全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·709·
蛋白家族；选择凝集素家族；钙离子依赖的细胞黏附
素家族；以及一些未归类的黏附分子：整合素超家
族；免疫球蛋白超家族；选择素超家族；钙依赖黏附
分子超家族等。黏附分子参与细胞的信号转导与活
化，细胞的伸展和移动，细胞的生长及分化、炎症、血
栓形成、肿瘤转移、创伤急救等一系列重要生理和病
理过程。随着中医、中药研究的进展，已观察到中药
对黏附分子表达的影响[2~4]。
本实验运用免疫组织化学和RT—PCR两种方
法进行研究的结果表明，补阳还五汤对血瘀证大鼠
血管内皮细胞黏附分子蛋白及mRNA的表达的影
响，除PECAM一1的免疫组化结果外，均呈现出了
明显的量效关系。
关于补阳还五汤对iNOS影响的研究，已有报
道[5~7]，但均未进行量效关系的研究。从本实验运用
两种方法进行的量效关系的研究结果来看，不同剂
量的疗效具有一定差异，从而为临床应用提供了实
验依据。
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以血清药理学方法研究黄连解毒汤对小鼠的药效动力学
宋 珏，路通，谢 林，王广基，刘晓东+
(中国药科大学江苏省药物代谢动力学重点实验室，江苏南京 210038)
摘 要：目的 以含药血清对小鼠肝匀浆体外生成丙二醛(MDA)的抑制作用为指标，研究黄连解毒汤及单味药
水煎剂的药效动力学。方法测定小鼠ig黄连解毒汤及单味药所得含药血清对MDA生成作用的经时过程，并考
察黄连解毒汤含药血清、单味药煎剂及小檗碱、黄芩苷抑制MDA生成作用的剂量一效应关系。结果小鼠ig黄连
解毒汤、黄连、黄芩、黄连+黄芩后，含药血清均可抑制体外肝匀浆MDA生成，且作用呈剂量依赖性。各药的E。，
分别为86％、76％、79％及81％；f—。分别为180、120、5及15min；其煎剂对MDA生成抑制作用呈剂量依赖性；小
檗碱在0．12～10ng／mL无明显的抑制作用；黄芩苷在1．11～10／tg／mL有抑制作用，且作用亦呈剂量依赖性。结
论黄连解毒汤体内抗氧化作用强于各单方。黄芩苷可能是黄芩药液和含药血清中的抗氧化成分之一，而小檗碱
可能与含药血清抗氧化作用无关；小鼠ig黄连解毒汤及其单味药所得含药血清对MDA生成呈时间和剂量依
赖性。
关键词：黄连解毒汤；丙二醛(MDA)；血清药理学；药效动力学
中图分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0709—05
PharmacodynamicstudyonHuanglianJieduDecoctioninmice
byserumpharmacologicalmethod
SONGJue，LUTong，XIELin，WANGOuang-ji，LIUXiao-dong
(JiangsuKeyLaboratoryofD ugMetabolismandPharmacokinetics，
ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing210038，China)
Abstract：ObjectiveTos udythepharmacodynamicchar ceristicsofHuanglianJ eduDecoction
收稿日期：2004—10—10
基金项目：国家中医药管理局基金资助项目(02—032P32)；国家“863”项目资助(2003AA22347A)
作者简介：宋 珏(1979一)，女，安徽芜湖人，中国药科大学药理学在读硕士研究生，主要从事药动学研究。
*通讯作者E—mail：XDliu@hotmail．comTel：02583271006
万方数据
·710· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
(HJD)andits inglecomponentdecoctionisuchasRhizomaCoptidis(RC)，RadixScutellariae(RS)，and
RC+RSinmicebyserumpharmacologicalexperimentinvitro．MethodsDifferentdosesofthedrug—con—
rainingserumobtainedatdifferenttimeafterigHJD，RC，RS，andRC+RStomicewereaddedintothe
1iverhomogenateofmiceandtheformationofmalondialdehvde(MDA)wasmeasuredwiththiobarbituric
acidmethodinordertoobservethinhibitoryeffectsofthedrug—containingserumoMDAformation，the
time—course，anddose—effectr lationship．Theeffectsofd coctionsofHJD，RC，RS，RC+RS，berber—
ine，andbaicalinwereinvestigatedaswell．ResultsThedrug—containingserumbyigthedecoctionsof
HJD，RC，RS，andRC+RStomicehadtheinhibitoryeffectsonMDAformationinliverhomogenatein
vitrowithE。。；86％，76％，79％，and81％，andt。。。180，120，5，and15min，respectively，SOdidbaicalin
at1．11—10ng／mL．Allofthemshoweddose—dependentrelationship，butberberineshowednoeffecton
theformationofMDAat0．12—10ng／mL．ConclusionHJDiSmoreeffectiveoninvivoantioxidation
thantheothersinglecomponents．Baicalinm ya tasonlyoneoftheantioxidantsinthedrug—containing
serumofHJDaswellasinthedecoctions．Berberinehasnoth gtOdowiththeinhibitoryeffectofthe
drug—containingserum．Theobtaineds rumafterigHJDandits inglecomponentstomicemayinhibit
MDAformationinadose—andtime—dependentmanner．
Keywords：HuanglianJieduDecoction(HJD)；malondialdehyde(MDA)；serumpharmacology；
pharmacodynamics
黄连解毒汤为经典清热解毒方剂，原载于《外台
秘要》崔氏方。全方由黄连、黄芩、黄柏、栀子组成。主
治实热火毒、三焦热盛等证。方中黄连清泻心火为
君，黄芩清上焦之火为臣，黄柏泻下焦之火为佐，栀
子通泻三焦，导热下行为使。药理学研究证实，本方
作用广泛，具良好的抗菌消炎等功效。近年，该方其
他方面的药理作用，尤其是抗氧化作用，受到广泛关
注。实验表明，黄连所含的生物碱类成分如小檗碱、
巴马汀及黄连碱均可清除血浆NO一、0NOO一和
o：““。黄芩对酶促及非酶促两种途径生成过氧化
脂质的过程都有显著的抑制作用。黄芩主要成分黄
芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等黄酮类物质结
构中的2、3双键，4位羰基及3或5位羟基可能是
其清除自由基、抗氧化作用的活性结构[z~4]。对本方
抗氧化作用的研究也表明，该方体内、体外实验均呈
显著的抗氧化作用，因而近年被广泛应用于心脑血
管、消化系统疾患以及高血压的临床治疗[5~9]。
本研究用血清药理学方法，以药物对小鼠肝匀
浆自发生成丙二醛(MDA)的抑制作用为指标，观
察小鼠ig给予黄连解毒汤及组方中单味水煎液后，
不同时间含药血清体外抗氧化作用的经时变化及其
量效关系，并与药物水煎液的抗氧化作用进行比较，
旨在进一步阐明黄连解毒汤的药效动力学。
1材料与方法
1．1药材及供试液制备：黄连、黄芩、黄柏、栀子购
自南京药业股份有限公司药材分公司，经中国药科
大学生药学陈立娜博士鉴定，黄连为毛茛科植物黄
连CoptischinensisFranch．的干燥根茎；黄柏为芸
香科植物黄檗Phellodendronamu e seRupr．除去
栓皮的干燥树皮；栀子为茜草科植物栀子Gardenia
jasminoidesElli 的干燥成熟果实；黄芩为唇形科植
物黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根。以
上4味药按古方比例3：2：2：3组方，加10倍量
水浸泡lh，加热煮沸，文火煎煮1h，趁热滤过；再
按同法煎煮2次，合并3次滤液。文火浓缩至含黄
连、栀子生药0．75g／mL，含黄柏、黄芩生药0．5g／
mL的黄连解毒汤母液，冷藏备用。以同法分别制备
黄连、黄芩、黄连+黄芩母液，备用。
煎剂经高效液相色谱法进行主成分定量分析，
结果：黄连煎液中含小檗碱30mg／mL；黄芩煎液中
含黄芩苷35．38mg／mL；黄连+黄芩合煎液中含黄
芩苷4．33mg／mL、小檗碱3．1mg／mL；黄连解毒
汤含小檗碱6．2mg／mL、黄芩苷8．64mg／mL、栀
子苷13．2mg／mL。
1．2动物：普通级ICR小鼠，体重18～22g，雌雄
各半，由中国药科大学实验动物中心提供。
1．3试剂与仪器：黄芩苷对照品购自中国药品生物
制品检定所；小檗碱对照品由中国药科大学潘国宇
博士惠赠。MDA试剂盒，南京建成生物工程研究所
产品；硫代巴比妥酸，上海试剂二厂产品；752紫外
分光光度计；高速离心机等。
1．4体外肝匀浆生成MDA测定：正常小鼠禁食
12h，脱颈椎处死，迅速摘取肝脏，用4℃生理盐水
制成5％肝匀浆。取肝匀浆0．6mL加入待测样品
50pL，混匀，37℃水浴中孵育2．5h，迅速加入
20％三氯醋酸0．6mL中止反应。混匀，离心，取上
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·711·
清液1．0mL，加入0．8％硫代巴比妥酸1mL，
95。C水浴加热10min，冷却。于532nm波长处测
吸光度(A)值。以四乙氧基丙烷为标准品，求算每
克肝匀浆MDA生成量。以生理盐水为空白对照，求
算抑制率。
抑制率一(1一给药组每克肝匀浆MDA生成量／空白组
每克肝匀浆MDA生成量)×100％
1．5含药血清抑制肝匀浆MDA生成作用的经时
过程：小鼠随机分为44组，每组10只。实验前，动物
禁食12h。取1．1项下制备的黄连、黄芩、黄连+黄
芩及黄连解毒汤4种药物的母液，按1：8加水分别
稀释，各组动物ig给药，体积均为0．3mL／10g，给
药后各给药组均于5、10、15、30、45min及1、1．5、
2、3、4h摘眼球取血，分离血清50pL，按1．4项操
作测定各组MDA生成量。另取4组动物ig等量生
理盐水为对照组，并计算MDA生成抑制率。
1．6含药血清抑制肝匀浆MDA生成作用的量效
关系：小鼠随机分为20组，每组10只。动物禁食12
h，各组小鼠分别ig不同剂量黄连、黄芩、黄连+黄
芩及黄连解毒汤。各药剂量分组如下：取1．1项母液
分别稀释成1：4、1：8、1：16、1：32及1：64等
不同浓度，作为5个剂量组。给药后于各药作用峰时
间取血，分离血清50pL，按1．4项操作测定MDA
生成量及MDA生成抑制率。
1．7 水煎剂原液对肝匀浆MDA生成的抑制作用：
取1．1项制备的黄连、黄芩、黄连+黄芩及黄连解毒
汤药物母液分别稀释成1：40、1：120、1：400、
1：1200及1：4000等浓度，作为5个剂量组。按
1．4项操作测定MDA生成量，并计算MDA生成抑
制率。
1．8 小檗碱和黄芩苷对肝匀浆MDA生成的影响：
参照本实验室对大鼠ig黄连和黄芩煎剂后小檗碱、
黄芩苷的血药浓度研究结果(未发表)，将小檗碱对照
品配制成0．12、0．37、1．11、3．33、10．00ng／mL的
质量浓度系列，将黄芩苷对照品配制成0．12、0．37、
1．11、3．33、10．00／-g／mL的质量浓度系列。配制A、
B两个混合溶液系列，使A、B中黄芩苷质量浓度为
0．12、0．37、1．11、3．33、10．00pg／mL，并使A中的
小檗碱质量浓度为10ng／mL，B中小檗碱质量浓度
为3．3ng／mL。按1．4项操作测定小檗碱、黄芩苷单
用以及联用对肝匀浆MDA生成的影响。
1．9 统计处理：数据以z±S表示，组间数据以
Student—t检验分析差异。
2结果
2．1 含药血清对肝匀浆MDA生成抑制作用的经
时过程：由图1可知，4种药物的含药血清对肝匀浆
MDA生成均有明显的抑制作用。其中黄芩起效快、
持续时间短，5min即达抑制峰值(抑制率为
79．3％)，随后迅速下降，至120min降至谷值(抑
制率24．9％)，以后抑制率又上升至45．8％，其后
又下降；黄连起效较慢但维持时间较长，120min抑
制率才达峰值(76．0％)，作用可持续较长时间。黄
连+黄芩联用作用较两药单用都有所加强，作用峰
值(抑制率为84．1％)见于用药后15min，第2个
峰值(抑制率76．3％)在用药后180min出现，明
显高于黄芩的第2个峰值。黄连解毒汤的抑制作用
较前3个药均显著增强，作用持续时间也明显延长。
用效应一时间曲线下面积(AUE0240)反应处方的总效
果，黄连、黄芩、黄连+黄芩、黄连解毒汤的AUE。240
分别为13486．2、9867．6、15040．4、1916．2
(％·rain)。表明黄连与黄芩配伍具有协同作用，黄
连解毒汤作用强于单方，说明其组方的合理性。
图1 含药血清对体外肝匀浆MDA生成抑制
作用的经时过程(；±s，n一10)
Fig．1Time—courseofdrug—containingserum
inhibitiononMDAformationinliver
homogenateinvitro(j土s，撑一10)
2．2 含药血清抑制肝匀浆MDA生成作用的量效
关系：见表1。各药作用均与剂量呈正相关。给予剂
量分别为母液1：8及1：4稀释浓度时，两剂量的
含药血清作用相近，提示药物作用存在饱和现象。
2．3水煎剂原液对体外肝匀浆MDA生成的抑制
作用：由表2可见，各药的水煎剂均对MDA的生成
有显著抑制作用，且作用呈剂量依赖性，随着药物剂
量增大，抑制率幅度递减，最终达到稳态水平。各药
作用强度有一定差异，以黄芩作用最强，黄连解毒汤
次之，黄连最弱，与体内结果不一致。
2．4小檗碱及黄芩苷对肝匀浆MDA生成的影响：
见表3。质量浓度在1．11～10肛g／mL时，黄芩苷对
万方数据
·712· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
MDA生成有抑制作用，且呈浓度依赖性。小檗碱仅
在最高剂量(10ng／mL)时，对MDA生成有抑制
作用(P
表1不同剂量含药血清对体外肝匀浆MDA生成的抑制作用(工±s，厅一10)
Table1 InhibitionofdrugcontainingserumindifferentdosesonMDAformationinliverhomogenatei vi ro
与对照组(抑制率为o)比较：’P
Table2 InhibitionofaqueousdecoctiononMDAformationinliverhomogenatei vitro(；±s，一一5)
表3小檗碱、黄芩苷及两者混合液对体外肝匀浆MDA生成的抑制作用(J士s，n一5)
Table3 Inhibitionofberberine，baicalin，andtheircombinationonMDAformation
inliverhomogenateinvitro(；士s，一一5)
3讨论
含药血清作用经时过程显示，黄连单味用药起
效较慢，而作用持久；黄芩单味用药则起效快，而持
续时间短。两者配伍联用，黄连+黄芩组及黄连解毒
汤的作用均明显增强，尤以后者作用更强。本实验从
药效动力学角度进一步证实了黄连解毒汤组方的科
学性、合理性。各组动物的时间一效应曲线均呈多峰
状，提示即使黄连和黄芩单味用药，其抑制体外肝匀
浆MDA生成的有效成分也可能不止一种，而有可
能是两种甚至数种成分的作用结果。据文献报道，黄
芩苷体内并非直接被吸收进入血液循环，而是先由
肠道菌群作用转化为黄芩素后才能被吸收，后者与
肠黏膜上的葡糖醛酸转移酶UDPG结合为黄芩苷
被转运至门静脉。黄芩苷吸收过程的复杂性也可能
是其药效呈现多峰的原因之一。此外，黄芩所含的其
他多种黄酮苷类化合物，如汉黄芩苷等均有抗氧化
作用，且其吸收过程也需由肠道菌群代谢参与口州。
含药血清及煎剂原液的量效关系实验表明，各
用药组在高剂量时，作用强度基本相似；而低剂量时
各药作用强度不一，黄芩作用最强，黄连解毒汤次
之，黄连+黄芩和黄连较弱。此外，实验中尚发现，高
剂量黄连组小鼠有程度不一的毒性反应，表现为稀
便、步态不稳、活动减少等，且症状随剂量增加而加
重，高剂量组有个别死亡。而相同剂量黄芩组无此现
象。但给予含相同剂量黄连的黄连解毒汤方剂及黄
连+黄芩时，毒性反应较单用黄连明显减轻。这进一
步证实，黄连解毒汤方剂组方的科学性不仅表现在
药效的增强，动力学更趋合理，同时也表现在毒性的
降低。
传统观点一般认为，小檗碱及黄芩苷分别是黄
连和黄芩的主要有效成分，并常将这两种成分作为
控制黄连及黄芩制剂的标准。为考察黄连、黄芩的主
要成分小檗碱和黄芩苷在药材抗氧化作用中的贡
献，对这两种化合物进行了实验。本实验室对动物
ig给予黄连和黄芩煎剂后检测动物体内小檗碱及
黄芩苷血药浓度，发现小檗碱峰浓度在10ng／mL
以下，黄芩苷峰浓度在10／zg／mL左右。而本实验结
果发现，相应血药浓度的黄芩苷溶液有抑制肝
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·713·
MDA生成作用，且抑制率与浓度呈正相关，表明黄
芩苷是黄芩药液和含药血清中的抗氧化物质。但
10t-g／mL黄芩苷抑制率远远低于含药血清的抑制
率，表明其并非是含药血清中唯一的抗氧化物质，可
能尚存在其他物质亦可发挥抗氧化作用。
结果还表明，相应血药浓度的小檗碱溶液并不
能对体外肝匀浆MDA的生成产生明显的抑制作
用。笔者曾试图提高小檗碱浓度进行实验，发现小檗
碱在10ng／mL以下时，基本无抑制作用；质量浓度
在10～100ng／mL时，抑制率在10％以下；而质量
浓度达250ng／mL时，抑制率也只有12％，远远弱
于含药血清及稀释药液的作用。这表明了在黄连中
可能尚含有其他具抗氧化活性的物质。同时，有文献
研究表明，大鼠ig给予小檗碱[(10、20mg／(kg·
d)，10d]有抗氧化能力，提示其体内抗氧化作用可
能是通过体内特异的机制发挥的[1]。另外，小檗碱质
量浓度在10和3．3ng／mL时，黄芩苷与小檗碱混
合液抑制作用与黄芩苷溶液作用一致，并无明显增
强现象，表明在血药浓度的范围内，小檗碱对黄芩苷
的抗氧化作用并无明显的促进。 ‘
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红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢及
脂蛋白脂酶mRNA表达的作用
陈运中1’2，陈春艳1，张声华1
(1．华中农业大学食品科技学院功能食品与分子生物学基础研究室，湖北武汉430071；
2．武汉工业学院食品科学与工程学院，湖北武汉430023)
摘 要：目的 探讨红曲有效成分洛伐他汀对高脂小鼠血脂代谢调节的分子机制。方法 昆明种雌性小鼠48只，
按血清总胆固醇(TC)分为A、B、C、D、E、F6组：正常对照组、高脂对照组、绞股蓝总苷阳性对照组、洛伐他汀低、
中、高(5、15、30mg／kg)剂量组。A组喂饲基础饲料，其他各组喂饲高脂饲料；按剂量分别培给药6周，禁食12h
后，测定小鼠血脂水平相关指标；用Trizol试剂法提取总RNA，用反转录聚合酶链反应(RT—PCR)法检测肝、脾
组织脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表达。结果实验6周末，洛伐他汀低、中、高各剂量组使小鼠动脉硬化指数
(AI)均极显著低于高脂组(P
平，这可能是其调节血脂，预防动脉粥样硬化(AS)等心脑血管疾病的机制之一。
收稿日期：2004—10—09
基金项目：湖北省自然科学基金项目(2002AB080)
作者简介：陈运中(1962一)，男，博士，教授，华中农业大学博士，主要从事食品资源开发及工程化技术研究，天然活性产物及功能研究，
曾获湖北省科技进步三等奖一项，获国家发明专利一项。
Tel：(027)83956210E—mail：chenyunzhong@whpu．edu．an；ehyzh6204@126．corn
万方数据
以血清药理学方法研究黄连解毒汤对小鼠的药效动力学
作者： 宋珏， 路通， 谢林， 王广基， 刘晓东， SONG Jue， Lu Tong， XIE Lin， WANG
Guang-ji， LIU Xiao-dong
作者单位： 中国药科大学,江苏省药物代谢动力学重点实验室,江苏,南京,210038
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
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