全 文 ：芪的免疫增强作用可能是各个组分之间的协同作
用。当归对正常小鼠的免疫作用比较复杂 ,其整体的
免疫增强作用可能与各个组分之间的配伍有关 ,并
非简单的协同作用。而对血虚模型小组中低下的 T
淋巴细胞免疫 ,当归黄酮和黄芪黄酮、黄芪皂苷的作
用突出 ,说明当归补血汤的补益作用是建立在其单
味药中较强活性物质的基础上。同时 ,当归黄酮在低
剂量时有很强的免疫促进作用 ,但在高剂量时则表
现为明显的免疫抑制作用 ,而对免疫低下的血虚模
型小鼠则能将其降低的 T淋巴细胞增殖率提高至
接近正常 ,反映了当归黄酮极强的免疫调节作用 ,同
时 ,也可以看出当归不同组分之间剂量配比的重要
性。当归黄酮的免疫调节作用有待进一步的研究。
体外实验亦发现当归、黄芪不同组分产生免疫
活性强弱不同。在 2. 5～ 250μg /mL的浓度范围内 ,
黄芪挥发油、黄酮、皂苷以及当归挥发油均表现为显
著的双向免疫调节作用 ,其中黄芪黄酮和皂苷的作
用明显强于黄芪挥发油和当归挥发油 ,这与体内结
果一致 ,说明二者是黄芪产生免疫增强作用的主要
活性物质。两个多糖成分 (黄芪多糖和当归多糖 )则
表现为明显的浓度依赖性作用方式 ,其中 ,二者对静
息细胞和 B淋巴细胞的增殖有明显的促进作用 ,而
对 T淋巴细胞增殖无明显作用 ,黄芪多糖的作用要
强于当归多糖。
尽管黄芪多糖是目前公认的免疫促进剂 ,但是 ,
本实验发现其对 T和 B淋巴细胞的增殖作用和抗
体生成以及对血虚模型小鼠的调节作用均不如黄芪
皂苷和黄芪黄酮两个组分。尤其是黄芪皂苷具有较
强的免疫调节作用 ,可以认为是当归补血汤中药效
的主要物质基础。
参考文献:
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人参皂苷-Rg1对中性粒细胞与血小板之间粘附的影响
沈志强 1 ,吴蓝鸥 1 ,雷伟亚 1 ,陈植和 1 ,刘吉开 2⒇
( 1. 云南省天然药物药理重点实验室 ,昆明医学院 ,云南 昆明　 650031;　 2. 中国科学院昆明植物研究所 开
放实验室 ,云南 昆明　 650204)
摘　要:目的　探讨人参皂苷 -Rg1对大鼠血小板与中性粒细胞之间粘附及颈动脉血栓形成的影响。 方法　采用
Cha rlton等方法评价人参皂苷 -Rg1对电刺激大鼠颈动脉血栓形成的作用 ;应用玫瑰花结试验观察对大鼠血小板与
中性粒细胞之间粘附的影响。结果　 25 mg /kg人参皂苷-Rg1使血栓形成时间从对照组的 ( 18. 7± 1. 8) min延长到
( 36. 4± 2. 1) min (P < 0. 05) ;显著降低凝血酶激活的血小板与中性粒细胞间的粘附率 ,其 IC50为 81. 2μmo l /L。结
论　人参皂苷 -Rg1具有较强的抗血栓的作用 ,其机制可能与抑制中性粒细胞与血小板之间的相互作用有关。
关键词: 人参皂苷 -Rg1; 中性粒细胞 ;血小板 ;粘附 ;血栓形成
中图分类号: R286. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0138 03
Effects of ginsenoside-Rg1 on adhesion of neutrophil to platelet
SHEN Zhi-qiang
1
, WU Lan-ou
1
, LEI Wei-ya
1
, CHEN Zhi-he
1
, L IU Ji-kai
2
( 1. Yunnan Pharmaco lo gica l Labo rato ry of Natura l Products, Kunming M edical Colleg e, Kunming Yunnan 650031, China;
2. Opening Labor ato ry , Kunming Institute o f Bo tany , Chinese Academy o f Sciences, Kunming Yunnan 650204, China)
Abstract: Object　 To investig ate the effects of ginseno side-Rg1 on adhesion o f neutrophi l to pla telet,
and on carotid th rombosis in ra t. Methods　 Cha rl ton and Roset te test w ere used to evalua te the effect of
ginsenoside-Rg1 on ca ro tid thrombosis induced by elect rical stimulation and to observe i ts ef fect on the
·138· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-04-25基金项目:云南省自然科学基金资助项目 ,课题号: 98C066M作者简介:沈志强 ,男 , 35岁 ,博士 ,副教授 ,研究方向:天然药物与心血管药理学 ,于国内外发表论文近 30篇。 Tel: ( 0871) 5332956
E-mai l: s zq2000@ yahoo. com　 Fax: ( 0871) 5377271
adhesion of neutrophil to platelet in ra t respectiv ely. Results　 Ginsenoside-Rg1 25 mg /kg iv pro longed the
thrombo tic time from ( 18. 7± 1. 8) min in control g roup to ( 36. 4± 2. 1) min in t rea tment g roups
(P < 0. 05) ; the adhesion of neutrophi l to thrombin-stimulated platelets was inhibi ted significantly w ith
IC50 = 81. 2μmo l /L. Conclusion　 The inhibi tion o f ginsenoside-Rg1 on the adhesion of neutrophil to
platelet may contribute to it s po tent anti-th rombotic ef fects.
Key words: ginsenoside-Rg1; neut rophil; pla telets; adhesion; thrombosis
　　人参皂苷 -Rg1对心肌缺血再灌损伤具有保护作
用 ,并可防治心脑血管血栓栓塞性疾病 [1 ] ,近年关于
其抗血栓机制的研究大多侧重探讨其抗血小板活化
作用 [2 ]。目前 ,中性粒细胞与血小板之间的相互作用
在血栓形成与发展中的地位倍受关注 [3 ] ,这为抗栓
药新作用机制的研究开辟了新领域。 本研究探讨了
人参皂苷 -Rg1对电刺激大鼠颈动脉血栓形成的影
响 ,并从细胞分子水平探讨其抗血栓形成的作用
机制。
1　材料
1. 1　雄性 SD大鼠 ,体重 250～ 300 g ,由云南省天
然药物药理重点实验室动物室提供 (合格证号: 滇实
动证 9805)。
1. 2　药品及主要试剂: 人参皂苷 -Rg1 ,由中科院昆
明植物研究所杨崇仁教授提供 (纯度: 98. 7% ) ,用前
以生理盐水溶解 , p H值约 7. 0。淋巴细胞分离液 (质
量体积比 1. 077)购自上海华精生物高科技有限公
司。凝血酶系 Sigma公司产品。
1. 3　仪器:电刺激仪 ( SEN-7203型 )、二道血流速
度流量仪 ( DVM-4200型 )及 Olympus像差显微镜
均为日本生产。
2　方法与结果
2. 1　对电刺激大鼠颈动脉血栓形成的影响:动物分
3组 ,每组 6只 ,即 0. 9% 生理盐水组 , 10 mg /kg阿
司匹林组和 25 mg /kg人参皂苷 -Rg1组。用改进的
Charlton方法 [4 ] ,即 ip 30 mg /kg 戊巴比妥钠麻醉
大鼠后 ,上述各组份均经股 iv ,给药 10 min后 ,分离
左颈总动脉 ,测定正常的血流量及血流速度 ,然后置
两根银制电极于血管两端 ,通以直流电刺激 ,以 1. 5
m A连续刺激 7 min,同时于近头端测量血流量和速
度。从刺激开始至血流量为零的时间为血栓形成时
间 ( occlusion time, O T)。 结果 25 mg /kg人参皂
苷 -Rg1使 O T从对照组的 ( 18. 7± 1. 8) min延长到
( 36. 4± 2. 1) min,阿司匹林亦有显著作用 (表 1)。
2. 2　血小板制备: 大鼠颈动脉取血 ,以 2. 7%
EDTA抗凝收集于塑料离心管中 ,血与抗凝剂体积
比为 9∶ 1。室温下以 1 000 r /min离心 10 min得富
血小板血浆 ( platelet -rich plasma , PRP)。 PRP以
表 1　人参皂苷-Rg1 iv对电刺激大鼠颈动脉
血栓形成的影响 ( x± s ,n= 6)
药　物 剂　量 ( mg /k g) 栓塞时间 ( min)
生理盐水 - 18. 7± 1. 8
人参皂苷 -Rg1 25 36. 4± 2. 1* #
阿司匹林 10 27. 8± 1. 6*
　　与生理盐水比: * P < 0. 05;　与阿司匹林比: # P < 0. 05
3 000 r /min离心 10 min得血小板团块。用 含 1%
小牛血清蛋白及 1. 4 mmo l /L EDT A的磷酸缓冲液
( PBS) 洗涤血小板 3次 ,最后悬浮于上述含 1
mmol /L CaCl2的 PBS中。上述试验 ,血小板数控制
在 108 cell /mL左右 ,用台盼蓝排斥试验证实其成活
率 > 95%。
2. 3　中性粒细胞的制备: 在上述吸出 PRP后的抗
凝血中 ,加入与 PRP等体积的生理盐水 ,再加入
1 /6体积的 6% 右旋糖酐 ( dex tran T 500)混匀。
37℃ 静置 30 min,沉淀红细胞 ,将上层白细胞吸出
轻浮于 3 mL淋巴细胞分离液中 , 2 000 r /min离心
30 min,取出底部中性粒细胞 ,加入 1 mL双蒸水溶
血 30 s,使红细胞破膜 ,再加 2倍浓度的 PBS
1 mL,离心 10 min,中性粒细胞团块用 PBS洗 3
次 ,悬浮于 Hanks液中 (生理盐水组胞外含 1
mmol /L CaCl2或 5 mmol /L EGTA分别反应有钙
或无钙的情况 )并调数 2× 106 cell /mL,用台盼蓝排
斥试验证实其成活率> 95%。
2. 4　玫瑰花结试验: 改良 Hamburger [5 ]和 Jungi[6 ]
等方法 ,即取 50μL血小板与凝血酶 ( 0. 2 U /mL)
37℃ 温育 15 min,然后分别加入 0. 9% 生理盐水
或药液各 50μL,继续静置 15 min,再加入中性粒细
胞悬液 100μL,于 4℃振荡 30 min。取出少许细胞
悬液 ,在常规计数板上于 40倍镜下随机计数 100
个中性粒细胞 ,其周围粘附有 2个或 2个以上血小
板者为玫瑰花结试验阳性。每样本计数 3次 ,取其
均值 ,并计算花结形成百分率 ,以反映粘附率大小。
结果显示 ,胞外存在 1 mmo l /L CaCl2或 5 mmol /L
EG TA时 ,生理盐水组用凝血酶激活的血小板与中
性粒细胞之间形成的玫瑰花结比率分别为 65. 4%
·139·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
和 11. 8% 。在胞外含 1 mmol /L Ca2+时 ,人参皂苷 -
Rg1和阿司匹林均显著降低粘附率 ,其 IC50分别为
81. 2和 70. 3μmo l /L (表 2)。
表 2　对凝血酶 ( 0. 2 U /mL)激活的大鼠血小板
与中性粒细胞间粘附的影响 ( x± s, n= 5)
浓　度
(μmol /L)
人参皂苷 -Rg1
粘附率 (% ) IC50 (μmo l / L)
阿司匹林
粘附率 (% ) IC50(μmol / L)
生理盐水 65. 4± 6. 4 65. 4± 6. 4
37. 5 46. 3± 7. 3* 52. 3± 3. 4
75 33. 8± 4. 3* * 27. 9± 3. 1* *
150 19. 5± 4. 5* * 17. 7± 1. 6* *
300 14. 6± 4. 1* * 81. 2 13. 7± 2. 533 70. 3
　　与生理盐水比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
3　讨论
国内就人参皂苷-Rg1的药理研究基本侧重其对
血小板活化这一单一因素的探讨。近来研究表明血栓
形成是由包括血小板、白细胞及内皮细胞等多细胞间
相互作用所致 [3 ] ,因此有必要从多细胞多因子去探讨
血栓的形成与发展 ,以阐明药物作用的新机制。
电刺激大鼠颈动脉所形成的血栓与人体动脉血
栓相似。采用血流量仪替代点式温度计来判断 O T,
则排除了室温的影响 ,其结果更精确可靠。 人参皂
苷 -Rg1 25 mg /kg明显延长动脉 O T,效果明显强于
10 mg /kg阿司匹林 ,表明人参皂苷 -Rg1具有较强的
抗动脉血栓形成作用。
本研究结果表明 ,人参皂苷-Rg1显著降低凝血
酶激活的血小板与白细胞间的粘附率 ,提示人参皂
苷 -Rg1的抗栓作用与其抑制该两细胞间的粘附作用
密切相关。在细胞外存在 1 mmol /L Ca2+ 时生理盐
水组的粘附率为 65. 4% ,而胞外含有 5 mmol /L
EGT A时 ,则粘附率仅为 11. 8% ,说明激活的血小
板与白细胞间的粘附是钙离子依赖性的 ,同时揭示
人参皂苷 -Rg1抑制两细胞间的粘附可能与阻抑血小
板或白细胞内的钙动员有关 ,本研究组将对此作进
一步的探讨。心肌梗死时的血循环中的血小板-白细
胞花结明显增加 ,加重梗死程度和范围 [7 ] ,人参皂
苷-Rg1能显著减少花结形成 ,显然为其防治缺血性
心脑血管等疾病提供了又一科学依据。
综上所述 ,人参皂苷-Rg1通过抑制白细胞与血
小板间的粘附而发挥较强的抗血栓形成作用 ,这为
其用于防治心脑血管血栓栓塞性疾病提供了进一步
的科学依据。
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植物多糖增强肿瘤杀伤效应细胞的增殖活性和细胞毒活性
魏虎来 1, 2 ,姚小健 2 ,赵怀顺 1 ,贾正平 3⒇
( 1. 兰州医学院 医学实验中心 ,甘肃 兰州　 730000; 2. 兰州医学院血液病研究所 ,甘肃 兰州　 730000; 3. 兰州军
区总医院 药材科 ,甘肃 兰州　 730050)
摘　要: 目的　观察红景天、红芪、地黄、枸杞子、沙参和芦荟的多糖成分对 T-AK细胞增殖活性和杀瘤活性的增强
作用。方法　用抗 CD3单抗 ( CD3McAb)和 r IL-2激活诱生 T-AK细胞 ,观察 6种植物多糖在诱生、扩增和杀瘤过
·140· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-05-01作者简介:魏虎来 ( 1962-) ,男 ,甘肃人 ,医学硕士 ,教授 ,硕士研究生导师 ,甘肃省高等学校跨世纪学科带头人、甘肃省跨世纪学术技术带头人 (“ 333科技人才工程” ) ,甘肃省免疫学会常务理事 ,中国民主同盟兰州医学院委员会副主任委员。 主要研究方向为白血病的细胞分子生物学研究、白血病细胞耐药干预对策研究和免疫血液学研究。 主持和参与多项科研项目 ,发表学术论文 40余篇 ;获甘肃省科技进步二等奖 1项、三等奖 2项 ,甘肃省高校科技进步二等奖 2项 ,甘肃省医药卫生科技进步二等奖和三等奖各 1项 ,并荣获第三届甘肃青年科技奖。 Tel: 0931-8761779　 E-mail: w eihil@ public. lz. gs. cn