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Survey of studies on identif ication of Bungarus multicinctus multicinctus

金钱白花蛇真伪鉴别研究综述



全 文 :依靠 AT P 能量代谢表明, 泡番荔枝辛辅助治疗和其他抗癌
的治疗将有利于抑制多药抗药性细胞的发展, 从而得以
治愈。
泡番荔枝辛的药理和生物活性, 给我们提供了一个治疗
多药抗药性肿瘤细胞的一个很好的前景。然而,由于含量低,
工业化生产并非易事。而且, 由于存在手性中心, 更多的工作
是要除去空间异构体, 从而增加生产的难度。如何有效且经
济的提取泡番荔枝辛依然是一个摆在化学家面前的一个挑
战。
参考文献:
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金钱白花蛇真伪鉴别研究综述
黄成勇
X
(广西柳州市药品检验所,广西 柳州 545001)
摘 要: 概述了近十余年来金钱白花蛇及其伪品的鉴别研究情况,介绍了从传统到现代化的各种鉴别方法, 对一些
鉴别内容及方法提出了进一步完善的看法。
关键词: 金钱白花蛇;伪品; 鉴别
中图分类号: R282. 740. 3   文献标识码: A   文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0382 03
Survey of studies on identification of Bungarus multicinctus multicinctus
HU ANG Cheng-yong
( L iuzhou Institute for Drug Contr ol, L iuzhou Guangx i 545001, China)
Key words : Bungarus mul ticinctus mul ticinctus Bly th; adulter ant ; ident ificat ion
  金钱白花蛇为眼镜蛇科动物银环蛇 Bung arus multi-
cinctus multicinctus Bly th 除去内脏的幼蛇干燥体[ 1]。具有祛
风、通络、止痉功能。由于金钱白花蛇价格较昂贵,加之用药
量的增加, 故而市场上其伪品及混淆品屡有所见。常见的伪
品有同科动物金环蛇 B . f asciatus ( Schneider )、游蛇科动物
赤链蛇 Dinod on ruf oz onatum ( Canto r )、黄链蛇 D . f lavo-
z onatum Pope、水赤链游蛇 N atr ix annular is ( Hallowell)、黑
背白环蛇 Ly codon ruhstr ati ( Fischer )、双全白环蛇 L . f as-
ciatus ( Ander son )、百 花 锦 蛇 Elaphe moellendorf f i
( Boettg er )、铅色水蛇 Enhydr is p lumbea Bo ie、中国水蛇 E .
chinensis ( Gr ay )、横纹后棱蛇Op isthotr op is balteata ( Cope)、
海蛇科动物青灰海蛇 H udrop his caerulescnr s ( Shaw )等 11
种或以具有横纹的蛇纵向割成数条后配以其它蛇头制成的
伪品及以其它幼蛇经白色油漆、退色药水涂制成的伪
品[2~6]。本文综述采用性状鉴别、鳞片鉴别、显微鉴别、理化
鉴别、生物学技术鉴别等手段 ,对金钱白花蛇进行真伪鉴别
研究的情况。
1 性状鉴别
适用于鉴别蛇体完整者。根据蛇头部、盘径、蛇头与蛇体
连接情况、白色环纹数、环纹宽度、蛇尾、脊棱、背鳞、毒牙有
无等差异进行鉴别, 如党江川等[ 2~5]鉴别了金钱白花蛇及其
以上 11 种伪品, 并列有性状鉴别比较表,可根据特征加以区
别真伪。
张昌禧等[7]提出了专属性较强、简易快捷的鉴别要领:
游蛇科动物无毒牙,有颊鳞, 尾下鳞双行, 上唇鳞在 8 片以
上,无六角形脊鳞; 青灰海蛇黑色与黄白环纹相间, 深色部分
·382· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2002 年第 33卷第 4期
X 收稿日期: 2000-08-30
较浅色部分窄; 金环蛇虽有毒牙,尾下鳞单行, 但其体表的横
斑为黄色, 且与黑色环纹等宽, 尾末端钝圆,尾下鳞为 29~
39片, 明显少于金钱白花蛇。
对于伪制品, 孙秀梅等[ 6, 8]报道: ( 1)如见到白色环纹明
显不规则或形态呆板, 超过 2 片鳞宽且有部分脱落, 有的鳞
片平滑, 具光泽,则鉴别为其它幼蛇涂上了白色环纹的伪品。
( 2)用水将检品泡软, 除去支撑的竹签, 将蛇体展开观察, 若
见蛇头与蛇尾分开,蛇体两端有明显截断的痕迹, 则可判断
其为金钱白花蛇的伪制品。
另有一种掺伪品是将已煎煮过的金钱白花蛇掺入商品
中, 陆维承[9]描述其特征为: 圆盘较松, 全体皆被药汁染成黄
棕色, 腹部及白色环纹处尤为明显,鳞片大多脱落,唯腹部尚
存少许, 因受热后,鳞片卷曲不平, 质地坚脆,易断。以上鉴别
特征较明显, 可区别。
2 显微鉴别
适用于鉴别破碎状、粉末状及相关中成药样品, 弥补了
性状鉴别的不足。
2. 1 粉末:利用粉末中角质鳞片、皮肤碎片、横纹肌纤维、骨
碎片等显微特征进行鉴别。如翟延君等[ 10]鉴别了金钱白花
蛇及其伪品水赤链游蛇、赤链蛇、金环蛇, 并列有粉末特征
表, 检索表及附图。
2. 2 鳞片
2. 2. 1 光学显微镜显微: 取背鳞用水装片, 制表面片,观察
外表面, 根据背鳞形状、颜色、大小、纹理、脊鳞有无、圆孔数、
游离端、网纹区、细纵条纹区、波纹区的差异进行鉴别。如翟
延君等[ 11~13]鉴别了金钱白花蛇及其伪品金环蛇、百花锦蛇、
赤链蛇、水赤链游蛇, 并列有检索表、显微特征比较表及其
附图。
2. 2. 2 扫描电子显微镜显微: 取背鳞经常规清洗、脱水、脱
脂后、喷镀铂,制成标本, 扫描电镜观察其表面结构、纹理, 如
何报作等[ 12, 13]鉴别了金钱白花蛇及其它来源品种金环蛇、百
花锦蛇、蕲蛇。并列有检索表及扫描电镜图。
3 理化鉴别
蛇类药材主要含蛋白质、氨基酸类化学成分, 但其所含
成分有异同, 故可据此区别真伪。
3. 1 薄层层析: 利用色谱斑点的差异进行鉴别。如李钦
等[ 14]用此法鉴别了金钱白花蛇及伪品水赤链游蛇, 层析图
谱显示两者有明显差异, 可依此鉴别出伪品。平忠明[15]用薄
层层析法对金钱白花蛇、乌稍蛇、蕲蛇的脂溶性成分和水溶
性成分分别进行了薄层层析, 可作为鉴别金钱白花蛇的参考
依据。
3. 2 纸层析:利用纸层析不同的色谱斑点进行鉴别。如翟延
君等[ 11, 14]鉴别了金钱白花蛇与伪品水赤链游蛇、赤链蛇、金
环蛇。从图谱可知, 金钱白花蛇与伪品的色谱斑点有明显差
异, 可用作区别真伪的依据。
3. 3 紫外吸收光谱:根据紫外吸收光谱的差异进行鉴别。如
翟延君等[ 11, 14]鉴别了金钱白花蛇及其伪品赤链蛇、水赤链游
蛇、金环蛇, 结果 4种蛇石油醚浸液的紫外吸收曲线最大收
峰的波长、数目均不同, 具有一定的鉴别意义。
采用薄层层析、纸层析和紫外吸收光谱法鉴别金钱白花
蛇的药材方法简单 , 重现性好, 可以补充形态、显微鉴别之
不足,并为中成药中的金钱白花蛇鉴别提供参考。
4 生物学技术鉴别
4. 1 蛋白粘度: 蛋白质是动物机体内的一类高聚化合物,具
有对流动的阻抗能力(即粘度)。不同种动物体内因蛋白质的
组成及含量的不同, 其蛋白粘度也有一定差异, 可根据这种
差异进行鉴别。刘训红等[16]采用此法测定了金钱白花蛇等
7种蛇类药材的蛋白粘度,结果表明实验误差 R SD< 1. 5% ,
7 种蛇类药材的蛋白粘度有显著差异( P < 0. 01) , 其中包括
金钱白花蛇与其成体(银环蛇)的蛋白粘度差异, 可作为破碎
状及中成药中的金钱白花蛇真伪鉴别方法之一。
4. 2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)技术:根据 PAGE 谱带
的位置和数目进行品种鉴别。如陈振江等[ 17]用该技术鉴别
了金钱白花蛇及其伪品水赤链游蛇、黄链蛇, 并附有电泳图
谱。图谱显示:金钱白花蛇及其伪品有显著差异,可作为鉴别
依据。值得一提的是:刘训红等[ 18]用此法做了 7 种蛇类的电
泳分析,其中金钱白花蛇与其成体(银环蛇)的电泳谱带有一
定差异:金钱白花蛇比银环蛇多了 4 条二级带、2 条三级带。
这可能是由于幼蛇长成成蛇后,其机体内蛋白质组成比例发
生了一些变化,有的蛋白质含量降低而显示不出明显谱带,
这也许从另一方面说明成蛇不能作金钱白花蛇药用, 与我国
传统用药习惯是相符的。
4. 3 SDS-PAGE 技术: SDS-PAGE 技术是 PAGE 技术的改
进。十二烷基硫酸钠( SDS)是阴离子型表面活性剂, 它能按
一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物, 再与
PAGE 技术结合,则谱带差异更加明显、清晰, 并可测定蛋白
质分子量。陈振江等[ 17, 19]用此技术鉴别了金钱白花蛇与其
伪品水赤链游蛇。清晰的电泳图谱辅以特征性常数——相对
分子质量,使金钱白花蛇的真伪鉴别更为理想、直观。
4. 4 等电聚焦电泳( IFE)技术: 用 IFE 测定其主要蛋白质
成分的等电点,根据等电点的差异进行鉴别。陈振江等[ 17]用
此法鉴别了金钱白花蛇与其伪品水赤链游蛇。结果显示:正
品与伪品的主要蛋白质的等电点明显不同, 可作为鉴别依据
之一。等电点的另一检测方法是采用一系列不同的缓冲液进
行测定。刘训红等[ 20]采用此法测定了金钱白花蛇等 7 种蛇
类药材的等电点。实验表明,等电点数据准确可靠,重现性好
( RSD < 0. 5% ) , 7 种蛇类药材的等电点区别明显 (P <
0. 01) , 其中包括金钱白花蛇与其成体(银环蛇)等电点的差
异,可作为鉴别金钱白花蛇的参考依据。
4. 5 聚合酶链反应 ( PCR )技术: PCR 是一项快速体外基因
扩增技术, 在此基础上, 王义权等[ 21]首次成功地研究设计了
一对高度特异性的金钱白花蛇鉴别引物——BuL-I 和 BuH-
I ,使所有的金钱白花蛇样品或含有金钱白花蛇的样品都能
显著地扩增出 DNA 片断,而其他非金钱白花蛇样品均无扩
增产物出现 ,这样便可以高度特异地鉴别被测物, 且操作过
程简单、快速。应用此技术鉴别了金钱白花蛇与伪品赤链蛇、
         中草药 Chinese T raditional and Herba l Drugs 2002年第 33 卷第 4 期      ·附 1·
水赤链游蛇、百花锦蛇、金环蛇。
蛇类药材富含蛋白质, 而蛋白质受遗传基因 DNA 的控
制, 信息含量较高。PCR 是在遗传信息的载体—DNA 水平
上研究不同生物种类间的差异,用于金钱白花蛇的鉴别中,
当引入一对高度特异性引物时, 可百分之百检出金钱白花
蛇, 误检率和漏检率为零。无疑具有其独到的优越性。
5 小结
5. 1 人们对金钱白花蛇的鉴别研究,已从传统的性状鉴别
发展到鳞片鉴别、显微鉴别、理化鉴别、生物学技术鉴别。尤
其是用 PCR 方法鉴别蛇类品种, 准确性高, 重现性好,与性
状、显微、理化鉴别相比,具有无法比拟的优越性, 也是鉴别
金钱白花蛇真伪的最先进的技术手段之一。PCR 存在的不
足之处是: 由于生物体内的遗传信息不随生物发育的不同阶
段而变化,同一个体的成、幼体阶段和同一个体的不同器官
具有同样的遗传信息, 因此 PCR 鉴别不能区别出个体的发
育阶段和器官组织的类种, 可结合性状鉴别等手段加以
识别。
5. 2 黄泽崧等[22, 23]曾详细研究了银环蛇的骨骼形态及组织
特征, 但其幼体即金钱白花蛇的骨骼特征是否与成体一致?
有待于进一步考证。
5. 3 姜大成等[24]运用红外光谱对16 组54种包括银环蛇在
内的动物药材进行了鉴别研究, 报道了银环蛇在 1 220~
1 000 cm -1处有 3 个弱峰 ,但其幼蛇(金钱白花蛇 )的红外光
谱研究未见报道, 两者是否相同? 还需在这方面作进一步的
研究、考证。
5. 4 《中药鉴定学》[ 25]中“金钱白花蛇”显微鉴别项下描述
其背鳞有鳞棱、端窝等特征 ,而翟延君等[ 11~13]通过对金钱白
花蛇背鳞外表进行大量的显微观察研究,未发现其有鳞棱、
端窝。希望能尽快核实。
5. 5 根据目前使用的 2000 年版《中华人民共和国药典》收
载的金钱白花蛇项下, 其鉴别方法仅性状一种,建议再版时
适当增加一些显微、理化鉴别,以提高鉴别的准确性。
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(原花青素≥95% ) 专业生产厂家
电话: 0086-022-26721040; 26723305; 26737125  传真: 0086-022-26721041
       网址: ht tp : / / www . jf-natural . com. cn Tianjin Jianfeng Natural Product R & D Co. , Ltd  天津尖峰天然产物公司
       天津北辰科技园科园路
·附 2·      中草药 Chinese T raditiona l and Herbal D rug s 2002 年第 33 卷第 4 期