全 文 ：回归方程: Y = 5 708 662X - 22 727, r= 01999 8。结
果表明异秦皮啶在 01040 8～ 01408 0 Λg 与峰面积
线性关系良好。
215　精密度试验: 精密吸取同一份 01024 m gömL
异秦皮啶对照品溶液 10 ΛL , 连续进样 6 次, 测定异
秦皮啶峰面积, 结果其R SD 为 0189% (n= 6)。
216 　重现性试验: 精密称取同一批号 (批号
20000102) 样品 5 份, 按上述方法制成供试品溶液,
分别进样, 测定异秦皮啶峰面积, 结果其 R SD 为
214% (n= 5)。
217　稳定性试验: 取同一份 01024 m gömL 异秦皮
啶对照品溶液, 放置 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 h 后测定
异秦皮啶峰面积, 结果其R SD 为 1146% (n= 9)。
218　回收率试验: 取同一批号 (批号 20000102) 样
品 5 份适量, 精密加入 014 m gömL 异秦皮啶对照品
溶液 110 mL , 制备供试品溶液, 分别进样测定, 计算
回 收率。结果平均回收率为 10016% , R SD 为
2189% (n= 5)。
219　样品测定: 取 10 个批号的样品依 213 项下方
法制成供试品溶液, 精密吸取供试品溶液和对照品
溶液各 10 ΛL 注入液相色谱仪, 按上述色谱条件测
定峰面积, 按外标法计算异秦皮啶的含量, 结果见
表 1。
3　讨论
311　异秦皮啶即 72羟基26, 82二甲氧基香豆素, 其
本身具有一定的升华性。因此, 本实验在对样品处理
过程中, 温度尽可能低, 将误差减少至最小。
表 1　强力宁片中异秦皮啶的含量测定结果 (n= 3)
Table 1　Isofrax id in in Qiangl in ing Tablet (n= 3)
批号
异秦皮啶含量ö(m g·片- 1) 批号 异秦皮啶含量ö(m g·片- 1)
20000101 0. 245 20000106 0. 243
20000102 0. 224 20000107 0. 235
20000103 0. 216 20000108 0. 210
20000104 0. 258 20000109 0. 232
20000105 0. 205 20000110 0. 229
312　本实验分别对提取溶剂 (甲醇、氯仿、乙醚)、提
取方式 (索氏提取、超声提取) 和提取时间 (15, 30,
45, 60 m in)进行优选, 结果用氯仿作溶剂, 超声提取
45 m in 效果最佳。
313　本实验以甲酸作为扫尾剂, 比较了加入不同浓
度的甲酸 (0101% , 0102% , 0105% , 011% , 015% ,
1% ) 对色谱峰形的影响。结果当甲酸浓度为 0102%
和 0105% 时, 得到了峰形很好的色谱峰, 以后随着
甲酸浓度的再增加, 色谱峰形没有太大改变, 为保护
色谱柱, 延长其使用寿命, 使用 0102% 甲酸。
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HPLC 法分离与检测 20 (S ) -人参皂苷 Rg3 和 20 (R ) -人参皂苷 Rg3
汤明辉1, 2, 姜志宏2, 赵中振2, 张钧寿1Ξ
(11 中国药科大学 药剂教研室, 江苏 南京　210009; 21 香港浸会大学中医药学院, 香港)
　　20 (R ) 2人参皂苷R g3 是我国 21 世纪批准的第
一个中药单体新药, 拥有完全自主知识产权。实验与
临床研究表明, 人参皂苷R g3 具有抑制肿瘤细胞的
增殖、浸润, 对抗肿瘤细胞的转移, 促进肿瘤细胞凋
亡, 提高机体免疫能力等作用[1 ]。目前对于 20 (S ) 2
人参皂苷R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷 R g3 的抗肿瘤作
用和两种构型的效价差别, 尚没有进行系统的比较
和研究。因此, 能同时检测和分离 20 (S ) 2人参皂苷 R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷R g3 的分析方法, 对保证和稳定药品的质量具有重要意义。通过反复的试验和摸索, 本实验建立了H PL C 法梯度洗脱分离样品中的 20 (S ) 2人参皂苷R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷R g3, 同时以二极管阵列检测器定量测定其含量。1　仪器与试药H ew let t Packard A gilen t 1100 H PL C 系统, 含在线真空脱气机, 高压四元梯度泵, 二极管阵列检测
·082· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 3 期 2004 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2003205207
器 (DAD ) , H P Chem sta t ion fo r L C R ev. A. 06. 03
(509) ; T hermo lyne D ri2Bath w ith T echne Samp le
Concen tra to (U SA )。
20 (S ) 2人参皂苷 R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷 R g3
对照品 (自制, 经光谱学鉴定) , 红参 (经香港浸会大
学赵中振博士鉴定) , 参一胶囊 (吉林亚泰制药有限
公司, 批号: 20020915, 20020718)。甲醇 (色谱纯) , 蒸
馏水, 其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
211　对照品溶液的制备: 取 105 ℃干燥至恒重的
20 (R ) 2人参皂苷R g3 对照品约 10 m g, 精密称定, 置
10 mL 量瓶中, 加甲醇适量, 微热使溶解, 放冷, 用甲
醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。
212　模拟供试品溶液的制备: 取 20 (S ) 2人参皂苷
R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷R g3 对照品适量, 置同一量
瓶中, 加甲醇溶解, 并稀释至刻度, 备用。
213　红参供试品溶液的制备[2 ]: 称取红参粉末 2 g,
精密称定, 加甲醇适量, 加热回流 6 h, 滤过, 挥干溶
剂, 残渣溶解于 10 mL 蒸馏水中, 用 6 mL 二氯甲烷
萃取, 水层继续用水饱和的正丁醇萃取 3 次 (8, 5, 3
mL ) , 合并正丁醇层, 氮气吹干溶剂, 加甲醇溶解, 并
定容至 2 mL , 备用。
214　参一胶囊供试品溶液的制备: 取参一胶囊内容 物约 10 m g, 精密称定, 加甲醇 10 mL , 超声波提取 3次, 每次 15 m in, 合并滤液, 挥干溶剂, 加甲醇溶解,并定容至 5 mL , 备用。215　液相色谱条件及分析方法[2～ 4 ]: 色谱柱: Zo r2bax L C218 柱 (416 mm ×250 mm , 5 Λm ) ; 检测波长: 203 nm ; 检测器: DAD 检测器; 柱温: 室温; 流速: 110 mL öm in; 流动相: 乙腈 (A ) 20101% 磷酸水溶液 (B ) , 梯度洗脱: 0～ 10 m in, A 2B (15∶85) , 10～ 25m in, A 2B (35∶65) , 25～ 40 m in, A 2B (50∶50) , 40m in 以后,A 2B (85∶15)。取供试品溶液 20 ΛL , 分别注入液相色谱仪, 进行测定。216　线性关系的考察: 精密吸取对照品溶液 012,014, 016, 018, 110 mL , 分别用甲醇稀释至 1 mL , 摇匀, 得不同浓度的对照品溶液。依次进样 20 ΛL , 以对照品量为横坐标, 峰面积值为纵坐标, 进行线性回归, 得回归方程 Y = - 6616+ 393105X , r= 01999 8。20 (R ) 2人参皂苷R g3 在 4～ 20 Λg 峰面积与进样量呈良好线性关系。217　试验结果: 模拟供试品溶液、红参供试品溶液及参一胶囊供试品溶液的高效液相色谱图见图 1。218　精密度试验: 取同一供试品溶液, 连续进样 7次, 每次 20 ΛL , 依法测定, 结果人参皂苷R g3 峰面积值R SD 为 1144% (n= 7)。
a220 (S ) 2人参皂苷Rg3　b220 (R ) 2人参皂苷Rg3
a220 (S ) 2ginseno side Rg3　b220 (R ) 2ginseno side Rg3
图 1　红参 (A)、模拟供试品 (B)和参一胶囊 (C)的 HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s of Hongshen (A) , simulated solution (B) , and Sheny i Capsula (C)
219　稳定性试验: 取同一供试品溶液, 每隔 4 h 进
样, 依法测定, 人参皂苷 R g3 峰面积值的 R SD 为
1139% (n = 7)。结果表明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2110　重现性试验: 精密称取同一批号样品 5 份, 依
法制备供试品溶液, 并测定样品中 20 (R ) 2人参皂苷
R g3 含量。结果 5 次测定的R SD 为 1149% , 表明方
法重现性良好。
3　讨论
311　从图 1 可见, 20 (S ) 2人参皂苷 R g3 和 20 (R ) 2 人参皂苷R g3 在本色谱条件下能达到基线分离, 其分离时间在 25～ 26 m in, 且 20 (S ) 2人参皂苷R g3 出峰较早, 20 (R ) 2人参皂苷R g3 出峰较晚。用梯度洗脱法得到的 20 (S ) 2人参皂苷R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷R g3 的H PL C 图谱, 分离度好、重现性高, 可作为鉴别人参皂苷R g3 顺反结构和质量控制的依据, 同时也为手性拆分这两种异构体提供了参考。312　红参供试品中检出人参皂苷R g3, 其中 20 (S ) 2人参皂苷R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷 R g3 峰高和峰面积基本相当, 两者含量接近于 1∶1。据文献报道[1 ] ,
·182·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 3 期 2004 年 3 月
20 (R ) 2人参皂苷R g3 抗肿瘤活性强于 20 (S ) 2人参
皂苷R g3, 因此可以考虑采用适当的方法和手段, 使
20 (S ) 2人参皂苷R g3 构型转化为 20 (R ) 2人参皂苷
R g3 构型, 以提高活性更强的 20 (R ) 2人参皂苷 R g3
的产率。
　　试验结果还显示, 参一胶囊中主要含有 20 (R ) 2
人参皂苷R g3, 20 (S ) 2人参皂苷R g3 构型含量很低,
主成分含量达标示量的 95% 以上, 能完全保证产品
的质量。
313　试验中曾使用了乙腈2异丙醇2水, 乙腈2水2醋
酸等多种不同的流动相组分和配比, 均未实现 20
(S ) 2人参皂苷 R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷 R g3 的基线
分离, 最后在乙腈2水系统中加入 0101% 磷酸, 获得
较好的分离效果。
　　本色谱分离系统采用DAD 为检测器, 以乙腈2 0101% 磷酸水溶液作梯度洗脱, 在 203 nm 处测定20 (S ) 2人参皂苷 R g3 和 20 (R ) 2人参皂苷R g3, 避免了溶剂末端吸收的影响, 但检测限较高; 若能将该分离系统结合通用检测器 EL SD , 则既可提高检测灵敏度, 又可达到基线分离的目的。References:[ 1 ]　Zhao Y. A dvance in studies on an ticarcinogen ic effects of 20(R ) 2ginseno side Rg3 [J ]1 Ch in C lin O ncology (临床肿瘤学杂志) , 2001, 6 (1) : 812821[ 2 ]　Kwon SW , H an S B, Park I H , et a l. L iqu id ch rom atograph icdeterm ination of less po lar ginseno sides in p rocessed ginseng[J ]1 J Ch rom a tog r A , 2001, 921: 33523391[ 3 ]　Jeong S I, Kim C S, L ee Y G, et a l. Separation of 20 (R ) and20 (S ) p ro sapogen in isom ers of ginseno side2Rg2 and2Rg3 fromginseng sapon ins by reversed2phase h igh perfo rm ance liqu idch rom atography [J ]1 A na l S ci, 1998, 11 (5) : 40424081[ 4 ]　Park M K, Park J H , H an S B, et a l. H igh2perfo rm ance liq2u id2ch rom atograph ic analysis of ginseng sapon ins using evapo2rative ligh t2scattering detection [J ]1 J Ch rom a tog r A , 1996,736 (122) : 772811
金芍抗病毒胶囊中绿原酸及总酚酸的含量测定
茅仁刚1, 林东昊1, 陶建生2, 胡　岗1Ξ
(11 上海师范大学, 上海　200234; 21 上海中医药大学, 上海　200032)
　　金芍抗病毒胶囊由金银花、赤芍、柴胡等组成,
是采用大孔树脂精制工艺制备的现代中药复方制
剂, 具有较显著的抗病毒活性, 适用于病毒性感冒的
治疗。金银花为方中君药, 绿原酸是其中的主要活性
成分。本实验采用R P2H PL C 和紫外分光光度法分
别对制剂中的绿原酸和总酚酸进行了定量分析。
1　仪器与材料
日本岛津 UV —2401PC 紫外2可见分光光度
计; 日本岛津L C—6A 型高效液相色谱仪, SPD—
6AV 紫外检测器, CR—4A 数据处理器。
绿原酸对照品 (中国药品生物制品检定所, 批号
07532200111) , 乙腈、甲醇为色谱纯, 盐酸为分析纯。
金芍抗病毒胶囊由本实验室自行制备。
2　方法与结果
211　绿原酸的H PL C 法含量测定
21111　色谱条件: 色谱柱: L una C18 OD S (2) (250
mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 乙腈2水 (18∶82, 以
H 3PO 4 调节 pH 2) ; 检测波长: 327 nm ; 流速: 1 mL ö
m in; 柱温: 30 ℃; 进样量: 20 ΛL。 21112　对照品溶液的制备: 精密称取绿原酸对照品215 m g, 置 25 mL 量瓶中, 用 0105 mo löL 盐酸溶解, 定容。临用前过 0145 Λm 滤膜, 续滤液作为绿原酸对照品溶液 (100 ΛgömL )。21113　供试品溶液的制备: 取金芍抗病毒胶囊 10粒, 倾出内容物, 混匀, 精密称取 25 m g, 置 25 mL 量瓶中, 加 0105 mo löL 盐酸, 超声 30 m in 使溶解, 定容。临用前过 0145 Λm 滤膜, 续滤液作为供试品溶液。21114　线性关系考察: 取绿原酸对照品溶液, 依次配制成浓度为 5, 10, 20, 40, 60, 80, 100 ΛgömL 的溶液, 分别取上述溶液 20 ΛL 注入高效液相色谱仪, 在上述色谱条件下进行色谱分析。以对照品溶液浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制绿原酸的标准工作曲线, 得线性回归方程为 Y = 1 62111X - 76713, r=01999 9。绿原酸在 5～ 100 ΛgömL 与峰面积呈良好的线性关系。21115　精密度试验: 精密吸取绿原酸对照品溶液(60 ΛgömL ) , 连续进样 5 次, 每次 20 ΛL , 按上述色
·282· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 3 期 2004 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2003205213
作者简介: 茅仁刚 (1968—) , 男, 硕士, 工程师, 执业药师, 现任上海师范大学新康制药厂技术副厂长, 主要从事中药、天然产物活性成分
和制剂研究。T el: (021) 64322290　E2m ail: rgm ao@eastday. com