全 文 ：2. 6　回收率考察:采用加样回收法。 按 2. 7项下方
法精密吸取石明止血合剂 ( 020601) 3份 ,每份 2. 5
m L,分别加入 74 mg没食子酸对照品 ,继续按 2. 4
项下的方法操作 ,求得没食子酸平均回收率为
96. 75% , RSD= 2. 5% , (n= 6)。
2. 7　样品溶液的配制和测定:精密吸取石明止血合
剂 5. 0 mL,加盐酸 0. 5 mL,于水浴中微沸水解 1 h,
冷却后用乙醚 20 mL,分 10, 5, 5 mL 3次萃取 ,合并
萃取液置蒸发皿中 ,蒸干 ,用乙醇定容至 25 mL量
瓶中。精密吸取 1 mL置 5 mL量瓶中 ,加乙醇稀释
至刻度 ,摇匀。精密吸取 1 m L上述溶液和 1 mL内
标置 5 mL量瓶中 ,加乙醇稀释至刻度 ,作为供试品
溶液。按选定的方法 ,测定石明止血合剂中没食子酸
含量 ,结果见表 1。
表 1　石明止血合剂中没食子酸的含量 (n= 3)
Table 1　 Determination of gallic acid in Shiming
Zhixue Mistura ( n= 3)
批　号 没食子酸含量 /( mg· mL- 1 ) RSD/%
020501 27. 96 2. 9
020601 33. 44 2. 7
020602 31. 26 2. 3
3　讨论
3. 1　最低检测限:以信噪比等于 3∶ 1为标准 ,测定
没食子酸的最小检测浓度为 1μg /mL。
3. 2　运行缓冲液的 pH对分离效果的影响: 在 25
mmol /L硼砂缓冲液 ( pH= 9. 68)中添加不同浓度
的氢氧化钠溶液 (相应 pH分别为 10. 52, 12. 24)。结
果表明 , pH为 9. 68时的分离效果最佳。
3. 3　检测波长的选择: 在实验中 ,对没食子酸对照
品溶液在 200～ 600 nm进行光谱扫描。结果没食子
酸在 214 nm处吸收值最大 ,灵敏度最高 ,故选择其
为测定波长。
3. 4　空白试验:按处方比例制备不含石榴皮、五倍
子药材的阴性对照溶液 ,按样品含量测定方法操作 ,
结果空白溶液在与没食子酸对照品相同保留时间
处 ,未显示明显色谱峰 (图 1) ,认为无干扰。
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HPLC测定刺五加软胶囊中异秦皮啶含量
赵陆华 ,屠　颖 ,赵振宇 ,徐继华 ,王广基
(中国药科大学 分析中心 ,江苏 ,南京　 210009)
　　刺五加软胶囊由刺五加浸膏粉、黄芪、枸杞等 6
味中药经特殊制剂工艺提取后 ,加定量植物油和赋
形剂制成 ,具有益气健脾、补肾安神之功效 ,用于脾
肾阳虚、体虚乏力、腰膝酸痛等。 刺五加含有多种化
学成分 ,其中异秦皮啶 ( iso f raxidin)具有明显的镇静
作用。 因制剂成分较多 ,干扰较大 ,文献报道的异秦
皮啶含量 HPLC测定方法 [ 1～ 3]不适宜本品。 经色谱
优化 ,样品处理方法考察 ,本实验建立了一种 HPLC
法测定其中总异秦皮啶含量 ,重现性好 ,可用于评价
刺五加及其制剂中该成分的指标。
1　仪器与试药
日本岛津 LC— 10A高效液相色谱仪 , SPT—
10A检测器 , C— R6A记录仪。甲醇为色谱纯 ,其余
均为分析纯 ,水为二次重蒸水。异秦皮啶对照品 (中
国药品生物制品检定所提供 ) ,刺五加软胶囊 (自制 ,
批号: 991011, 991013, 991016)。
2　方法与结果
2. 1　测定波长的选择: 取异秦皮啶对照品适量 ,加
流动相溶解 ,在 200～ 400 nm波长扫描 (图 1)。本品
在 343. 4 nm处有最大吸收 ,故选择 344 nm作为检
测波长。
2. 2　色谱条件:色谱柱: Alltima C18 ( 4. 6 mm× 250
mm , 5μm);流动相: 甲醇-水 -冰醋酸 ( 45∶ 55∶ 1) ;
流速: 1 mL /min;检测波长: 344 nm;进样量: 20μL。
·911·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2003-03-31
图 1　异秦皮啶 UV光谱图
Fig. 1　UV absorpt ion spectrum of isof raxidin
2. 3　对照品溶液的制备: 取异秦皮啶对照品适量 ,
精密称定 ,加甲醇制成 62. 63μg /mL的溶液 ,作为
对照品溶液。
2. 4　供试品溶液的制备:取本品 6粒 ,剪开 ,置 100
m L锥形瓶中少量正己烷洗尽油分 ,加甲醇 50 mL,
超声 30 min,放冷 ,抽滤 ,滤液回收至干 ,残渣加 2
mol /L H2 SO4 30 mL,沸水浴回流 2 h,稍冷 ,加氯仿
20 mL回流 30 min,再用氯仿萃取 3次 ,每次 20
m L,水洗两次 ,每次 30 mL,氯仿液回收至干 ,加甲
醇约 8 mL溶解 ,加水定容至 10 mL, - 2℃冷藏 2
h,微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,即得。
2. 5　阴性对照溶液的制备:取缺刺五加的其他各味
中药按处方工艺制成阴性对照品 ,按 2. 4项下方法
制成阴性对照溶液。
2. 6　测定方法: 分别精密吸取上述 3种溶液各 20
μL,注入液相色谱仪 ,测定 ,结果阴性对照溶液无干
扰。样品中异秦皮啶色谱峰的保留时间为 14. 33
min,用二极管阵列检测器做峰纯度检查 ,匹配度为
999,表明该峰为纯的色谱峰。色谱图见图 2。
* -异秦皮啶
* -isof raxidin
图 2　异秦皮啶对照品 ( A)、刺五加软胶囊 (B)
和阴性对照 ( C)的 HPLC图谱
Fig. 2　 HPLC chromatograms of isof raxidin ( A) ,
Ciwujia Sof t Capsule (B) and negative
sample (C)
2. 7　方法学考察
2. 7. 1　标准曲线的制备: 取异秦皮啶对照品适量 ,
加甲醇制成 21. 68, 43. 36, 65. 04, 86. 72, 108. 4μg /
mL的溶液 ,照高效液相色谱法 ,分别取 20μL注入
液相色谱仪 ,测定。 以浓度为横坐标 ,峰面积纵坐标
进行回归 ,方程为 Y= 7. 329 4× 103X - 2. 393 3×
103 , r= 0. 999 7。 结果表明 ,异秦皮啶在 21. 68～
108. 4μg /mL线性良好。
2. 7. 2　最低检测限: 在信噪比 S /N = 3时 ,最低检
测限为 60. 0 ng。
2. 7. 3　稳定性考察: 同一样品溶液分别在 0, 2, 4,
6, 8 h进样 ,测得异秦皮啶浓度的 RSD= 1. 7%。 表
明样品溶液在 8 h内稳定。
2. 7. 4　精密度试验: 取同一样品溶液连续进样 6
次 ,测得异秦皮啶的峰面积 RSD= 1. 3%。
2. 7. 5　重现性 试验: 取 同一批 号样品 6份
( 991011) ,按 2. 4项下方法操作 ,分别测定异秦皮啶
的含量 , RSD= 1. 6% 。
2. 7. 6　回收率试验:采用加样回收率测定方法。 取
刺五加软胶囊 3粒 ,添加一定量 ( 263. 0μg )的异秦
皮啶对照品溶液 ,按 2. 4项下方法操作 ,制备成加样
回收供试液 ,并依法测定。结果异秦皮啶的平均加样
回收率为 96. 47% , RSD= 2. 9% (n= 6)。
2. 8　样品测定结果: 取 3批样品依法操作 ,测定峰
面积 ,计算样品含量 ,结果见表 1。
表 1　刺五加软胶囊中总异秦皮啶的含量测定结果 (n= 3)
Table 1　 Isofraxidin in Ciwujia Sof t Capsule (n= 3)
批　号 总异秦皮啶 /(μg· 粒 - 1)
991011 107. 8
991013 104. 9
991016 107. 6
3　讨论
3. 1　样品不经水解 ,测定的游离型异秦皮啶含量较
低 ,占总异秦皮啶量的 1 /3,故测定总异秦皮啶更能
反映产品内在质量。
3. 2　分别考察了乙腈 -水、甲醇 -水、乙腈-水 -甲酸、
乙腈 -0. 05 mol /L KH2 PO4系统 ,结果甲醇 -水-冰醋
酸 ( 44∶ 55∶ 1)系统分离效果最佳。
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·912· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月