作 者 :李瀚旻,晏雪生,明安萍,彭亚琴,桂文甲
期 刊 :中草药 2006年
关键词:姜黄素;脂质体;Bel-7402细胞;细胞凋亡;Bcl-2基因家族;
Keywords:curcumin, liposome, Bel-7402 cells, apoptosis, Bcl-2 gene family,
摘 要 :目的研究脂质体-姜黄素水溶制剂抗肝癌效应的稳定性。方法MTT法观察脂质体-姜黄素水溶制剂(放置1、2、4、8、12个月)对Bel-7402细胞增殖的抑制作用。原位末端标记方法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素水溶制剂放置12个月后诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素水溶制剂放置12个月后对Bax、Bcl-2和P53蛋白表达的影响。结果姜黄素水溶制剂随着放置时间的延长,抑制Bel-7402细胞增殖和诱导凋亡的作用均显著减弱。脂质体-姜黄素随放置时间的延长,抑制Bel-7402细胞增殖和诱导凋亡的作用无明显衰减现象,至放置12个月后脂质体-姜黄素10、5及0. 25μg/mL 3个剂量对Bel-7402细胞增殖仍有显著抑制作用,与同质量浓度的姜黄素比较,差异显著(P<0. 01),抑制作用随药物质量浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达43. 90%,且呈量效关系,3个剂量组间差异有显著性(P<0. 01),同质量浓度的脂质体-姜黄素的抑制率显著高于姜黄素的抑制率(P<0. 01)。姜黄素-脂质体放置12个月,Bel-7402细胞凋亡率达63. 7%。结论脂质体能显著提高姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制和诱导凋亡作用。脂质体-姜黄素水溶制剂放置12个月后对P53表达有显著影响,但对Bax和Bcl-2的表达无显著影响。
Abstract:Objective To study the stability of anti-liver cancer effects by liposome-curcumin in water solution. Methods Inhibition of liposome-curcurnin in water solution(exposed for l,2,4,8,12 months)on proliferation of Bel-7402 cells was observed by MTT assay,the effect of inducing Bel-7402apoptosis of liposome-eurcumin in water solution for 12 months was observed by end 1abeling method in sltu(TUNEL technique),and the effect of liposome-curcumin in water solution for 12 months on protein expression of apoptosis related gene Bax,Bcl-2,and P53 was observed by immunohistoehemical staining(Strep Avidin-Biotin-enzyme Complex,SABC method). Results Both the effects of inhibited hyperplasia and introdueed apoptosis to Bet-7402 cell by eureumin in water solution were apparently weakened with the time lasting,while the effect had no obvious weakening when it came to liposome-curcumin in water solution,and the three different dosages of liposome cureumin(10,5,and 0. 25 μg/mL)could also cause remarkable effect on inhibition of the proliferation of Bel-7402 even if exposing for 12 months. It differed significantly from the eureumin in water solution in the same density(P<0. 01),and the effect on inhibition of multiplieation had the tendency to strengthen with the density increasing of the medicine. The top inhibitory rate could be up to 43. 90%and present amount-result relation differences among the groups of different dosage,which were significant(P 全 文 :中草钨ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4,El·561·
吸收,这同时也可以解释女贞子组的粪钙排泄减少。
另外,各组间CaBP一9k表达无显著差异,这与实验
用饲料含钙量较高有关,说明在高钙饮食情况下,女
贞子对小肠钙结合蛋白的表达没有影响,但是,女贞
子是否对低钙饮食动物小肠CaBP一9k的表达有作
用,这需要作进一步研究。
女贞子对肾钙排泄的抑制作用与其可以提高肾
脏CaBP9k及CaBP一28k的表达有关,因为在肾脏
CaBP一28k主要负责钙的重吸收口],CaBP一9k负责肾
钙重吸收时的转运o。,此两种钙结合蛋白表达升高,
使得肾钙排泄减少,重吸收增加,因此女贞子组的尿
钙水平下降。当然,还有其他调控肾钙代谢的影响因
素,包括骨转换,肾小球滤过率以及其他基因的表
达o]。因此,今后的研究重点可考察女贞子是否对其
他涉及调控肾钙代谢的因素有作用。
本实验结果表明女贞子可通过上调小肠VDR
表达而提高肠钙吸收,通过上调肾脏钙结合蛋白而
加强肾钙重吸收。因此,女贞子对于维持体内钙稳
态,改善绝经后骨质疏松症具有重要意义,值得进一
步研究开发。
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脂质体一姜黄素水溶制剂抗肝癌效应的稳定性研究
李瀚曼,晏雪生,明安萍,彭亚琴,桂文甲
(湖北中医学院附属医院肝病研究所,湖北武汉430061)
摘要:目的研究脂质体一姜黄素水溶制剂抗肝癌效应的稳定性。方法MTT法观察脂质体一姜黄素水溶制剂
(放置1、2、4、8、12个月)对Be]一7402细胞增殖的抑制作用。原位末端标记方法(TUNEL技术)观察脂质体一姜黄
素水溶制剂放置i2个月后诱导Be!一7402细胞捅亡的作用。免症组织化学染色(sABC)法检测脂质体一姜黄素水
溶制剂放置12个月后对Bax、Bcl2和P53蛋白表达的影响。结果姜黄素水溶制剂随着放置时间的延长,抑制
Bel一7402细胞增殖和诱导凋亡的作用均显著减弱。脂质体一姜黄素随放置时间的延长,抑制Bel7402细胞增殖和诱
导凋亡的作用无明显衰减现象,至放置12个月后脂质体姜黄素10、5及0.25/tg/mL3个剂量对Bel一7402细胞增
殖仍有显著抑制作用,与同质量浓度的姜黄素比较,差异显著(尸
月后对P53表达有显著影响,但对Bax和Bcl—2的表达无显著影响。
关键词:姜黄索;脂质体;Bel一7402细胞;细胞凋亡;Bcl一2基因家族
中圈分类号:R286.91 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)04—0361—05
收稿日期:2002—09叭
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30271562,30371787);国家科技部重大基础研究贷助项日(2002CCC00300);湖北省自然科
学基盘资助项目(2001ABBl71)}期北省教育厅。十五”重大研究项目(2002D00003)‘湖北省。十五”攻关项目
(2002AA301C081
作者简介:李瀚昱(1956一),男,劫J匕省利川市人,博士,主任医师,研究生导师,湖北中医学院附属医院肝病研究所副所长,国家中医药
科研Ⅱ级实验室主任,主要研究方向为中医药治疗慢性肝病,在浚领域已发表沧文40余篇,出版专著6部,获省部级科技进
步奖4项,申报专利2项.转让科研成粜t硬。Tel;(027188929180E—mailtihaamia69@126cDm
万方数据
中卓焉ChineseTraditionalandHerbalDr gs第37卷第4期2006年4月
Stabilityofanti-livercancerefficacybyliposome—curcumininwatersolution
LIHan—rain,YANXue—sheng,MINGAn—ping,PENGYaqin,GUIWen—jia
(HepatopathyIns itute,AffiliatedHosp talofHubeiCollegeofTraditional(;hineseMed cine,Wuhan430061+China)
Abstract:ObjectiveTostudythestabilityofanti—livercancereffectsbyliposome—curcumininwater
solution.MethodsIn ibitionofliposomeeurcurnini watersolution(exposedforl,2,4,8,12
months)onproliferationofBel7402cellswasobservedbyMTTassay.theeffectofinducingBel一7402
apoptosisfliposome—eurcumininwatersolutionfor12monthswasobservedby nd1abelingmethodin
sltu(TUNEl。technique),andtheffectofliposome—curcumininwatersolutionfor12monthsonprotein
expressionofapoptosisrelatedg neBax,Bcl一2,andP53wasobservedbyimmunohistoehemicalstaining
(StrepAvidin—Biotin—enzymeComplex,SABCmethod).ResultsBoththeffeCtSofinhibitedhyperplasia
andintrodueedapoptosistoBet一7402eellbyeureumininwatersolutionwereapparentlyweakenedwiththe
timelasting,whilet effecthadnoobviousweakeningwhenitcametoliposome—curcumininwatersolu—
tion,andthethreedifferentdosagesofliposomecureumin(10,5,and.2pg/mL)couldalsocausere—
markableeff ctoninhibitionoftheproliferationofBel一7402evenifexposingfor12months.Itdiffered
significantlyfromheureumininwatersolutioninthesamedensity(P<0.01).andtheffectoninhibi
tionofmultiplieationh dhetendencytostrengthenwiththedensityncreasingofthemedicine.Thetop
inhibitoryratecouldbeupto43.90%andpresentamount—resultrelationdifferencesamongthegroupsof
differentdosage,whicheresignificant(P
apoptosisrateofBel—7402wasupto63.7%.ConclusionI,iposomecansignificantlyimprovetheffectof
curcuminon nhibitingheBel一7402multiplicationandinducingitsapoptosis.Liposomecureumininwater
solutionfor12monthshasnotableinfluenceo thexpressionofP53,huthasnonotableinfluenceo the
expressionofBaxandBcl一2.
Keywords:curcumin;liposome;Bel一7402cells apoptosis;Bcl2genefamily
姜黄素的抗癌(包括肝癌)等多种生物学效应
已得到广大学者和临床研究工作者的证实,但姜黄
素口服吸收较差(生物利用度低)、难溶于水且极不
稳定的“瓶颈问题”严重阻碍着I类新药的开
发””1。为进一步提高姜黄素防治肝癌的生物学效
应,前期研究证实,采用德国宝灵曼公司的脂质体,
利用姜黄素的亲脂性与脂质体所带脂肪酸的尾结合
形成脂质体姜黄素复合物,通过融合、内吞等方式
将所携带的姜黄素送人人肝癌细胞Bel一7402内,在
减少姜黄素用量的同时,可显著增加其抗肝癌的生
物学效应“]。本研究进一步观察脂质体一姜黄素水溶
制剂抗肝癌效应的长期(放置12个月后)稳定性。
l材料
姜黄素(中国药品生物制品检定所提供,批号
0823—9802)。脂质体购自德国宝灵曼公司。姜黄素溶
于不含血清的RPMI—1640培养液中,分为2份,其
中1份加入用同样方法稀释的脂质体,两者混匀
(体积比为l:1),使之形成脂质体一姜黄素复合物。
于4C冰箱分别放置l、2、4、8、12个月后,用于实
验。RPMI一1640培养基及胎牛血清为Gibco公司产
品。注射用盐酸阿霉素,浙江海正药业股份有限公司
生产。阿霉素分别溶于不含血清的RPMI一1640培
养液中,作为实验的阳性对照药。原位凋亡(荧光
素)检测试剂盒为德国BoeringerMannheim公司
产品。Bax、Bel一2和P53一抗为美国SantaCruz公
司产品。人肝癌细胞株Bel一7402由武汉大学生命科
学院中国典型培养物保藏中心提供。
2方法
2.1细胞培养:人肝癌细胞株Bel7402接种于含
10%胎牛血清、适量HEPES、抗生素(100U/mI,
青霉素和100/*g/mI,链霉素)的RPMl—1640培养
液中,置培养箱于5%CO。、37.(充分湿化条件下
培养传代。细胞换液时间为2~3d,3~5d传代,
0.25%胰蛋白酶消化后1:2传代。采用MTT法
检测细胞增殖,在酶联免疫检测仪上于490nm波
长处测定吸光度(A)值。计算细胞增殖抑制率[抑
制率一(1一实验组A值/对照组A值)×100%]。采
用原位末端标记(TUNEI。)技术检测细胞凋亡,24
孔培养板每孔置人一块无菌玻片。取对数生长期
Bel7402细胞,消化制备细胞悬液,调整细胞浓度
为1×105/mL,接种于24孔板内,每孔lmL。置于
CO。培养箱内常规培养,5%CO,,相对湿度为95%,
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第3口卷第4期2006年4月·563·
温度为37C。
2.2给药处理:置培养箱24h后,药物组加入姜黄
素或脂质体一姜黄素复合物,终质量浓度分别为10、
5、2.5ttg/mL,阳性对照组分别加入阿霉素(10
pmol/L),无药对照组仅加培养液。以上各组均平行8
孔(细胞增殖抑制实验)或6孔(细胞凋亡及Bax、
Bcl一2、P53表达),继续培养48h后,取出爬满细胞
的玻片,用PBS漂洗两遍.经4%多聚甲醛固定30
min,PBS洗涤后自然风干,一20c保存待测。
2.3观察指标:检测结果在荧光显微镜下观察,将
细胞分为3类:活细胞(VC),核被荧光素染成亮绿
色并呈正常结构;早期凋亡细胞(AC)。细胞膜完
整,核染色质被荧光素和姜黄素染成黄绿色并呈固
缩状或圆珠状;膜受损细胞(MD),包括晚期凋亡与
坏死细胞,姜黄素大量透人,核被染成桔黄色。分类
计数loo个细胞,计算凋亡率[凋亡率一
学(SABC)染色法检测Bax、Bcl2和P53表达,胞
浆和/或胞膜被染成棕褐色判为Bax、Bel一2和P53
表达阳性细胞。显微镜下每张切片随机选5个高倍
视野(×400),观察不少于500个肿瘤细胞,计数阳
性细胞占全部观察肿瘤细胞的比例作为Bax、Bcl一2
和P53阳性细胞率。实验资料(A值、阳性细胞率)
以z±S表示,均数间比较采用t检验,两变量问相
互关系采用直线相关分析。
3结果
3.1脂质体一姜黄素抑制肝癌细胞增殖的稳定性:
姜黄素的水溶制剂随着放置时间的延长,对Bel一
7402细胞增殖的抑制作用显著减弱,其减弱的速度
呈现开始较快,1个月后速度放慢,至12个月后的
抑制作用虽已很弱,但仍有一定抑制作用,与无药对
照组比较,差异具有显著性(P
制作用无明显衰减现象,至放置12个月后脂质体一
姜黄素10、5及0.25pg/mL3个剂茸对Bel一7402
细胞增殖仍均有显著抑制作用(P<0,01),抑制作
用随药物质量浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可
达43.90%,且呈量效关系,3个剂量组间差异显著
(P
Table1 Effectofliposome—curcuminoninhibitingproliferationofBel一7402cellsatdifferenttimes(f±s.H--8)
与埘照组比较:。P
与10flg/mL脂质体一姜黄素组比较:6P<001
lip<0,01
。P
3.2脂质体一姜黄素诱导Bel一7402细胞凋亡的稳
定性:荧光显微镜下,凋亡细胞核被染成黄绿色或桔
黄色并呈固缩状或圆珠状,部分细胞核碎裂,呈大小
不等、形态不规则的碎片,或呈梅花状细胞核。随着
放置时间的延长,姜黄素水溶制剂诱导Bel一7402细
胞凋亡的作用逐渐减弱,开始速度较快,1个月后速
度放慢,至12个月时,其诱导凋亡的作用虽已很弱,
但仍有一定作用,与无药对照组比较,差异显著
(Pd0.05)。在放置1、2、4、8、12个月的观察时间
内,随放置时间的延长,脂质体一姜黄素诱导Bel一
7402细胞凋亡的作用无显著减弱,至12个月,Bel.一
7402细胞凋亡率达63.7%,与10/。mol/L阿霉素
组比较,差异无显著性(尸>0.05)。脂质体一姜黄素
组细胞凋亡率高于姜黄素组,差异显著(P
3.3脂质体姜黄素对Bax、Bcl一2和P53蛋白袁达
的影响:Bax、Bcl一2和P53蛋白主要定位于细胞浆,
亦可见于胞膜,染色阳性信号呈棕褐色。脂质体一姜
黄素放置12个月后对Bax、Bcl一2的表达无影响,与
无药对照组比较,差异不显著(P>0.05)。P53的阳
性表达与无药对照组比较,差异显著(P<0.01);
P53的阳性细胞率随脂质体一姜黄素用药剂量的增
万方数据
中革蒋ChineseTradiUonalndHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
加而上升,呈显著的量效关系(P
表2膳质体一姜黄素放置12个月对Bel一7402
细胞凋亡的影响(x4-s,H一6)
Table2 Effectofliposome—curcumlnonapoptosisf
Bel一7402celIfor12months(j±s,Ⅱ一6)
与对照组比较:‘P<0.05一P
‘P
P53蛋白表达的影响(T±j,^一6)
Table3 Effectofliposome—curcumin011expression
ofproteinBax.Bel一2,andP53ofBel一7402
ce¨for12monthsG±s,n一6)
m一 “* :筑:戮:嚣细腱率/% 细胞率/X 细胞率/蹦
脂质体姜黄索
阿霉素
对照
lO皑·mL
1
5腭·m1.一l
2 5 Fg·mL
10“-L
与对照组比较;一P<0.01
与2.5Pg/mL脂质体姜黄紊组比较:‘P
Bax、Bcl一2和P53表达的相关性:放置12个月后的
脂质体一姜黄素(10、5、2.5pg/mL)作用Bel7402
细胞48h,Bax及Bcl2表达水平无显著性变化。直
线相关分析显示,Bax和Bcl一2表达水平与凋亡率
不存在相互关系(r一0.886,r一0.346),无显著性
差异(.『)>o.05)。P53的表达水平与凋亡率呈显著
的正相关,P53阳性表达率越高,凋亡细胞越多
p一0.999,P<0,05)。
4讨论
脂质体是一种定向药物载体,属于靶向给药系
统(targetingdrugdeliverysystem)的一种新剂
型,具有靶向性、稳定性、长效性、降低药物毒性等优
点。本研究采用脂质体一姜黄素的水溶制剂分别放置
1、2、4、8、12个月用于体外细胞实验,以观察脂质
体姜黄素水溶制剂抑制Bel一7402细胞增殖和诱导
其细胞凋亡作用的稳定性,并探讨其作用机制。实验
结果表明,脂质体一姜黄素水溶制剂具有很强的稳定
性,除外观始终保持均匀透明(没有结晶析出)和
原有的淡黄色外,更重要的是,在观察的时间以内.
该制剂抑制人肝癌细胞增殖和诱导其凋亡的生物学
效应基本保持不变。2.5、5和10/Lg/mL脂质体姜
黄素放置1、2、4、8、12个月后抑制Bel7402细胞增
殖和诱导其凋亡的作用无显著变化。10gg/mI。脂
质体一姜黄素放置l、2、4、8、12个月后对Bel一7402
细胞的抑制率分别为42.25%、37.93%、45.57%、
40.80%、43.90%,各时间点的抑制率差异无显著
性。2.5、5和10Fg/mL脂质体姜黄素放置12个
月后对Bel7402仍具有诱导凋亡的作用,其凋亡率
分别为28.5%、40.9%、63.7%,与放置3h
(26.9%、43.4%、68.9%)比较,差异无显著性
(P>0.05)。而姜黄素的水溶性制剂在观察时间(1、
2、4、8、12个月)内随着放置时间的延长,其抑制
Bel一7402增殖和诱导凋亡的作用迅速减弱。脂质体一
姜黄素水溶制剂不仅比单纯姜黄素水溶制剂具有更
强的抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡的作用,而且
稳定性很好,从而为解决姜黄素难溶于水和稳定性
差的问题提供了新的有效解决方法,为进一步开发
姜黄素水溶制剂的新药提供了新的研究思路与
方法。
前期研究结果提示脂质体一姜黄素不是通过影
响Bax和Bcl一2表达水平而诱导Bel一7402细胞凋
亡的“’。本研究将放置12个月后的脂质体一姜黄素
重复上述实验,结果同样是对Bax和Bcl一2表达水
平无显著影响。为探讨可能存在其他的诱导凋亡的
路径和机制,本研究观察了脂质体一姜黄素对P53
蛋白表达的影响。实验结果表明,P53蛋白的表达水
平与凋亡率存在相互关系,经脂质体一姜黄素(放置
3h和12个月)作用48h后,P53阳性表达率越
高,凋亡细胞越多,呈显著的正相关(r一0.993,,一
0.999,P
P53的表达实现的。
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平律复方对大鼠心肌缺血一再灌注心律失常的影响
安薇1,杨静■张建忠2,汪俊军2,刘茂南4
(1,武汉大学医学院药理学系,湖北武汉430071;2.武汉市薪洲区人民医院,湖北武汉430400)
摘要:目的研究平律复方对大鼠心肌缺血一再灌注心律失常的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支ls
rain,再灌注45rnin造成大鼠心肌缺血再灌注模型,监测标准Ⅱ导联心电图变化,测定心肌细胞膜Ca2_一ATP酶、
Mg抖ATP酶及Na‘,K+一ATP酶的活力,采用RP—HPLC法检测心肌组织ATP水平、腺苷酸池(TAN)水平和
能量负荷值(Ec)。结果平律复方(ig,0.04、02 、1. 0g/kg)能有效降低大鼠心肌缺血一再灌注心律失常的发生
率,显著缩短室性心律失常的持续时间}能对抗缺血一再灌注心肌ATP酶活力的异常变化;各剂量组心肌组织
Aq’P水平恢复为正常对照组的58%、68%和86%.TAN水平和EC值比模型对照组分别增加了25%、49%、66州
和24%、27%、29%。结论平律复方具有抗大鼠心肌缺血一再灌注心律失常的作用,其机制可能与改善心肌组织的
能量代谢有关。
关键词:平律复方;心肌缺血一再灌注;心律失常;能量代谢
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)040565—
EffectofPinglnFormulaonarrhythmiaof yocardialischemia-reperfusioninrats
ANWeil,YANGJin91,ZHANGJian—zhon92,WANGJun—jun2,I。IUMao—nan2
(1.DepartmentofPharmacology,MedicalCollege“WuhauUniwer,£ity,Wuhan430071,China;
2.WuhanXinzhauPeople
7
sHospital,Wuhan430400,China)
Abstract二ObjectiveTostudytheffectofPingl0Formula(Pl。)onthearrhythmiaof yocardialis—
chemiareperfusioninrats.MethodsRatarrhythmiamodelswereestablishedbyocclusionoftheI,AD
coronarvartervfor15minandthereafterreperfusionfor45min.Atthesametime,thec angesw reob—
seryedOil eadⅡdyrnamieECG.TheactivitiesofCa”ATPase,Mg“一ATPase,andNa+,K。一ATPase
weredetermined.respectively.ThelevelsofATP,totaladeninenucleotides(TAN),andenergycharge
(EC)ofthemyocardialorganizeden rgystatew reanalyzedbyRP—HPLC.ResultsPI。(ig0.04,0.20,
and1,00g/kg)showedt decreasetheincidenceofarrhythmiainducedbyischemiareperfusion,shorten
thedurationofventriculararrhythmiaandeliminatetheincidenceofventricularfibrillation.Theactivities
ofCa抖ATPase,M92十一ATPase,andNa+,K1一ATPasewereincreasedbyPLInthePL(0.04,0.20,
and1.00g/kg)groups,ATPlevelsrecoveredto58%,68%,and86%ascomparedwithnormalgroup,
simul—taneously,TANva ueswereenhancedto25%,49%,and66%andECvaluestO24%,27蹦,and
29%,respectively.ConclusionPLhasobviousantiarrhythmiceffectOnrat,theprotectiveactionisrelat
edtotheimprovementofenergymetabolism.
Keywords:Pingl0Formula(PL);myocardialischemia—reperfusion}arrhythmia;energymetabolism
心肌缺血一再灌注是一种复杂的病理生理过程,
再灌注心律失常是目前临床冠脉搭桥术、血管成形
术及溶栓术等心脏介入性治疗中常见的严重并发
症‘“。平律复方(以下简称PL)是结台中医理论研
制的复方中药制剂,主要由苦参、豆根、黄芩、麦冬、
甘草、五味子、党参、射干等组成,多年临床实践表
收稿日期:2005—07—28
毳喜蓄异;翌北囊蓑器乎骂喜曼誓蓑蔫券苏嚣噩}墨簧2苗00旗36宣00涪20州09入1,硕土研究生,主要旗事分子持理与新药研究。T叱(。2,)s8,5s,盯
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万方数据
脂质体-姜黄素水溶制剂抗肝癌效应的稳定性研究
作者: 李瀚旻, 晏雪生, 明安萍, 彭亚琴, 桂文甲, LI Han-min, YAN Xue-sheng, MING
An-ping, PENG Ya-qin, GUI Wen-jia
作者单位: 湖北中医学院附属医院肝病研究所,湖北,武汉,430061
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(4)
被引用次数: 2次
参考文献(4条)
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本文读者也读过(10条)
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引证文献(2条)
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