全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·405．
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丹参有效部位对吗啡依赖性小鼠位置偏爱效应的影响
何方，余 涓，陈崇宏’
(福建医科大学药理学系，福建福州 350004)
摘 要：目的观察丹参脂溶性有效部位对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应的影响，并对丹参有效部位进行
初步鉴定。方法 隔天分别sc吗啡和生理盐水，共6d，引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应。在训练阶段sc
吗啡前30minip不同剂量的丹参脂溶性有效部位。建立反相高效液相色谱法(RP—HPLC)鉴定丹参脂溶性有效
部位的主要成分。结果 吗啡模型组小鼠在伴药箱停留时同明显延长，丹参脂溶性有效部位(40mg／kg)可使小鼠
在伴药箱停留时间显著缩短(尸<0．01)。经RP—HPLC法初步鉴定丹参脂溶性有效部位的主要成分为隐丹参酮。
结论丹参脂溶性有效部位(隐丹参酮)能在一定程度上抑制吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应的形成。
关键词：丹参，吗啡I条件性位置偏爱；隐丹参酮
中圈分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)03—0405—04
EffectofradixofSalviamiltiorrhizafractiononconditionedplacepreference
inmiceinducedbymorphine
HEFang，YUJuan，CHENChong—hong
(DepartmentofPharmacology，FujianMedicalUn versity，Fuzhou350004，China)
Abstraet：0bjectiveToinvestigatetheeffectoflipidsolublefractionntheradixofSalvia
miltiorrhiza(FSM)onconditionedplacepreference(CPP)inmiceinducedbymorphineandpreliminarily
identifythefractionintheradixofS．miltiorrhiza．MethodsMorp ineorNSwascinjectedeveryother
daytoinducetheobviousCPPinmicefor6d．Before30minofscinjectingmorphine．micewereP
administereddiff rentosesoflipidsolublefractionintheradixofS．miltiorrhiza．RP—HPLCmethodwas
usedtoidentifythemajorcomponentinthelipidsolublefractionintheradixofS．miltiorrhiza．Results
收稿日期：2006—10—23
基金项目：福建省自然科学基金资助项目(04A026)
作者简介：何方(198卜)，女，福建省福安市人，福建医科大学药理学系2003级硕士研究生，研究方向为神经药理．
*通讯作者 陈崇宏Tell13328697328E—mail：CCH@mail．fjmu．edu．cn
万方数据
·406· 中草|s ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
Thestayingtimeinmorphine—pairedwhitecompartmentwasignificantlyprolonged．Aftertreatmentwith
IipidsolublefractionintheradixofS．miltiorrhiza(40mg／kg，ip)，thestayingtimeinmorphine—paired
whitecompartmentwasignificantlyshortened(P<0．01)．Themajorcomponentinthelipidsoluble
fractionofS．miltiorrhizawasindentifedascryptotanshinone．ConclusionLipidsolublefractionnthe
radixofS． miltiorrhiza(cryptotanshinone)couldrestraintheacquisitionofCPPinmiceinducedby
morphinetoacertainextent．
Keywords：theradixofSalviamiltiorrhizaBunge；morphine；conditionedplacepreference(CPP)，
cryptotanshinone
阿片类药物长期使用会产生耐受和成瘾。在临
床治疗方面，对精神依赖及戒断期过后的强烈的不
可抑制的毒品心理渴求而导致的“复吸”，目前尚无
十分有效的方法。丹参是唇形科鼠尾草属植物丹参
SalviamiltiorrhizaBunge的干燥根及根茎。近年来
将传统中药丹参用于中药戒毒复方中，在脱毒及抗
稽延性戒断症状中均已在临床上获得较好的效
果[1]。国外的动物实验研究表明鼠尾草属植物可以
减轻吗啡引起的戒断症状[2]。本课题组在最近的研
究中也发现丹参提取物对吗啡依赖小鼠的戒断症状
有阻断作用，可拮抗小鼠吗啡身体依赖性的形成[3]。
本实验通过条件性位置偏爱(conditionedplace
preference，CPP)试验，观察丹参脂溶性有效部位
对吗啡引起小鼠精神依赖的影响，并对丹参有效部
位的主要成分进行了初步鉴定。通过探索中药丹参
戒毒的药理作用，并为解决戒毒后的“复吸”等问题
及开发低耐受性、多靶点作用、质量可控的新型抗依
赖药物奠定基础。
l材料
1．1 动物：雄性昆明种小鼠，体重18～22g，由福
建医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK
(闽)2004—0002。
1．2药品与试剂：丹参饮片，福建省回春药业公司
提供，经本校天然药物化学系鉴定为正品。盐酸吗啡
注射液，沈阳第一制药厂提供，批号011105。柱色谱
硅胶(100m200目)与薄层色谱硅胶G，青岛海洋
化工集团提供。分离提取丹参所用的试剂均为AR
级。丹参酮IA与隐丹参酮对照品由中国药品生物
制品检定所提供。甲醇为色谱纯，水为自制双蒸水。
1．3仪器：条件性位置偏爱箱仿文献方法制作“]，
箱体由两个正方体(15cm×15cm×15cm)组成，
中间有一可活动的隔板，将隔板抽起后，小鼠可在两
个箱体之问自由活动。箱体的一侧除玻璃面板外内
侧各面均漆成黑色，底面粗糙，另一侧除玻璃面外各
面均漆成白色，底板制成光滑面，整个实验箱具有视
觉和触觉两种线索。Agilent1100系列高效液相色
谱仪，Agilent自动进样器，AgilentDAD检测器，
veto8．01一Chemistation色谱工作站。
2方法
2．1丹参脂溶性有效部位的提取分离：丹参饮片粉
碎后，取100g用甲醇回流提取2次，每次2h。甲醇
提取液浓缩后得到浸膏25．43g。将浸膏用水溶解，
再分别用石油醚、乙醚进行萃取，浓缩后得到石油醚
提取物0．34g和乙醚提取物2．58g。乙醚提取物用
硅胶色谱柱，以石油醚一醋酸乙酯(90t 10075。
25)梯度洗脱。根据薄层色谱合并收集液得到3个
组分，浓缩烘干。经小鼠条件性位置偏爱实验筛选
后，确定洗脱出的第2组分(o．047g)为丹参抗吗
啡精神依赖的有效部位(fractionofSalvia
miltiorrhiza，FSM)。
2．2预处理：小鼠在动物房适应性饲养2d后，第
3天将位置偏爱箱箱体的隔板抽出，把小鼠逐只放
入箱体中间，观察15min，以小鼠的头部为准记录
小鼠在各箱体停留时间。观察过程在隔音条件下进
行。剔除对箱体某一侧有显著偏爱的小鼠，以排除非
条件性位置偏爱对实验结果的影响。结果显示，几乎
所有小鼠偏爱黑箱。因此，将白箱作为非偏爱侧。
2．3 FSM对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应
获得的影响：将达到实验条件的小鼠50只随机分
为生理盐水对照组、吗啡模型组(6mg／kg)及
FSM(10、20、40mg／kg)分别加吗啡(6mg／kg)
的3个给药组，共5组，每组10只。除对照组外，各
组小鼠隔天分别注射吗啡(第2、4、6天)和生理盐
水(第1、3、5天)，均采用背部SC给药。注射吗啡后
置于伴药箱白色箱体，注射生理盐水后置于另一侧
黑色箱体，时间均为30min。共训练6d，小鼠形成
条件性位置偏爱。给药组小鼠在每次SC吗啡前30
min，ip不同质量浓度FSM，生理盐水对照组与吗
啡模型组ip同体积的生理盐水。最后1次8C吗啡
后24h进行条件性位置偏爱试验，检测过程与预处
理阶段相同，记录小鼠在白箱中的停留时间。
2．4 RP—HPLC法鉴定FSM中的主要成分
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·407·
2．4．1色谱条件：依利特HypersilBDSC18色谱柱
(250mm×4．6mm，5pm)；流动相：甲醇一水(75l
25)I体积流量：I．0mL／min；进样量：10弘L；检测波
长：270nm，柱温：25℃。
2．4．2对照品溶液制备：精密称取对照品丹参酮
I^8．8mg和隐丹参酮2．2mg，用甲醇配成质量浓
度分别0．176、0．044mg／mL的混合对照品储备
液。精密吸取2．5mL，置10mL棕色量瓶中，加甲
醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0．044、
0．011mg／mL的混合对照品溶液。
2．4．3样品溶液：精密称取1．1mg样品，置于50
mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，超声震荡10
rain，摇匀，100 0r／min离心10min，取上清液作
为样品溶液。进样前经0．45pm微孔滤膜滤过。根
据色谱图保留时间进行对比定性。
2．5 统计学处理：实验数据以z土s表示，应用
SPSS11．0统计软件进行完全随机设计资料的单因
素方差分析。
3结果
3．1 FSM对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应
获得的影响：与对照组比较，吗啡模型组小鼠在白箱
中停留时间显著延长，说明小鼠产生了明显的位置
偏爱效应(P明显地拮抗小鼠吗啡位置偏爱效应，与吗啡模型组
比较，小鼠在白箱滞留时间显著缩短(P剂量FSM(20mg／kg)对小鼠吗啡位置偏爱效应
有较明显的影响(P也显著(Pkg)抑制小鼠吗啡位置偏爱效应获得的作用不稳定。
低剂量FSM(10mg／kg)与吗啡模型组相比，小鼠
在白箱停留时间无显著差异(P>o．05)。见表1。
裹I FsM对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应获得
的影响G+s，露=10) 。
Table1 EffectofFSMonacquisitionofCPPinmice
inducedbymorphine(善士j·露=10)
’
与对照组比较l。P<0．05一P<0．01
与模型组比较：。P<0．05。。P<0．01
。P<0．05。。P<0．01wcontrolgroup
。P<0．0544P<0．01wmodelgroup
3．2 FSM样品HPLC测定结果：分别取混合对照
品溶液lo止和样品溶液10pL，进样测定。色谱图
(图1)显示样品FSM的保留时间为12．704min，
分离良好。混合对照品中隐丹参酮的保留时间为
12．788min，丹参酮IA的保留时间为21．046min。
将样品与对照品的保留时间进行比对，可判断丹参
脂溶性有效部位FSM的主要成分是隐丹参酮。根
据标准曲线计算出丹参脂溶性有效部位FSM中隐
丹参酮的质量分数为85．11％。
丹参酮II．
1 ^
O 5 10 15 20 25
t／min
圈1隐丹参酮和丹参酮1^混合对照品(A)
和样品FSM(B)的HPLC图谱
。
Fig．1HPLCChromatogramsfe yptotanshinone
andtanshlnoneI^mixturereference
· substance(A)andFSMsample(B)
4讨论
条件性位置偏爱试验是由Katz和
Gormenzano于1979年提出的一种判定药物奖赏
效应的行为药理学实验[5]，近十几年来其方法逐步
完善，是评价药物精神依赖性的一种简单有效的方
法。本实验通过记录吗啡诱导小鼠在伴药箱的停留
时间来反应小鼠的精神依赖情况。结果表明高剂量
的丹参有效部位FSM(40mg／kg)能缩短小鼠在
白色伴药箱的停留时间，可在一定程度上抑制吗啡
诱导的条件性位置偏爱的形成。丹参脂溶性成分的
化合物种类有40多种，主要活性成分有丹参酮I、
丹参酮IA、隐丹参酮、二氢丹参酮I等[6]。通过样品
FSM与隐丹参酮和丹参酮IA混合对照品的RP—
HPLC图谱，将保留时间进行比对，可初步判断丹参
有效部位FSM的主要成分是隐丹参酮。
阿片类药物反复给药可使中枢神经元细胞内
Ca2+浓度显著升高。丹参具有钙拮抗作用，可抑制
万方数据
·408· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
Ca2+内流，减少胞内Ca2+浓度[7]，因而有可能通过
影响细胞内信号传导通路Ca2+_CaM—CaMK—CREB
以及Ca2+-NOS—NO—cGMP来参与依赖形成过程。
戒断后病人的焦虑烦躁症状和记忆是造成复吸的主
要原因，现代研究表明丹参能明显改善单侧颞叶缺
血性损害大鼠的空间认知能力障碍[8]。丹参改善记
忆和空间认知能力的作用，能增强对药瘾无关的记
忆，降低对药瘾的记忆，在理论上可以抑制吗啡的精
神依赖的形成。因此，推测丹参脂溶性成分中的隐丹
参酮对吗啡诱导的精神依赖有拮抗作用，是主要的
有效部位，为丹参及隐丹参酮用于干预阿片类药物
依赖行为提供了研究线索，为研究新型有效的戒毒
药应用于临床提供了理论基础。但其确切的作用机
制仍有待进一步深入研究。
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摘要：目的评价3种黄酮类同系化合物槲皮素及其单糖苷异槲皮素和双糖苷芦丁的体外抗自由基作用，进一
步研究其构效关系。方法采用H。O。／Fe抖体系，通过Fenton反应生成羟自由基(·OH)I采用邻苯三酚自氧化法
产生超氧阴离子(o：7)。利用·OH造成肝细胞脂质过氧化以及红细胞膜破裂，观察受试化合物的保护作用，并计
算IC。结果在以上4种体外模型中，3种药物均表现出极强的清除自由基能力。在·0H以及Oz7清除实验中，
抗氧化活性顺序为芦丁>异槲皮素>槲皮素；在抑制肝匀浆脂质过氧化及红细胞膜破裂实验中，抗氧化活性顺序
为槲皮素>异槲皮素>芦丁。结论3种受试黄酮类化合物均具有十分强大的自由基清除作用，且呈现明显的剂量
依赖性和糖基结构依赖性，在不同的实验体系中其抗自由基活性强弱顺序不同。
关键词：黄酮化合物，自由基，槲皮素，异槲皮素，芦丁
中图分类号：R286．75 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)03—0408一05
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JINYuel，LUYon91，HANGuo—zhul，SUNHui—junl，YUHong—shan2，JINFeng—xie2
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andBiologicalEngineering，DalianLightIndustrialCol ege，Dalian116034，China)
Abstract：ObjectiveToassessinvitroanti—freeadicalactivitiesofthreeflavonoids：quercetin，its
monoglycosideisoquercetin，andiglyeosiderutin，andfurtherinvestigatetheirstructure—effectr la—
tionship．MethodsHydroxylfreeradical(·OH)wasgeneratedusingH202／Fe2+systemviaFenton
收稿日期：2006—07-12
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30371744，30470055，20476017)
*通讯作者韩国柱Tell(0411)84720229E-mail：hgzhx2236@sina．com
万方数据
丹参有效部位对吗啡依赖性小鼠位置偏爱效应的影响
作者： 何方， 余涓， 陈崇宏， HE Fang， YU Juan， CHEN Chong-hong
作者单位： 福建医科大学,药理学系,福建,福州,350004
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