全 文 ：由样品的制备方法分析, 该物质应该也是季铵碱。查
看该色谱峰的紫外吸收图谱发现其吸收光谱与水苏
碱很相似, 具体为何物质有待进一步研究。在对抗宫
炎片进行测定时发现, 水苏碱前面色谱峰的峰面积
远大于水苏碱的峰面积, 而测定结果也显示, 比色法
所得结果约为H PL C 法所得结果的 10 倍。该结果
验证了上述推断。
　　《卫生部药品标准》中药成方制剂第 13 册采用
沉淀重量法对益母草片中的水苏碱进行控制, 应用
该方法进行测定时样品定量符合要求, 但比色法或
H PL C 法测定结果较该方法低。将沉淀重量法中所
得沉淀溶于丙酮发现很多不溶物, 可见, 沉淀不全是
生物碱的雷氏盐沉淀, 其准确性值得进一步探讨。
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2901
板蓝根颗粒的 HPLC 指纹图谱研究
柏　健1, 王跃生1, 张继华1, 段　启2, 王少军1, 杨世林1Ξ
(11 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心, 江西 南昌　330077; 21 江西中医学院, 江西 南昌　330006)
　　板蓝根为十字花科植物菘蓝 Isa tis ind ig otica
Fo rt1 的干燥根, 性寒、味苦, 具有清热解毒、凉血利
咽的功效。板蓝根颗粒在《中国药典》2005 版上以靛
玉红为鉴定标准。但事实上现有的水煮醇沉的制剂
工艺对脂溶性成分靛玉红的提取率极低。药理实验
证明, 靛蓝、靛玉红并非其清热解毒的药效成分, 故
选靛玉红作为板蓝根及其制剂的质控指标已不适
合。为了从整体上控制板蓝根颗粒的质量, 同时进一
步来控制原料质量及生产工艺的稳定性, 本实验采
用高效液相色谱法建立了板蓝根颗粒的H PL C 指
纹图谱分析方法, 为进一步全面控制板蓝根颗粒的
质量提供了依据。
1　实验材料
　　岛津L C—V P 系列高效液相色谱仪 (日本岛
津) , SPD—M 10A vp (PDA ) 检测器 L C—10A T vp
串联双柱塞泵, S IL —10A dvp 自动进样器, C lass—
V P 工作站; BS2000S 电子天平 (赛多利斯) ; KQ —
250 型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。
　　甲醇 (色谱级) ,M illipo re 超纯水, 磷酸 (分析
纯)。板蓝根颗粒由江西汇仁制药厂提供。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱: H ypersil C 18柱 (250 mm × 416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇 (A ) 2014% 磷酸水溶液 (B ) , 梯度洗脱程序: 0～ 30 m in, 100% B , 30～ 50m in, A 2B (30∶70) , 50～ 70 m in, A 2B (35∶65) ,70～ 80 m in, A 2B ( 60∶40) , 80 m in 以后, A 2B(80∶20) ; 体积流量: 017 mL öm in; 检测波长: 219nm ; 柱温: 25 ℃; 进样体积: 5 ΛL。212　供试品溶液的制备: 取本品研碎, 过六号筛, 称取粉末约 510 g, 精密称定, 精密量取 80 mL 氯仿,水浴中索氏提取 3 h, 取氯仿提取液, 70 ℃挥干, 残渣加甲醇溶解于 2 mL 量瓶中, 即得。213　方法学考察21311　精密度试验: 取同一份板蓝根颗粒供试品溶液, 连续进样 6 次, 按上述色谱条件测定, 各色谱峰相对保留时间的 R SD < 012% , 各色谱峰相对峰面积的R SD < 115% , 表明仪器系统精密度良好。21312　重现性试验: 取同一批板蓝根颗粒 (批号0305120) , 按供试品的制备方法制备 6 份, 按上述色谱条件依次检测, 结果显示, 各色谱峰相对保留时间的R SD < 015% , 主要共有峰面积的R SD < 3%。21313　稳定性试验: 取同一份板蓝根颗粒供试品溶液, 按上述色谱条件, 分别在 0、1、2、4、8、16、24 h 检测, 各色谱峰的相对保留时间的R SD < 015% , 主要
·27· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2005205216
共有峰面积 R SD < 3% , 结果表明板蓝根颗粒供试
品溶液在 24 h 内稳定。
214　板蓝根颗粒 H PL C 指纹图谱及技术参数: 共
测定了 6 批板蓝根颗粒 (批号分别为 0305100、
0305101、0305109、0305120、0305122、0305123) , 获
得 19 个色谱峰, 典型色谱图见图 1, 不同批次的板
蓝根颗粒色谱叠加图见图 2。从图谱中可以看出 15
号峰较大, 分离度及峰形都很好, 因此选择 15 号峰
为参考峰, 标记为 S。计算各特征峰的相对保留时间
和相对峰面积, 各特征指纹峰的相对峰面积、相对保
留时间均具有较好的重现性, 特征指纹峰的相对保
留时间R SD < 1%。
图 1　板蓝根颗粒 HPLC 指纹图谱
F ig11　HPLC F ingerpr in t of Ban langen Granule
图 2　不同批次板蓝根颗粒 HPLC 指纹图谱
F ig12　HPLC F ingerpr in t of Ban langen Granule
in d ifferen t batches
　　按照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》
(暂行) 的要求, 初步得到板蓝根颗粒的指纹图谱的
技术参数, 见表 1。
3　结论与讨论
　　本实验提取溶剂分别考察了甲醇、醋酸乙酯、乙
醚与氯仿, 结果发现甲醇提取液成分太杂, 氯仿提取
的效果最好; 提取方法分别考察了超声处理、索氏提
取、回流提取、温浸4种方法, 结果以索氏提取的结
表 1　指纹图谱技术参数
Table 1　Parameters of f ingerpr in t
共有
峰号
相对保
留时间
相对峰
面积
共有
峰号
相对保
留时间
相对峰
面积
1 01204 11 01610
2 01241 12 01824
3 01265 13 01850
4 01282 14 01867
5 01350 01762～ 11144 15 (S) 11000 11000
6 01444 16 11049
7 01455 17 11146
8 01511 18 11235
9 01563 19 11333
10 01588
果稳定、重现性好; 氯仿提取液挥干温度对成分也有
较大的影响, 本实验分别考察了在 50、60、70、90 ℃
水浴温度下挥干对图谱的影响, 发现在 50、60、70 ℃
下挥干所测的图谱之间无显著性差异, 但较之 90 ℃
的, 则差异较大, 故选择控制水浴温度 70 ℃挥干。
　　采用DAD 紫外检测仪扫描, 发现在 219 nm 波
长下供试液各峰吸收强度较大, 相对丰度合适, 故选
用 219 nm 为指纹图谱的测定波长。分别考察了甲
醇2水、甲醇2014% 磷酸、甲醇20107% 醋酸、乙腈2水、
乙腈2014% 磷酸和乙腈20107% 醋酸系统, 结果发现
在等度条件下, 均不能在合适流动相比例下, 达到良
好的分离, 故而确定采用梯度洗脱的方式, 并在此基
础上以甲醇2014% 磷酸为系统得到的图谱中色谱峰
较多, 峰形更好, 故采用甲醇2014% 磷酸为流动相系
统。考察体积流量时发现体积流量为 110 mL öm in
时, 有部分峰始终分不开, 体积流量为 017 mL öm in
时, 各峰均有较好的分离, 故采用体积流量 017 mL ö
m in。
　　本实验考察了 6 批板蓝根颗粒, 建立了H PL C
指纹图谱分析方法。用于判断板蓝根颗粒质量稳定
性时, 一方面通过图谱的直观比较, 能够反映出各共
有峰的有无及其大致比例, 从而判断其质量一致性
的情况; 另一方面通过计算相对保留时间及相对峰
面积, 判断是否符合所建立的指纹图谱的技术参数。
　　同时, 采用药典委员会颁布的中药色谱指纹图
谱相似度评价系统 2004A 版 110 版对 6 批样品的
数据进行处理, 得到相关系数分别为 01975 1、
01962 5、01957 7、01942 9、01983 5、01970 8, 由此,
制定了板蓝根颗粒真伪鉴别及质量评价的标准, 即
相关系数不低于 0192, 特征指纹峰的相对保留时间
R SD 小于 2% , 并且符合上述指纹图谱的技术参数。
·37·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 37 卷第 1 期 2006 年 1 月