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Antianaphylaxis effect of alcohol extract of stir-baked Fructus Perillae on anaphylaxis model mice and its mechanism

炒紫苏子醇提取物对过敏模型小鼠的抗过敏作用及机制



全 文 :·1532· 中草药 ChineSeTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月
表1 黄芩苷单独给药组和头孢拉定与黄芩苷合并给药组
主要药动学参数比较(工士S,n一6)
TableI Comparisonofpharmacokineticpar meters
betweenindividualadministrationgroupof
baicalinandcombinationdministrationgroup
ofbaicalinw thCefradine(;士S,n一6)
与黄芩苷单独给药组比较:。P<0.05
+P3讨论
本实验采用高灵敏度的HPLC—ECD方法测定
了头孢拉定与黄芩苷合并给药组和黄芩苷单独给药
组黄芩苷在大鼠体内的血药浓度。结果表明头孢拉
定与黄芩苷合并给药时,黄芩苷在13h达到血药浓
度高峰,且其c。。。明显低于黄芩苷单独给药组,没有
由肝肠循环引起的第2个血药浓度高峰,说明抗生
素抑制了微生物水解黄芩苷的活性,阻断了肝肠循
环。从药动学参数中还可以看到,头孢拉定与黄芩苷
合并给药组和黄芩苷单独给药组的C。。。AUC㈣差
异显著(P的体内吸收有明显的抑制作用,在临床上应尽量避
免两种药物的合用。
像黄芩苷这样,药物有效成分的代谢与肠道菌
群有着密切关系的药物,在中药中还有很多,如甘草
甜素‘“、芍药苷‘引、人参皂苷‘6‘、番泻苷、芦荟苷‘78]
等,它们大多数被肠道菌群代谢后,产生具有较强药
理活性的代谢产物。尤其是具有水溶性的葡萄糖苷
成分,这类化合物在肠道内一般难以吸收,生物利用
度低,由于在肠内滞留时间较长而易受到肠道菌群
的水解,是“天然前体药物”。在中药中含有大量的苷
类化合物,这种“天然前体药物”的制剂与抗生素类
药物在临床上并用,很有可能影响前体药物在体内
的代谢,从而影响中药药效的正常发挥。临床应用上
应引起注意。
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炒紫苏子醇提取物对过敏模型小鼠的抗过敏作用及机制
王钦富1’2,王永奇”,于 超2,张巍峨2,蒋 革2,冯宝民2,施广霞1
(1.大连医科大学,辽宁大连116023;2.大连大学生物工程学院,辽宁大连116622)
摘 要:目的 观察炒紫苏子醇提取物对过敏模型小鼠血清总IgE水平和特异IgE水平的影响。方法采用
ELISA法测定卵白蛋白(OVA)致敏小鼠血清总lgE水平;采用大鼠异种被动皮肤过敏反应测定特异IgE水平;
采用小鼠主动皮肤过敏反应——耳肿胀试验和小鼠主动全身过敏反应研究炒紫苏子醇提取物的抗过敏作用。结果
炒紫苏子醇提取物0.32、0.64、1.28g/kg各剂量组能明显降低小鼠血清总IgE水平(P<0.05、0.01),并呈剂量
依赖关系,也明显降低小鼠特异IgE水平(尸色苷酸钠(P收稿日期:2006—02—22
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30171140)
作者简介:王钦富(一),男,教授,大连医科大学病理生理专业博士,主要从事免疫药理学研究。E—mail:qinfuwang@126.eom
*通讯作者王永奇Tel:(0411)87402310Fax:(0411)87403963
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月·1533·
耳肿胀(尸低,小鼠存活时间明显延长,其中1.28g/kg剂量组和木犀草素组死亡率最低,存活时间最长。结论炒紫苏子醇
提取物通过明显降低小鼠血清总IgE和特异IgE水平,发挥抗过敏作用。
关键词:炒紫苏子;抗过敏;IgE
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)10—1532—04
Antianaphylaxiseffectofalcoholextractofstir—bakedFructusPerillae
onanaphylaxismodelmiceanditsmechanism
WANGQin—ful’2,WANGYong—qi2,YUCha02,ZHANGWei—e2,
JIANGGe2,FENGBao—min2,SHIGuang—xial
(1.DalianMedicalUniversity,Dalian116023,China;2.CollegeofBi engin ering,
DalianU iversity,Dalian116622,China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheinhibitionofalcoholextractofstir—bakedFructusPerillaeon
totalndspecificIgElevelsintheserumofanaphylaxismicemodel.MethodsT etotalIgElevelin
serumof icesensitizedbyOVAwasassayedbyELISAandthespecificIgElevelwasevaluatedbyrat
heterologouspassivecutaneousanaphylaxis;mouseactivec taneousanaphylaxisandactivesystemic
anaphylaxiswerealsoappliedtostudytheanti—allergicffects.ResultsAlcoholextractofstir—baked
FructusPerillae0.32,0.64,and1.28g/kgreducedtotalIgElevel(P<0.05,0.01)andspecificIgElevel
(PspecificIgEthanthepositivecontrol—disodiumcromoglycategroup(P<0.01);sameasluteolininactive
cutaneousanaphylaxistest0fmicealcoholextractofstir—bakedFructusPerillae0.32,0.64,and1.28g/
kginhibitedsignificantlymouseearedema(Ptest,thealcoholextractofstir—bakedFrttctztsPerillaereducedthemortalityofmiceinducedbv0VAand
prolongedthsurvivaltime;amongthemthemortalityofmiceisthelowestandthesurvivaltimeisthe
longestin1.28g/kgalcoholextractofstir—bakedFructusPerillaeandluteolingroups.ConclusionThe
alcoholextractofstir—bakedFructusPerillaec nreducebothtotalndspecificIgElevelsin erumof ice
andhavepotentialantiallergiceffects.
Keywords:stir—bakedFructusPerillae;antianaphylaxis;IgE
紫苏Perillafrutescens(L.)Britton系唇形科
植物,是全国广泛栽培的经济植物,资源非常丰富。
紫苏子,又称苏子,是紫苏的干燥成熟果实,为《中国
药典》所收载。具有降气消痰、平喘、润肠之功能。用
于痰壅气逆、咳嗽气喘、肠燥便秘。在对紫苏子研究
过程中,发现紫苏子和炒紫苏子都有多元酚类物质,
而且炒紫苏子无论活性,还是所含的量都明显高于
紫苏子,表现出明显的抗过敏作用。本实验研究炒紫
苏子醇提取物对过敏模型小鼠血清IgE水平的抑
制作用,为研究炒紫苏子醇提取物的抗过敏作用的
可能机制提供实验依据。
1材料与方法
1.1 实验动物:昆明种小鼠,雌雄各半,体重18~
22g,大连大学实验动物中心提供;SD大鼠,雄性,
(200士28)g,大连医科大学动物实验中心提供(Ⅱ
级,SCXK2002—2002)。
1.2药材:紫苏子购自河南省,由大连市药品检验
所鉴定。
1.3试剂:木犀草素,Sigma产品;色苷酸钠
(SigmaC一0399);卵白蛋白(OVA),SigmaA5253。
伊文思蓝,Fluka,批号011114;白百破疫苗,大连
市沙河口区防疫站惠赠;氢氧化铝凝胶,吉林省生物
制品厂生产,批号20010430,中国农业科学院左家
特产研究所惠赠。小鼠IgE试剂盒,MARKET
INC.(美国)产品
1.4仪器:StateFax一2100酶标分析仪。
1.5方法
1.5.1炒紫苏子醇提取物制备:炒紫苏子经粉碎
后,分别以8、6、4倍量石油醚(沸点60~90℃)常
温下浸泡脱脂3次,每次24h。残渣晾干无醚味后,
分别以8、6、4倍量工业乙醇加热回流提取3次,每
次1.5h,合并提取液浓缩得醇提取物,含多元醇>
8%(Folin—D方法)。
1.5.2小鼠血清总IgE测定:小鼠随机分为5组,
雌雄各半,分别为炒紫苏子醇提取物1.28、0.64、
0.32g/kg组和模型组、正常组。小鼠每天ig给药l
万方数据
·1534· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第10期2006年10月。
次,连续21d,炒紫苏子醇提取物各组按0.2mE/
10g给药;模型组及正常组ig等量无菌蒸馏水。动
物致敏:除正常组外,其他4组在给药前1d及给药
第5天2次ip200弘gOVA和8mgA1(OH)。凝胶,
在给药前1d ipo.2mL白百破疫苗(含百日咳杆
菌1×109个),致敏时间为3周。摘眼球取血,分离
血清。小鼠血清总IgE测定:按试剂盒方法操作。
1.5.3小鼠血清特异IgE测定——大鼠异种被动
皮肤过敏反应[1~4]:小鼠随机分为6组,分别为炒紫
苏子醇提取物1.28、0.64、0.32g/kg组和模型组、
色苷酸钠(0.1g/kg)阳性对照组及木犀草素
(O.03mg)组。动物给药和致敏方法同上。小鼠摘眼
球取血,分离血清,倍比稀释为l:1、1:2、1:4、
1:8、1:16、1:32、1:64后备用。
取健康雄性SD大鼠(180~220g),乙醚麻醉,
背部剪毛,SC不同稀释度小鼠血清,每点0.02mL。
被动致敏72h后进行抗原攻击,尾iv1mL1%伊
文思蓝溶液5mg/mLOVA—PBS。1h后断头处死
动物,翻转背部皮肤,以引起直径5mm以上蓝斑的
血清最高稀释度作为判定终点,即效价。
1.5.4小鼠主动皮肤过敏反应——耳肿胀试验口]:
雄性小鼠随机分为6组,分别为炒紫苏子醇提取物
1.28、0.64、0.32g/kg组和模型组、色苷酸钠(o.1
g/kg)阳性对照组及木犀草素(o.03mg)组。动物
给药和致敏方法同上。耳肿胀试验:在左耳SC20ttL
生理盐水(含50弘gOVA),右耳SC20弘L生理盐
水。20min后测量双耳厚度,计算出厚度差(肿胀
度),求出肿胀抑制率。
1.5.5小鼠主动全身过敏反应[6]:雄性小鼠随机分
为6组,分别为炒紫苏子醇提取物1.28、0.64、0.32
g/kg组和模型组、色苷酸钠(o.1g/kg)阳性对照
组及木犀革素(O.03mg)组。动物给药和致敏方法
同上。小鼠主动全身过敏反应:尾iv含10mgOVA
的100扯LPBS,观察死亡率和存活时间。
1.5.6数据分析:采用SPSS统计软件进行卡方检验。
2 结果
2.1小鼠血清总IgE测定:结果见表1。模型组总
IgE水平明显升高(P<0.05),炒紫苏子醇提取物
能明显降低总IgE水平(P<0.05、0.01),并呈剂
量依赖关系。
2.2小鼠血清特异IgE测定——大鼠异种被动皮
肤过敏反应结果:见表2。炒紫苏子醇提取物各剂量
能明显降低小鼠血清特异IgE水平(P<0.05,
0.01),色苷酸钠也能明显降低小鼠特异lgE水平
(P<0.05);炒紫苏子醇提取物1.28g/kg抑制小
鼠特异lgE水平的作用强于色苷酸钠,单体成分木
犀草素明显抑制小鼠特异IgE水平(P2.3 小鼠主动皮肤过敏反应——耳肿胀试验:结果
见表3。炒紫苏子醇提取物各剂量明显抑制小鼠耳
肿胀(P<0.05、0.01),单体成分木犀草素也明显抑
制小鼠耳肿胀(P<0.01)。
表l 小鼠血清中总IgE水平测定结果(工土s)
TableDeterminationoftotalIgElevel
inserumof ice(;士s)
与模型组比较:。P。P1IU/mL=2.4ng/mL[7]
表2小鼠血清中特异lgE测定结果(x士s)
Table2 DeterminationofspecificIgElevel
inserumof ice(;士s)
与模型组比较:。P与色苷酸钠组比较:△P’PAP表3小鼠耳肿胀试验结果
Table3 Resultofearedematestinmice
与模型组比较:。P。P2.4小鼠主动全身过敏试验结果:见表4。炒紫苏子
醇提取物各组小鼠OVA攻击死亡率明显降低,小鼠
存活时间明显延长,其中1.28g/kg组和木犀草素组
死亡率最低,存活时间最长,作用好于色苷酸钠。
3讨论
过敏模型小鼠血清总IgE水平较正常组高,差
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrug;第37卷第10期2006年10月· 535·
表4.小鼠主动全身过敏反应结果
Table4 Resultofactivesystemicanaphylaxisassayinmice
与模型组比较:’P。P<0.05一P<0.01VSmodelgroup;Ap<0.05△△P<0.01USdisodiumcromoglycategroup
异非常显著。血液中IgE水平是过敏性体质的基 References:
础,抑制或降低体内IgE水平是防治I型超敏反应 EliFabienneA,AnnleGC,FlorenceA,甜al·Transcutaneous
性疾病的关键嘲。目前西医有两种消除IgE的方法,:竺乏£。愁,ch。ole。r。a。兰=兰li兰::竺::竺f蒜i
一种是免疫吸附剂(基因重组的杂交分子),另一种 i。。。。eresponsesEJ3.JImmuno,,2003,170:1586—1592.
是单克隆抗体,但目前均未正式应用于临床。 EzlPiresRR,OshiroTM,ltamiDM,etal·Productionand
炒紫苏子醇提取物具有很好的抗过敏作用啪, 曲“”t..erizatio“of
8
monoc⋯lon“.antibod.y89.ain趴“m。“5
小鼠主动皮肤过敏反应结果表明,炒紫苏子醇提取 34(8):1033-1036.
物各剂量明显抑制小鼠耳肿胀;主动全身过敏反应 [3]Faquim—MauroEL,‘CoffmanRL,AbrahamsohnI A,eta1.
结果表明,炒紫苏子醇提取物各剂量组小鼠OVA ‰Ⅲ“g酬8e:⋯”。18∽““bodi””“pn5。“vo
攻击死亡率明显降低,/J,鼠存活时间明显延长,其中 IL-4andli_12[J].jj,。。。。“,1999,163:3。572。-3576.。
1.28g/kg剂量组和木犀草素组死亡率最低,存活 E41PortelaCDP,Tib6rioI FLC,I.eick—MaldonadoE A,el
时间最长。 口l-Effect8ofdiazepamandstressonlunginflammatory
炒紫苏子醇提取物的抗过敏作用方式之一就是乏;瓮三品Z乏:≥篡并i。曼矗烹JP协如2L“增
通过降低机体的IgE,减轻或避免超敏反应的发生。 [53DaheshiaM,FriendDS,GrusbyMJ,et以Increased
本实验结果表明炒紫苏子醇提取物各剂量能明显降 ””“‘Y oflocaland⋯Y把“。”8phyIan”reactionsin
低总IgE水平,并呈剂量依赖关系,也明显降低小 :p。4.9B卜删kk呲miceI-j].,E。9胁d,2001,194‘2’:227一
鼠血清特异IgE水平,1.28g/kg剂量抑制小鼠特 [6]wakayamaH,HasegawaY,K wabeH州吐IgG-mediated
异IgE水平好于阳性对照色苷酸钠;其降低IgE水 anaphylaxisViaFcreceptorinCD40一deficientmic [J]·Cli”
平的机制可能是炒紫苏子醇提取物能纠正Thl/ [,]兰关_嵩2冀乏。1苫嚣::s:=黑sA,甜以Do。。一
Th2失衡向Th2耀移(待发表)。 regulationofhumanbasophilIgEandFC£RIasurface
紫苏子抗过敏的有效部位(多元酚类)是存在densitiesandmediatorreleasebyanti—IgE—infusionsis
于乙醇提取物的醋酸乙酯可溶部分中,其有效成分 =翼!曼抽础”“¨”“”[J]·J‰⋯”厶1999’162:
是以木犀草素为代表的4种酚类化合物。Ueda认为[83G。YF,Zh。。2x M.Studi。。o。。hi。。。。。。。di。i。。i。
木犀草素是紫苏抗炎、抗过敏的主要成分,在分离出loweringlgEintypeI hypersensitivityreactiondiseases[J].
的木犀草素、迷迭香酸和咖啡酸中,只有木犀草素表 C。⋯hinJ⋯Bas,、Me,d。7冀疥圮“”胁d‘中国中医基础医学杂志’,
现出体内抑制TNF一。c产生,抑制耳肿胀和变态反 [9]W。。gQF,w。。gYQ,Y。C,以。1.Anti一。llergi。ph。丌n。一
应性水肿[1⋯,其作用机制是通过抑制5一LO和12一 ceuticeffectsofEtOHext.ofrostedpenllaseed[j].US
LO,而抑制白三烯B4、C4、D4、E4的产生。本实验结,、c6抽Int,Bethun.eMed,2005’.3‘2’:30一35‘
果表明炒紫苏子醇提取物通过明显降低总IgE和 i。fl。。。。t。,y。。d。。ti-all。,gi。。。tit。。。tof P。,iz肠
特异IgE水平发挥抗过敏作用。 frutescens[J].BiolPharmul ,2002,25(9):1197—1202.
万方数据
炒紫苏子醇提取物对过敏模型小鼠的抗过敏作用及机制
作者: 王钦富, 王永奇, 于超, 张巍峨, 蒋革, 冯宝民, 施广霞, WANG Qin-fu, WANG
Yong-qi, YU Chao, ZHANG Weie, JIANG Ge, FENG Bao-min, SHI Guang-xia
作者单位: 王钦富,WANG Qin-fu(大连医科大学,辽宁,大连,116023;大连大学生物工程学院,辽宁,大连
,116622), 王永奇,于超,张巍峨,蒋革,冯宝民,WANG Yong-qi,YU Chao,ZHANG Weie,JIANG
Ge,FENG Bao-min(大连大学生物工程学院,辽宁,大连,116622), 施广霞,SHI Guang-xia(大
连医科大学,辽宁,大连,116023)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(10)
被引用次数: 10次

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