全 文 ：河南栾川地区“白化”丹参的 TLC 和 HPLC 图谱分析
赵瑞娜1, 谢培山1, 2, 尹卫平1, 卢平华2, 颜玉贞2, 王忠东1Ξ
(11 河南科技大学化工与制药学院, 河南 洛阳　471003; 21 珠海科曼中药研究有限公司, 广东 珠海　519085)
摘　要: 目的　借助丹参药材 TL C 和 H PL C 图谱的条件, 对河南栾川地区“白化”丹参 (因生长环境影响而根部表
皮及断面呈白色) 与正常丹参的品质进行色谱图谱分析, 比较成分的异同。方法　TL C 色谱条件: GF 254预制薄层
板, 水溶性部位与脂溶性部位分别展开、显色; H PL C 色谱条件: Zo rbax SB C18色谱柱, 水溶性部位与脂溶性部位分
别进行梯度洗脱。结果　栾川地区“白化”丹参脂溶性有效成分明显偏低, 仅检出痕量的二萜醌类成分; 水溶性部分
丹参酚酸类成分较高。结论　栾川地区丹参根的“白化”现象反映了生长环境可影响丹参二萜醌类成分的生物合
成, 具体影响因素待进一步考察, 是值得丹参 GA P 管理注意的问题。
关键词: 丹参; “白化”丹参; 薄层色谱; 高效液相色谱
中图分类号: R 282171013　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2006) 01 0119 04
Qua l ity ana lysis of‘wh itish’R ad ix Sa lvia M iltior rh iza in L uanchuan Reg ion
of Henan Prov ince by TLC and HPLC
ZHAO R u i2na1, X IE Pei2shan1, 2, Y IN W ei2p ing1, LU P ing2hua2, YAN Yu2zhen2, W AN G Zhong2dong1
(11Chem ical and Pharm aceu tical Co llege, H enan U niversity of Science and T echno logy, L uoyang 471003, Ch ina;
2. Zhuhai Ch roM ap Institu te of H erbal R esearch, Zhuhai 519085, Ch ina)
Abstract: Objective　To study the samp le quality of‘w h it ish’R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a ( the roo t of
a grow n2environm en ta l2inf luenced varian t samp le of S a lv ia m iltiorrh iz a , w h ich co rtex and tran sect ion is
w h ite) grow n in L uanchuan R egion of H enan P rovince and no rm al R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a by the m ean s
of TL C and H PL C ch rom atograph ic fingerp rin ts; hence to compare the difference of their con st ituen ts.
M ethods　TL C Ch rom atograph ic condit ion: P recoated silica gel F 254 p la te; hydroph ilic and lipoph ilic con2
st ituen ts w ere developed and derivat iza ted w ith differen t so lven t system s and visualiza t ion reagen ts, re2
spect ively. H PL C Ch rom atograph ic condit ion: Zo rbax SB C 18 co lum n; hydroph ilic and lipoph ilic con2
st ituen ts w ere gradien t elu ted, respect ively. Results　T he‘w h it ish’R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a con ta in s
low er con ten t of lipoph ilic compounds, the m ain diterpene qu inones w as on ly trace amoun t, w h ile the con2
ten t of hydroph ilic con st ituen ts w as rela t ively h igher. Conclusion　T he‘w h it ish’phenom enon suggests
tha t the‘m icro’2environm en ta l condit ion can p robab ly influence negat ively the b io2syn thesis of d iterpene2
qu inones. T he facto rs of influence st ill need fu rther study. Such phenom enon w ou ld be w o rth concern ing
seriou sly fo r GA P adm in ist ra t ion.
Key words: S a lv ia m iltiorrh iz a Bunge; ‘w h it ish’R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a; TL C; H PL C
　　丹参始记载于《神农本草经》, 具有活血化瘀、清
心除烦之功效[1 ]。《中国药典》2005 版一部收载丹参
为唇形科鼠尾草属植物丹参 S a lv ia m iltiorrh iz a
Bunge 的干燥根及根茎。其主要有效成分为脂溶性
的二萜醌类和水溶性的丹酚酸类成分[2 ]。其中脂溶
性部位具有抗菌、抗炎、治疗冠心病等疗效, 水溶性
酚酸类成分具有改善微循环、抑制血小板、减少心肌
损伤和抗氧化等作用, 丹参及其制品广泛地应用于
临床。目前在四川和陕西均建有丹参药材的 GA P
种植基地。
2003 年笔者在河南栾川地区发现同一地区的
不同生长地点丹参根有红 (正常)、白 (异常)之分, 而
种质为同一来源, 植物鉴定均为丹参。所谓“白化”丹
参很可能是因为局部生长微环境影响了丹参酮Ê A
等二萜醌类成分的生物合成途径, 根的皮部没有红
色出现, 为便于与正常生长的丹参区分, 针对这种
“白化”现象, 取名“白化”丹参。而在同地区的其他生
长点没有“白化”现象。由于外观差异较大, 故多被弃
置不用, 药农损失较大。为了分析两者内在成分的差
异, 本研究采用了经优化的薄层色谱及液相色谱条
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Ξ 收稿日期: 2005204223
件, 对上述“白化”丹参及正常丹参的成分进行综合
分析。
1　高效薄层色谱试验
111　仪器与试药: 瑞士 CAM A G 全自动点样仪
A T S4; 薄层色谱成像系统 R ep roStar 3; 薄层扫描仪
TL C Scanner3; 薄层色谱工作站: w inCA T s1. 3. 5,
双槽展开缸。甲醇、醋酸乙酯、无水乙醇、氯仿、甲酸
等均为分析纯。
丹参药材共 37 批, 收集自四川、广东、湖南及河
南等省,“白化”丹参 1 批, 产自河南栾川, 均由河南
科技大学化工与制药学院王忠东教授提供并鉴定。
112　方法与结果
11211　供试品溶液的制备: 脂溶性部位: 取丹参药
材粉末 (过 2 号筛)约 1 g, 加 50 mL 醋酸乙酯, 置水
浴加热回流 2 次, 每次 30 m in, 滤过, 合并滤液, 蒸
干, 残渣加无水乙醇溶解, 制成 1 mL 溶液, 即得。
水溶性部位: 取脂溶性部位项下挥干醋酸乙酯
后的药渣, 加水 50 mL , 煎煮 30 m in, 放冷, 用棉花
滤过, 滤液移至分液漏斗中, 用 10% HC l 调 pH 值
至 2 左右, 用水饱和的醋酸乙酯萃取 2 次, 每次 30
mL , 合并萃取液, 蒸干, 残渣加甲醇溶解, 制成 2 mL
溶液, 即得。
11212　对照品溶液的制备: 脂溶性部位: 精密称取
丹参酮Ê A、隐丹参酮和二氢丹参酮对照品适量, 分
别加无水乙醇制成含 1 m gömL 的溶液, 即得。水溶
性部位: 精密称取丹参素和丹酚酸B 对照品适量,
分别加甲醇制成 110 m gömL 的溶液, 即得。
11213 　高效薄层色谱条件: 点样: 照《中国药典》
2005 版一部附录 Î B 薄层色谱法进行。脂溶性部
位: 吸取上述样品和对照品溶液各 5 ΛL , 分别点于
同 一 硅 胶 GF 254 预 制 薄 层 板 ( Sigm a, 批 号
10B 204667) 上。水溶性部位: 吸取上述样品和对照
品溶液各 2 ΛL , 分别点于同一硅胶 GF 254高效薄层
板 (M erck, 批号OB 257276) 上。点样后将薄层板置
于五氧化二磷真空干燥器内干燥过夜, 备用。展开剂:
脂溶性成分用正己烷2醋酸乙酯2甲酸 (30∶10∶
015) 展开, 展距 10 cm ; 水溶性成分用氯仿2醋酸乙
酯2甲酸 (5∶4∶2) 展开, 展距 8 cm。薄层板从干燥
器中拿出后立即展开。温度 23 ℃, 湿度 53% (环境
湿度)。
11214　显色及观察: 脂溶性部位: 喷以 10% 硫酸
乙醇溶液, 于 105 ℃ 加热至斑点显色清晰为止, 置
紫外光 (366 nm ) 灯和日光下检视。水溶性部位: 先
在紫外光 (366 nm ) 灯下观察荧光色谱, 再喷以 5%
香草醛浓硫酸溶液, 于 105 ℃ 加热至斑点显色清晰
为止, 置于日光下检视。
11215　结果: 在脂溶性部位的色谱 (图 1) 中, 四川
中江和河南伊川的丹参药材在与对照品相应位置,
显相同的斑点, 属正常现象。而“白化”丹参药材在与
对照品相应的位置未检出斑点; 显示未检出二氢丹
参酮、隐丹参酮、丹参酮Ê A 等主要的二萜醌类成
分; 在水溶性供试品色谱 (图 2) 中, 正常丹参与“白
化”丹参药材在与对照品相应位置, 均显相同颜色的
荧光斑点和可见光斑点, 在同样取样量的推荐下, 色
谱的各主要斑点如丹参酚酸B、丹参素均较正常丹
参明显。
A 2显色后紫外光 (366 nm ) 色谱　B2显色后可见光色谱　12对
照品从下至上, 二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮 ÊA　2224# 四川
中江产丹参　3223# 河南伊川产丹参　42“白化”丹参
A 2fluo rescen t (366 nm ) ch rom atogram after visualization　B2
visib le ch rom atogram after visualization　12con tro l from below
to above, dyh idro tansh inone, cryp to tansh inone, tansh inone Ê A
2224# R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a grow n in Zhongjiang Region
of Sichuan P rovince　3223# R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a grow n
in Yichuan Region of H enan P rovince 　 42‘w h itish ’R ad ix
S a lv ia M iltiorrh iz a
图 1　脂溶性成分的薄层色谱图
F ig. 1　TLC Chromatogram of l ipoph il ic con stituen ts
2　高效液相色谱指纹图谱试验
211　仪器与试药: A gilen t1100 高效液相色谱仪, 在
线脱气机, 四元泵, 自动进样器, 柱温箱,DAD 检测
器, H P1100 色谱工作站。醋酸乙酯、磷酸等均为分
析纯, 甲醇、乙腈为色谱纯, 水为重蒸馏水。对照品样
品同 TL C 试验项下。
212　方法与结果
21211　供试品溶液的制备: 取丹参药材粉末 (过 2
号筛) 约 015 g, 按 11211 项下供试品溶液制备方
法, 同法脂溶性部位制成 5 mL 溶液, 水溶性部位制
成 10 mL 溶液, 过 0145 Λm 的微孔滤膜, 取续滤液,
即得。
·021· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
A 2显色后紫外光 (366 nm ) 色谱　B2显色后可见光色谱　12对
照品 (从下至上, 丹参酚酸B、丹参素) 　2224# 四川中江产丹参
3223# 河南伊川产丹参　42“白化”丹参
A 2fluo rescen t (366 nm ) ch rom atogram befo re visualization　B2
visib le ch rom atogram after visualization　12con tro l from below
to above, salviano lic acid B, danshensu　2224# R ad ix S a lv ia
M iltiorrh iz a grow n in Zhongjiang Region of Sichuan P rovince　
3223# R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a grow n in Yichuan Region of
H enan P rovince　42‘w h itish’R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a
图 2　水溶性成分的薄层色谱图
F ig. 2　TLC Chromatogram of hydroph il ic con stituen ts
21212　对照品溶液的制备: 取二氢丹参酮、丹参酮É、隐丹参酮、丹参酮Ê A、丹酚酸 B、丹参素和原儿
茶醛对照品适量, 加甲醇制成含 011 m gömL 的溶
液, 即得。
21213　色谱条件: ZORBA X SB C 18 (250 mm ×4. 6
mm , 5 Λm ) 色谱柱。脂溶性部分: 流动相为A (甲
醇) - B (水) , 0 m in: 55% A ; 55 m in: 80% A。体积
流量 019 mL öm in, 柱温 30 ℃, 检测波长 270 nm ,
进样量 20 ΛL ; 记录时间为 70 m in。水溶性成分: 流
动相为 A (乙腈) - B (甲醇) - C (012% 磷酸) , 0
m in: 8% A、92% C; 25 m in: 43% B、57% C; 45
m in: 43% B、57% C; 60 m in: 65% B、35% C。体积
流量 018 mL öm in, 柱温 35 ℃, 检测波长 280 nm ,
进样量 10 ΛL , 记录时间为 65 m in。
21214　结果: 在脂溶性成分的色谱图中 (图 3) , 四川
中江和河南伊川的丹参药材在与对照品相应的保留
时间上出现相同的色谱峰, 属正常现象; 而“白化”丹
参药材在与对照品相应的位置仅检出痕量的色谱峰。
在水溶性供试品的色谱图中 (图 4) , 在与对照品相应
的保留时间上出现相同的色谱峰, 保留时间及紫外吸
收光谱均与对照品一致。且“白化”丹参供试品色谱与
丹参药材供试品色谱有极高的相似性, 说明水溶性部
分中酚酸类成分与正常丹参基本一致, 没有异常现象,
同样取样量的条件下, 与测试的正常丹参比较, 丹参酚
酸B 量略高。对丹酚酸B 进行的测定结果显示, 37 批
丹参药材中丹参酚酸B 的量为 (4184±1183) % , 1 批
“白化”丹参药材的测定结果为 5132%。
12二氢丹参酮　22丹参酮É 　32隐丹参酮　42丹参酮ÊA
A 2对照品　B224# 四川中江产丹参　C223# 河南伊川产丹参　
D 2“白化”丹参
12dyh idro tansh inone　22tansh inone É 　32cryp to tansh inone　
42tansh inone Ê A
A 2reference substance 　 B224 # R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a
grow n in Zhongjiang Region of Sichuan P rovince 　 C223 #
R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a grow n in Yichuan Region of H enan
P rovince　D 2‘w h itish’R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a
图 3　脂溶性成分的 HPLC 色谱图
F ig. 3　HPLC Chromatogram of l ipoph il ic con stituen ts
12丹参素　22原儿茶醛　32丹参酚酸B
A 2对照品　B224# 四川中江产丹参　C223# 河南伊川产丹参　
D 2“白化”丹参
12danshensu　22p ro tocatechualdehyde　32salviano lic acid B
A 2reference substance 　 B224 # R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a
grow n in Zhongjiang Region of Sichuan P rovince 　 C223 #
R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a grow n in Yichuan Region of H enan
P rovince　D 2‘w h itish’R ad ix S a lv ia M iltiorrh iz a
图 4　水溶性成分的 HPLC 色谱图
F ig. 4　HPLC Chromatogram of hydroph il ic con stituen ts
3　讨论
311　提取方法的考察: 丹参的两类主要有效成分的
极性相差很大, 因此为了全面反映丹参药材的质量
信息, 设计了两步提取法。根据文献报道[3, 4 ]和试验
比较, 最后采用醋酸乙酯提取二萜醌类成分, 药渣用
水提取酚酸类成分。液相色谱试验表明“白化”丹参
仅含有痕量的丹参酮类脂溶性成分。
312　展开剂及显色剂的选择: 丹参药材中的主要有
效成分为脂溶性的二萜醌类和水溶性丹酚酸类成
分。薄层鉴别及薄层扫描定量分析有很多报道[3, 4 ] ,
通过不同展开系统的筛选和比较, 确定丹参酮类采
用正己烷系统, 酚酸类采用氯仿2甲酸展开系统。通
过不同显色剂的比较, 确定脂溶性部位采用 10% 硫
·121·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
酸乙醇溶液, 水溶性部位采用 5% 香草醛浓硫酸溶液
作为显色剂。水溶性部位的薄层与液相色谱图谱相
比, 前者在特征表达和直观辨认等方面更具优势。
313　高效液相色谱条件的选择: 据文献报道[5～ 7 ]和
通过色谱条件的优化, 最后确定了本实验的流动相
条件, 即甲醇2水和乙腈2甲醇2012% 磷酸梯度洗脱。
通过对 6 个品牌色谱柱的比较, 最后选用了 Zo rbax
SB C 18色谱柱, 其分离效果相对较好。
314　“白化”丹参成因考察: 通过河南栾川“白化”丹
参与产自河南伊川、四川中江的丹参产地的土壤样
本分析, 生长“白化”丹参的地区的土壤中M g、Zn
元素量较高 (“白化”丹参 M g 512% , 伊川 M g
2. 7% , 四 川 中 江 M g 314% ; “白 化”丹 参 Zn
0. 02% , 其他两种不含有 Zn 元素) , 土壤的 pH 值
也较高 (“白化”7101, 伊川 6170, 四川中江 6145) ,
这是否是丹参“白化”的直接因素, 待进一步证实。丹
参的“白化”说明在特殊生长环境下具有邻醌结构的
丹参酮类成分的醌式很可能发生变化, 或者不能形
成邻醌, 因而不显红色, 文献报道, 邻醌结构是丹参
酮类成分的活性中心[8 ] , 由此推断丹参“白化”后对
功效肯定有直接影响。
315　“白化”丹参成分分析: TL C 图谱试验结果表
明,“白化”丹参的二萜醌类脂溶性有效成分量很低,
以致于主要的成分如丹参酮Ê A、隐丹参酮、二氢丹
酮等均难以检出, 所以根的表皮及断面均不见红色。
而酚酸类水溶性有效成分量较高, 与正常丹参样品
无异。这种野生丹参“白化”现象是值得野生变栽培
的 GA P 管理中注意的问题。
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丹参脂溶性成分的 ESI-M S 行为及其特征图谱研究
韩凤梅, 张　玲, 陈怀侠, 陈　勇Ξ
(湖北大学 中药生物技术省级重点实验室, 湖北 武汉　430062)
摘　要: 目的　研究脂溶性丹参酮类成分的 ES I2M S 规律, 建立丹参药材脂溶性丹参酮类成分提取物 ES I2ITM S
特征图谱。方法　应用电喷雾离子阱质谱 (ES I2ITM S) 技术研究丹参酮类成分的 ES I2M S 规律; 用 95% 乙醇超声
提取丹参药材中丹参酮类物质, 在正离子方式检测模式下, 直接进样应用一级全扫描质谱建立其特征 ES I2ITM S
图谱。结果　丹参酮类物质在 ES I2M S 一级正离子全扫描时, 易捕获一个质子形成分子离子, 且都易形成二聚体加
合 N a+ 离子峰; 分子离子在二级质谱中易发生脱水、脱羰基和A 环开环裂解。丹参药材中丹参酮类物质的 ES I2
ITM S 图谱重现性与特征性较好, 易于解析。结论　丹参脂溶性成分 ES I2ITM S 图可用于丹参药材及复方丹参中
丹参酮类成分的快速鉴别。
关键词: 丹参药材; 脂溶性成分; 电喷雾2质谱; 指纹图谱
中图分类号: R 28611　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2006) 01 0122 04
E IS-M S Performance and f ingerpr in t of l ipoph il ic con stituen ts
from R ad ix Sa lviae M iltior rh iza
HAN Feng2m ei, ZHAN G L ing, CH EN H uai2x ia, CH EN Yong
(H ubei P rovince Key L abo rato ry of B io2T echno logy of T radit ional Ch inese M edicine,
H ubeiU niversity, W uhan 430062, Ch ina)
·221· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005202210
基金项目: 科技部“十五”攻关项目 (2001BA 701A 01) ; 湖北省青年杰出人才科学基金项目 (2002A C004)3 通讯作者　陈　勇　TelöFax: (027) 88663590　E2m ail: cy101610@npc. gov. cn