全 文 ：中革蟊chin髑cTraditionalandHerbalDrugs第38卷第10期200／年10月- 491·
高速逆流色谱法纯化曼地亚红豆杉枝叶提取物中紫杉醇
祝顺琴1，刘万宏“2，谈锋”
(1．西南大学生命科学学院，重庆400715}2．重庆科技学院生物系·重庆400042)
擅要：目的研究从紫杉醇授膏中分离紫杉醇的方法。方法利用高速逆流色谱技术，采用正己烷一醋酸己酯一甲
醇一水(4，5t3．5；5)为溶剂体系。结果经过高速逆流色谱一次纯化，紫杉醇的质量分数由5．1％上升到85．5％，
回收率达到98．6％。结论为制备高纯度紫杉醇提供了一条新途径。
关键词：曼地蚯红豆杉；紫杉醇；高速逆流也谱
中圈分类号；R284，2IR286．02 立督标识码：A 文章编号：OZS3—2670(2007)10—1491—02
Purificationof axolfromextractinbranchesandleavesofTaxusreed扭
byhigh-speedcounter—currentch omatography
ZHUShun．qinl，LIUWan—hon91”，TANFen91
(1．SchoolofLifeScience，SouthwestUniv rsity，Chongqing400715·China；2·DepartmentofBiology,
ChongqingUniversityotScienceandTechnology，Chongqing400042，China)
Keywords：TaxusmediaCV．Hicksii，taxol}high—speedcounter—currenth omalography(HSCCC)
紫杉醇能诱导和促进微管蛋白结合，从而阻止
癌细胞的增殖，对人的卵巢癌、乳腺癌、官颈癌，肺
癌、CNS癌、黑色素瘤、肝癌和白血病细胞系等有细
胞毒作用，是继阿霉隶和顺铂后最热点的抗癌药
物“脚，紫杉醇已成为国际医药市场上销售额最大的
抗肿瘤药物。目前分离紫杉醇一般采用多次柱色谱
分离，但有回收率低、生产成本高等劣势。高速逆流
色谱(hlgh-speedcounter—currentch omatography，
HSCCC)的流动相和固定相都是液体，这两种液体
是互不相溶的。利用螺旋桂在类似行星运动时产生
的离心力，使这互不相溶的两相溶剂系统不断混合，
保留在聚四氟乙烯管中的一相为固定相，得用恒流
泵连续输入的为流动相，随流动相进入螺旋柱的溶
质在两相之间反复分配，按分配系数的大小，被依次
洗脱，在流动相中分配比例大的先被洗脱出来。
HSCCC具有无不可逆吸附、高回收率、操作简便等
优点，现今越来越多的应用在天然产物的分离纯化
中。曼地亚红豆杉不仅树皮中含有紫杉醇，而且枝叶
中的量也高达0．017％～o．046％0口“]，是红豆杉树
皮的最佳替代资源。本实验利用高速逆流色谱从曼
地亚红豆杉枝叶提取物中纯化紫杉醇，不仅操作简
便，而且分离度好、回收率高、溶剂可以全部回收，降
低生产成本。
1仪器与材料
曼地亚红豆杉枝叶浸膏(自制，紫杉醇质量分数为
5．1％)，正己烷、醋酸乙酯、甲醇等均为分析纯，上海同
田生化TBA一300A(半制备型)高速逆流色谱仪。
2方法与结果
2．1 色谱条件：Beckman高教液相色谱系统；流动
相为甲醇．水(65；35)；体积流量：0．8mL／min；检测
波长：228am；色谱柱：大连依利特C18柱(250mlTl×
4．6mm，5pm)。
2．2溶剂系统的选择：溶剂系统的选择是高速逆流
色谱分离效果是关键的因素，选择溶剂系统的原则
是利用溶质的分配系数(K)，要求0．5
两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中质量
浓度之比。K一[Cs]／[Cm](Cs一溶质在固定相中的
质量浓度，Cm一溶剂在流动相中的质量浓度)。
以四元溶剂系统正己烷一醋酸乙酯一甲醇一水
(1=l：1，1)为基础．得出紫杉醇在溶剂系统中的
K一0．35，通过调节这4种溶剂的不同配比，用试管
法结合HPLC进行分析筛选溶剂系统，得到几种配
比符合K值达到0．5
作者简舟；曩嚣芎要劳矗未2’女36。5睾庚E-粱ma平it^trh’蓦志蠹嚣刍嚣笔≯究方向为生化髑并。
*通讯作者谈锋Tel：(023)68367091
万方数据
·1492· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第10期2007年10月
寰1鳘杉醇在不同溶剂系统的置值
Table1 Taxol置valuejndifferentsolventsystems
5l5·9I5
4l514l5
4I5I3．5‘5
4，5，3‘5
0．35(对照)
1．48
1．78
2．3高速逆流色谱制备：取曼地亚红豆杉枝叶浸膏
0．5g，溶解在20mL的做为固定相的下相溶剂中，
分别采用溶剂系统纯化，用N2010色谱工作站在线
监测，按色谱蜂收集馏分。用HPLC检测各馏分的
色谱峰，以紫杉醇对照品的峰面积做标准曲线，采用
外标法计算各馏分中紫杉醇的质量浓度。将馏分浓
缩，烘干至恒重，测定回收率(回收率=纯化前紫杉
醇总质量／纯化后紫杉醇的总质量×100％)和质量
分数(质量分数一样品中紫杉醇的质量／样品的总质
量×100％)。结果见表2。
裹2不同溶捐襄统的比较
Table2 ComparisonofdifferentsolventsDtems
可见4种溶剂系统均有较高的回收率，后两种
溶剂系统有较好的纯化效果。但是后者的出峰时间
要迟85rain，所以最优化溶剂条件为溶剂系统正己
烷一醋酸乙酯一甲醇一水(4t 5；3．5t 5)。浸膏经过一
次分离，经HPLC检测得到29．4mg蒙杉醇，回收
率为98．6％，质量分数为85．5“紫杉醇。分离图谱
见图1，HPLC图谱见图2。
3讨论
曼地亚红豆杉枝叶浸膏中紫杉醇质量分数为
5．1％，经过HSCCC一次分离，紫杉醇的质量分数
上升到85．5％，回收率达到98．6％。与HPLC相
比，HSCCC法进样量较大，最多可达数克，是HPLC
0 100 200 300 400 500 600
I／rain
围1浸膏中紫杉醇纯化的HSCCC圈谱
Fig，1HSCCChromatogramoftaxolpurifiedIn xtract
肖：护k引。吐咎爿蚤
“mi“
-一紫杉醇
·-taxol
圈2荣杉酵对照品(A)和浸膏纯化产品的HPLC田谱
Fig．2HPLCChromatogramoftaXO]rereren∞stlbstance
(A】andpurlfiedproductinextract(B)
的数百倍；与常压、低压色谱相比，HSCCC分离能力
强，有些样品经一次分离即得到一个甚至多个单体，
且分离时间短，一般数小时即可完成分离。HSCcc
是一种有潜力的工业化生产紫杉醇的方法。
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《中草药》杂志被评为“第五届中国百种杰出学术期刊”
2006年10月27日中国科学技术信息研究所公布了“第五届中国百种杰出学术期刊”名单，《中草药》杂
志获此殊荣——“第五届中国百种杰出学术期刊”。这个名单是按照期刊指标评价体系对重要指标(影响因
子、总被引频次、他引总引比、基金论文比和即年指标)进行打分的结果，并在近几年来召开了20余场专家研
讨会·对评价指标不断进行推敲和改进而评出的。
摘引自中国科学技术信息研究所《2005年度中国科技论文统计与分析年度研究报告》
万方数据
高速逆流色谱法纯化曼地亚红豆杉枝叶提取物中紫杉醇
作者： 祝顺琴， 刘万宏， 谈锋， ZHU Shun-qin， LIU Wan-hong， TAN Feng
作者单位： 祝顺琴,谈锋,ZHU Shun-qin,TAN Feng(西南大学生命科学学院,重庆,400715)， 刘万宏,LIU
Wan-hong(西南大学生命科学学院,重庆,400715;重庆科技学院生物系,重庆,400042)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(10)
被引用次数： 3次
参考文献(5条)
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