全 文 ：扁蒴藤素对紫杉醇耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用*
＊
谢闺娥1，杜晶春1，董桂兰2，徐 霞1＊＊
(1．广州医科大学 金域检验学院，广东 广州 510182;2．广州大学 门诊部，广东 广州 510006)
［摘 要］目的:研究扁蒴藤素对紫杉醇耐药乳腺癌细胞 MCF-7 /TAX 生长的作用。方法:以乳腺癌细胞株
MCF-7 为对照，同时制作紫杉醇耐药乳腺癌细胞 MCF-7 /TAX;在两组细胞中分别给与 7 种浓度(0. 25、0. 5、1、
2. 5、5、10 和 20 μmol /L)扁蒴藤素或紫杉醇培养 48 h，用 MTT 法检测药物对 MCF-7 和 MCF-7 /TAX 细胞作用的
半数抑制浓度(IC50)值，并计算 MCF-7 /TAX 细胞对紫杉醇或扁蒴藤素的耐药指数(ＲI);同时用 Annexin V-
FITC /PI染色观察扁蒴藤素作用后 MCF-7 /TAX凋亡细胞比例。结果:MCF-7 /TAX 对紫杉醇 ＲI 达 19. 39，而扁
蒴藤素对 MCF-7 /TAX 细胞的生长有高效抑制作用，且呈现明显的剂量依赖性，对其作用 48 h 的 IC50为
0. 52 μmol /L，MCF-7 /TAX对扁蒴藤素的 ＲI仅为 0. 88;扁蒴藤素作用后，Annexin V 染色阳性的 MCF-7 /TAX 细
胞比例较对照明显升高。结论:扁蒴藤素能抵抗紫杉醇耐药乳腺癌细胞的耐药性，激活 MCF-7 /TAX细胞凋亡，
对其生长发挥高效抑制作用。
［关键词］紫杉醇耐药;扁蒴藤素;MCF-7 /TAX;凋亡
［中图分类号］Ｒ285 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707(2016)09-1029-04
DOI:10． 19367 / j． cnki． 1000-2707． 2016． 09． 009
Inhibitory Effect of Pristimerin on Growth of
Taxol-Ｒesistant Breast Cancer Cells
XIE Guie1，DU Jingchun1，DONG Guilan2，XU Xia1
(1． Kingmed School of Laboratory Medicine，Guangzhou Medical University，Guangzhou 510182，Guangdong，China;
2． Outpatient Department，Guangzhou University，Guangzhou 510006，Guangdong，China)
［Abstract］Objective:To investigate the effect of pristimerin on the growth of taxol-resistant breast
cancer cells MCF-7 /TAX． Methods:The breast cancer cell line MCF-7 was the control group，and
the taxol-resistant breast cancer cells line MCF-7 /TAX was the observation group． In two groups of
cells were cultured in 7 kinds of concentrations (0． 25，0． 5，1，2． 5，5，10 and 20 mol /L)pristime-
rin and paclitaxel for 48 h． MTT assay was used to detect half inhibition concentration (IC50)value of
drug on MCF-7 and MCF-7 / tax cells，and resistance index (ＲI)of cells to paclitaxel or pristimerin
were calculated． At the same time Annexin V-FITC /PI staining was adopted to observe changes of pro-
portion of apoptotic cells after pristimerin involvement． Ｒesults:The resistance index of MCF-7 /TAX
cells to paclitaxel was 19． 39． After treatment with pristimerin for 48 h，MCF-7 /TAX cells displayed
markedly growth inhibition in a dose-dependent manner，and IC50 for 48 h was 0． 52 μM． The resist-
ance index of MCF-7 /TAX cells to pristimerin was 0． 88． After treatment with pristimerin，the propor-
tion of positive MCF-7 /TAX cells of Annexin V-FITC /PI staining was significantly higher than that of
the control group． Conclusion:Pristimerin can resist resistance to paclitaxel resistance to breast canc-
er cells，activate apoptosis of MCF-7 /TAX cells，thus effectively inhibit cancer cells growth．
［Key words］ taxol resistance;pristimerin;MCF-7 /TAX;apoptosis
9201
第 41 卷 第 9 期
2016 年 9 月
贵 州 医 科 大 学 学 报
JOUＲNAL OF GUIZHOU MEDICAL UNIVEＲSITY
Vol． 41 No． 9
2016． 9
* *［基金项目］国家自然科学基金(81101682);广东省公益研究与能力建设专项资金(2014A020212015)
＊＊通信作者 E-mail:xux2014@ 126． com
网络出版时间:2016 － 09 － 13 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /52． 5012． Ｒ． 20160913． 2240． 012． html
南蛇藤卫矛科南蛇藤属植物，在我国广泛分
布。现已从南蛇藤中提取出大量萜类、生物碱、黄
酮类化合物，三萜类化合物主要存在于南蛇藤的根
皮中，研究表明，其中的扁蒴藤素(Pristimerin)具有
广谱抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理活性［1 － 7］。
紫杉醇广泛应用于包括乳腺癌在内的多种恶性肿
瘤的治疗，然而肿瘤对紫杉醇的耐药性严重影响了
治疗效果［8 － 9］。本文以紫杉醇耐药乳腺癌细胞株
MCF-7 /TAX为模型，研究扁蒴藤素对紫杉醇耐药
乳腺癌细胞株 MCF-7 /TAX 生长的作用，为探索抵
抗紫杉醇耐药性的肿瘤高效化疗药物提供实验依
据。
1 材料和方法
1． 1 主要材料与试剂
人乳腺癌 MCF-7 细胞系购自美国模式培养物
保藏所(american type culture collection，ATCC)，
MCF-7 紫杉醇耐药细胞株(MCF-7 / taxol-resistant，
MCF-7 /TAX)购自广州吉尼欧生物科技有限公司，
扁蒴藤素、紫杉醇、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，
DMSO)、碘化丙啶 (propidium iodide，PI)购自美国
Sigma公司，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)为
美国 Hyclone公司产品，DMEM 培养基、胰蛋白酶、
青霉素 －链霉素混合溶液及 Hepes 为美国 Gibco
公司产品，MTT 购自美国 Genview 公司，细胞培养
板为美国 Corning 公司产品，Annexin V-FITC 细胞
凋亡检测试剂盒购自美国 Ｒoche公司，其他试剂均
为进口或国产分析纯试剂。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 细胞培养 MCF-7 细胞培养于含 10%
FBS、100 000 IU /L 青霉素和 100 mg /L 链霉素的
DMEM 完全培养基中，紫杉醇耐药乳腺癌细胞
MCF-7 /TAX培养于含 1. 0 μmol /L 紫杉醇的上述
培养基中以维持其耐药表型;传代时用含 0. 02%
EDTA的 0. 05%胰酶消化，以 DMEM 完全培养基
终止消化。
1. 2. 2 MTT比色法 取传代培养 24 h 后增长迅
速、处于对数生长期的细胞，用胰酶消化，制成单细
胞悬液，调整细胞浓度为 5 × 107 /L;每孔种200 μL
细胞悬液于 96 孔培养板内，将培养板置37 ℃、5%
CO2 饱和湿度孵箱内培养;24 h后，取出培养板，吸
去旧培养液，加入不同浓度的扁蒴藤素(设 7 个浓
度:0. 25、0. 5、1、2. 5、5、10 和20 μmol /L)或不同浓
度的紫杉醇(设 7 个浓度:0. 25、0. 5、1、2. 5、5、10
和 20 μmol /L)，同时设立对照组，每组均设 3 个平
行孔，置 37 ℃、5% CO2 饱和湿度孵箱内培养;48 h
后取出 96 孔板，在超净工作台内每孔加 MTT(5 g /
L)20 μL，培养箱内继续培养 4 h;取出培养板，在
倒置相差显微镜下观察细胞内 MTT与线粒体酶反
应后生成的蓝紫色结晶物;用注射器小心吸弃培养
基，加入 100 μL DMSO置摇床上低速振荡 10 min，
使结晶物充分溶解;用酶联免疫检测仪在 570 nm
波长处测定其吸光度(OD)值，计算生长抑制率:抑
制率% = ［(1 － OD加药组)/OD对照组］× 100%，并参
照文献［9］用 Bliss’s 软件计算半数抑制浓度(half
maximal inhibitory concentration，IC50)值。耐药指
数(resistance index，ＲI)=耐药细胞 IC50 /亲本细胞
IC50。
1. 2. 3 Annexin V-FITC /PI 染色 取对数生长期
的人乳腺癌细胞 MCF-7 /TAX 接种于培养皿内，置
37 ℃、5% CO2 孵箱中培养过夜;加入终浓度为
1. 0 μmol /L的扁蒴藤素，8 h 后用不含 EDTA 的胰
蛋白酶将细胞从培养皿消化下来，制成单细胞悬
液，PBS洗涤细胞 2 次;用 1 × binding buffer悬浮细
胞至 1 × 109 个 /L，取 100 μL 细胞悬液加入 5 μL
Annexin V-FITC 和 10 μL PI，混匀，室温避光反应
15 min;然后再加入 400 μL 1 × binding buffer 充分
混合后在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况。
1. 3 统计学方法
数据采用 SPSS 19． 0 软件处理，计数资料用百
分比(%)表示，数据比较采用 χ2 检验，计量资料采
用均数 ±标准差(x ± s)表示，数据比较采用 t 检
验，P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 MCF-7 /TAX对紫杉醇的耐药情况
MTT结果显示(图 1A)，紫杉醇对 MCF-7 作用
48 h的 IC50为 1. 07 μmol /L，对紫杉醇耐药细胞株
MCF-7 /TAX作用 48 h 的 IC50为 20. 75 μmol /L，ＲI
达 19. 39(表 1)。
2. 2 扁蒴藤素对 MCF-7 /TAX的生长抑制情况
MTT结果显示(图 1B)，扁蒴藤素能抑制紫杉
醇耐药细胞 MCF-7 /TAX 的生长，且具有明显的剂
量依赖性，作用 48 h 的 IC50仅为 0. 52 μmol /L，对
MCF-7 作用 48 h 的 IC50为 0. 59 μmol /L，MCF-7 /
TAX对扁蒴藤素的 ＲI仅为 0. 88(表 1)。
0301
贵 州 医 科 大 学 学 报 41 卷
表 1 扁蒴藤素及紫杉醇对 MCF-7 /TAX
和 MCF-7 细胞的 IC50及 ＲI
Tab． 1 IC50 values and ＲI of pristimerin
and paclitaxel on MCF-7 /TAX cells
and their parental MCF-7 cells
细胞系
紫杉醇
IC50(μmol /L) ＲI
扁蒴藤素
IC50(μmol /L) ＲI
MCF-7 1. 07 － 0. 59 －
MCF-7 /TAX 20. 75 19. 39 0. 52 0. 88
2. 3 扁蒴藤素诱导 MCF-7 /TAX细胞凋亡
Annexin V-FITC /PI 双染法结果显示，MCF-7 /
TAX 不加扁蒴藤素的细胞凋亡率为 0. 8%，加
1. 0 μmol /L扁蒴藤素作用 8 h 后的细胞凋亡率达
28. 9%，凋亡细胞的比例明显升高，差异有统计学
意义(P ＜ 0. 05)，见图 2。
3 讨论
肿瘤细胞对多种化学药物产生交叉耐药性，称
注:A为紫杉醇，B为扁蒴藤素;(1)与 MCF-7 /TAX +紫杉醇比较，P ＜ 0． 05
图 1 MCF-7 /TAX细胞对紫杉醇和扁蒴藤素耐药情况(MTT法)
Fig． 1 The resistance situation of MCF-7 /TAX cells to paclitaxel by MTT assay
注:A为对照，B为 1. 0 μmol /L扁蒴藤素;横坐标为 Annexin-V，纵坐标为 PI
图 2 扁蒴藤素对 MCF-7 /TAX细胞凋亡的影响(Annexin V-FITC /PI)
Fig． 2 Effect of pristimerin on apoptosis of MCF-7 /TAX cells (Annexin V-FITC /PI staining)
多药耐药(multidrug resistance，MDＲ)，是造成肿瘤
化疗失败的主要原因［10］。由于传统的抗癌药在化
疗过程中都往往会导致多药耐药的产生，因此开发
一些新的能够对多药耐药的肿瘤细胞也敏感的抗
癌药物是当务之急。扁蒴藤素是雷公藤红素的甲
酯衍生物，主要存在于卫矛科和希藤科植物中。随
着研究范围不断扩大，扁蒴藤素的多种药理活性逐
渐被人们关注和研究，研究表明扁蒴藤素具有抗
1301
9 期 谢闺娥等 扁蒴藤素对紫杉醇耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用
炎、抗氧化等多种药理活性，并具有广谱抗肿瘤作
用［1 － 7］。据报道，给药 6 h 后，3 μmol /L 的扁蒴藤
素可抑制 81%人乳腺癌细胞 MDA-MB-231 的生
长［11］。但有关于扁蒴藤素研究的报道还很有限，
其对紫杉醇耐药乳腺癌细胞的作用尚未明确。
本文对扁蒴藤素对紫杉醇耐药细胞株 MCF-7 /
TAX生长的影响进行了探讨。MTT 比色结果显
示，紫杉醇耐药细胞株 MCF-7 /TAX 对紫杉醇的耐
药指数达 19. 39;而扁蒴藤素作用 MCF-7 /TAX 细
胞 48 hr的 IC50仅为 0. 52 μmol /L，降低其耐药指数
至 0. 88，说明扁蒴藤素能抵抗紫杉醇耐药乳腺癌
细胞的耐药性，对其生长发挥高效抑制作用。凋亡
是一种生理性、程序性的细胞死亡过程，细胞凋亡
异常是肿瘤发生与发展的关键因素之一。MDＲ产
生的机制非常复杂，研究表明凋亡逃逸(细胞抗凋
亡能力提高)也是其重要机制之一。激发和恢复
肿瘤细胞发生凋亡的能力，是肿瘤防治的有效途
径［12］。本研究 Annexin V-FITC /PI染色结果表明，
经扁蒴藤素作用后，Annexin V-FITC 染色阳性的
MCF-7 /TAX细胞比例升高，表明扁蒴藤素能诱导
紫杉醇耐药 MCF-7 /TAX细胞凋亡的发生。
本研究结果证实，扁蒴藤素能抵抗紫杉醇耐药
乳腺癌细胞的耐药性，激活 MCF-7 /TAX 细胞凋
亡，从而对其生长发挥高效抑制作用，这将为开发
治疗紫杉醇耐药的新药提供实验依据。
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(2016－03－25 收稿，2016－07－31 修回)
中文编辑:刘 平;英文编辑:刘 华
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