亚硝酸盐等作用[1]。本实验从伞形科植物川芎
LigusticumchuanxiongHort．的干燥根茎中提取精
制了川I芎提取物(主要成分为阿魏酸)，采用大鼠在
体肠吸收实验方法，对川芎提取物中阿魏酸的吸收
动力学进行研究，为川芎或其他含有阿魏酸的中药
开发成缓释制剂提供生物学依据。
1仪器、药品、试剂和动物
LC一10ATVP型高效液相色谱仪、SPD一
10AVP型检测器(日本岛津公司)；KQ一100DB型
数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；UV一
9100紫外分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)；
HH—S型恒温水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)；
HL一2恒流泵(上海精科实业有限公司)。
JII芎对照药材(中国药品生物制品检定所，批
号：120918—200406)；阿魏酸对照品(中国药品生物
制品检定所，批号：0773—9910)；乌拉坦(进口分装)；
酚红(沈阳市试剂三厂)；川芎药材(由辽宁泰伦有限
公司)提供，按照《中国药典))2005年版鉴定，符合药
典标准；D一101大孔树脂(天津海光化工有限公司)。
甲醇(色谱纯)；冰醋酸(分析纯)；水为重蒸水；
其他试剂为分析纯。
雄性Wistar大鼠，(200±20)g，沈阳药科大学
动物实验中心提供。
2方法与结果
2．1 川芎提取物的制备[2]：将川芎饮片粉碎成粗
收稿日期：2006—04—28
作者简介：杨星钢(1974一)，男，黑龙江省双鸭山市人，博士，主要从事缓控释制剂与中药制剂现代化研究。
E—mail：yangx9123@163．corn
*通讯作者潘卫三Tel：(024)23986313Fax：(024)23953241E—mail：ppwwss@163．corn
万方数据
HPLC-ELSD法测定胡芦巴提取物中4-羟基异亮氨酸
作者： 惠玉虎， 杨朝昆， 寇玉锋， 任静
作者单位： 西安皓天生物工程技术有限责任公司,陕西,西安,710075
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(1)

参考文献(2条)
1.Jiangsu New Medical College 中药大辞典 2004
2.Fang J;Liu Z Y;Xiong Z T Determination of 4-hydroxyisoleucine contents in Trigonella foenungraecum
by HPLCELSD[期刊论文]-华西药学杂志 2004(05)

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1. 刘玲.丁永良.张国林.LIU Ling.DING Yong-liang.ZHANG Guo-lin 4-羟基异亮氨酸的研究进展[期刊论文]-天然
产物研究与开发2006,18(3)
2. 白梅荣.田梅.高玉峰.Bai Meirong.Tianmei.Gaoyufeng 川楝子水提物与GOT和GOP活性的相关性研究[期刊论文
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