全 文 ：·1388· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
0．00，034 |6 7 25．ul j3 4 4160 50 2
s1一大兴安岭加格达奇S2一大兴安岭塔河 S3一桃山神树S4一
绥棱北股流s5一绥棱义气松s6一伊春市翠峦 s7一伊春市红
星s8一伊春市上甘岭s9一伊春市新青桦林
S1一Daxing’anling—JiagedaqiS2一Daxing’anling-Tahe
S3一Taoshan—Shenshu4一Suileng—Beiguliu
S5Suileng—YiqisongS6一Yiehun—Cuiluan
S7一YichunHo gxingS8YichunShangganling
S9一Yichun—Xinqinghualin
图3毛脉酸模样品HPLC指纹图谱共有模式图
Fig．3ChromatogramofmutualodeofHPLC
fingerprintofR．gmelinisamples
长下指纹图谱，发现检测波长为254nm时色谱图
所包含的信息量最大，且各色谱峰分离较好。
3．3 采用HPI。C梯度洗脱法对毛脉酸模药材进行
了指纹图谱的研究，实验证明，该方法可操作性强、重
现性好，可作为毛脉酸模药材指纹图谱研究的基础。
3．4 按本方法建立的由9批药材构成的共有模式
图和1、4、8号样品色谱图相比较，构成共有模式9
批样品的相似度较高，均在90％以上，而1、4、8号
样品的相似度均低于90％。从图1可以看出，两类
毛脉酸模样品差异主要集中在10、15、26、28、29号
峰的峰形及其相对高度上，构成共有模式样品的色
谱指纹图谱中10、15号峰明显较高，经研究是蒽醌
苷类成分。在第1类的4号(桃山跃进)、8号(尚志
市帽儿山)样品中15、26、28、29号峰较高，其中28
号峰(大黄素)、29号峰(大黄酚)为蒽醌苷元类成
分；在l号(大兴安岭新林)样品中26、28、29号峰
的峰位高，其中26号峰(酸模素)的相对高度较其
他样品均高，可能与1号样品采于水湿洼地有关，
故怀疑酸模素的积累可能受水分的影响较大，具体
影响过程有待进一步研究。
3．5本实验先对所有样品进行聚类分析，然后选择
好的一类样品来建立共有模式，并将整个色谱图导人
中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，生成共有模
式，计算相似度。结果表明，相似度分析结果与系统聚
类结果一致，两种方法得到了相互验证。对于待测样
品，只需测得该样品的色谱指纹图谱，计算样品相似
度，即可评价其质量。本研究仅收集了12个产地的毛
脉酸模药材，如能收集更多，采用分析方法获取更多
化学信息，并以代表临床药效的药理实验进行验证，
则对毛脉酸模的质量评价会更加完善和科学。
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不同树龄邳州银杏叶在不同采收期指纹图谱比较
鞠建明1，段金廒1，钱大玮1，朱玲英1，张绍君2，郭巧生3
(1．江苏省中医药研究院江苏省现代中药制剂工程技术中心，江苏南京210028；
2．江苏银杏生化集团股份有限公司，江苏邳州 221300；3．南京农业大学，江苏南京210095)
摘要：目的 比较江苏道地药材邳州银杏叶在不同采收期的指纹图谱。方法采用HPLC—DAD方法。色谱条件
为：色谱柱：AlhimaC18柱(250Film×4．6nlm，5t』rn)；流动相：乙腈(A)一0．5％磷酸水(B)进行梯度洗脱，15％～
27％A(o～40rain)，27％～15％A(40～60min)，15％A(60～75rain)；体积流量：1mL／min；柱温：20C；检测
波长：36011113．。并应用计算机辅助相似性评价系统对银杏叶指纹图谱进行了相似度分析。结果同一树龄不同采
收期的银杏叶中，二至四年生银杏叶分别在不同采收期指纹图谱相似度较高(>o．90)；五年生和六年生银杏时分
收稿日期：2004—11—12
基金项目：国家科技部“中药现代化研究与产业化开发”资助项目(99—92901—01AE99206)
作者简介：鞠建明(1972一)，男，江苏泰兴人，硕士，助理研究员，主要从事中药质量标准研究及制剂工艺研究。
Tel：(025)85639640E—mail：jjm405@sina．corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1389·
别在不同采收期指纹图谱相似度变化范围较大(o．86～O．97)。同一采收期不同树龄的银杏叶中，5～7月不同树龄
银杏叶指纹图谱相似度较高(>o．90)；8～10月不同树龄银杏叶指纹图谱相似度变化范围较大(o．84～o．99)。结
论本研究为控制邳州银杏叶内在质量建立了指纹图谱方法，为银杏叶的合理采收提供了科学依据。
关键词：银杏叶；HPLC；指纹图谱；计算机辅助相似性评价系统；相似度
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)09—1388～04
ComparisonoffingerprintsofGinkgobilobaleavesatdifferentages
oftreesindifferentcollectingseasons
JUJian—min91，DUANJin—a01，QIANDa—weil，ZHULing—yin91；ZHANGShao—jun2。GUOQiao—sheng
3
(1．CenterofModernPreparationEngi eeringandTechniqueofChineseMateriaMedicainJiangsuProvince，Jiangsu
AcademyofTraditionalChineseMedicine，Nanjing210028，China；2．JiangsuBiochemistryofGinkgDbilob以
GroupCo．，I。td．，Pizhou221300，China；3．NanjingAgriculturalU iversity，Nanjing210095，China)
Abstract：ObjectiveTo omparethefingerprintsofPizhouGinkgobilobaleavesatdifferenttrees
agesindifferentcollectingseasons．MethodsHPLC—DADwasapplied．Theconditionswerea follows：
AlhimaC18column(250nm×4．6mm，51am)；mobilephase：acetonitrile(A)一O．5％phosphoricacidsolu—
tion(B)(gradientelution)，15％一27％A(o一40min)，27％～15％A(40—60min)，15％A(60～75
min)；flowrate：1mL／min；columtemperature：20C；detectingwavelength：360nm．ComputerAid d
SimilarityEvaluationSystemwasusedtoanalyzethsimilarityofG．bilobale ves．ResultsAmongthe
same—agebutdifferentcollecting～time，thes ilaritiesoffingerprintsofG．biloba1e vesfrom2to4aged
treesarerelativelyhigher(>0．90)；butthosefrom5 o6agedtreeschangefrom0．86to0．97．Among
thedifferent—agebutsamecollecting—time，thes ilaritiesoff ngerprintsofG．bilobdleavescollectedfrom
MaytoJulywererelativelyhigher(>0．90)：butthosefromAug
0．99．ConclusionTheresearchhasestablishedamethodofusingfi
tyofPizhouG．bilobale vesandhasprovidedascientificbasisfor
leaves．
Ust
nge
oOctoberchangedfrom0．84to
rprinttocontroltheinternalqu i—
reasonablecol ctionofG．biloba
Keywords：GinkgobilobaI—leaves；HPLC；fingerprint；ComputerAidedSimilarityEvaluationSys—
tem；similarity
银杏叶为银杏科植物银杏GinkgobilobaL．的
干燥叶rIj。银杏叶主要含黄酮类(flavonoids)和萜
烯内酯类(terpenes)化合物，具有扩张血管、改善
脑循环、抑制血小板活化因子(PAF)作用。
曾经制定了邳州银杏叶黄酮类成分和内酯类成
分测定方法，并对其化学成分进行了系统的分析评
价研究口“]，但是由于银杏叶中成分呈复杂化、多样
化特性，仅几个指标成分的测定不能全面反应其内
在质量，而指纹图谱能够全面反应银杏叶所含化学
成分的种类、数量及相互之间的比例，进而有效地表
征其内在质量。本实验以梯度洗脱方法建立了银杏
叶指纹图谱，方法学研究表明该法稳定性好，可操作
性强，为全面控制银杏叶质量提供了实验依据。通过
不同树龄银杏叶在不同采收期指纹图谱相似度分
析，为合理采集银杏叶提供指导。
1仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(Alliance2695四元
泵及自动进样系统，996二极管阵列检测器，Em—
power色谱工作站)；KQ一250E型医用超声波清洗
器(昆山市超声仪器有限公司)；Millipore纯水器。
乙腈(HPI。C)，磷酸(AR)，超纯水，其他试剂均为
分析纯。
药材采自邳州银杏叶生产基地港上、铁富两镇，
每样在同一实验田采集3个点，每一点采集3～6株
银杏叶全株，混匀，置阴凉通风处，晾至近于，置干燥
箱于50C烘干，真空包装，于避光、阴凉处存放。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：AlltimaC。8柱(250mm×
4．6mm，5肛m)；流动相：乙腈(A)一0．5％磷酸水
(B)进行梯度洗脱，15％～27％A(0～40min)，
27％～15％A(40～60min)，15％A(60～75
min)；体积流量：1mI。／min；检测波长：360nm；柱
温：20C。
2．2供试品溶液的制备Ⅲ：称取四年生银杏叶8月
中旬采集样品粉末1．0g，置100mL三角烧瓶中，
加入25mI。50％乙醇，超声处理40min，取上清
液，滤过，即得。
2．3精密度试验：取同一供试品溶液，连续进样5
万方数据
·1390· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
次，考察各色谱峰的相似度，结果表明：5张色谱图
与其共有模式的相似度分别为0．997、0．996、
0．995、0．999、0．998，说明仪器的精密度较好。
2．4重现性试验：取供试品5份，分别按供试品制
备方法制备，进样，测定，考察色谱峰的相似度，结果
表明：5个供试品色谱图与其共有模式的相似度分
别为0．994、0．994、0．999、0．999、0．995，说明该法
重现性较好。
2．5稳定性试验：取供试品溶液分别在0、4、8、12、
16、20、24h进行测定，考察色谱峰与其共有模式比较
的相似度，结果表明：不同时间点采集的色谱峰相似度
分别为0．996、0．992、0．983、0．996、0．995、0．999、
0．998，说明供试品溶液在24h内稳定性较好。
2．6样品测定：将不同树龄银杏叶在不同采收期采
集的35批样品分别制备供试品溶液，进样20弘I。，
按选定的HPLC色谱条件分析测定，采集60min
的数据，并将采集的数据导出，供计算机辅助相似性
评价系统进行评价。
2．7应用计算机辅助相似性评价系进行数据处理：
将采集的数据导人中药指纹图谱相似度计算软件
(Ver1．315，中南大学中药现代化研究中心研制)，
经数据剪切、等长处理、数据平移，然后将谱峰进行
自动匹配，接着进行全谱相似度分析。求出各谱峰的
共有模式(同一树龄的银杏叶不同采收期指纹图谱
共有模式图和同一采收期不同树龄的银杏叶指纹图
谱共有模式图各选出1张代表性图谱，见图1、2)及
各谱峰与共有模式比较的相似度，结果见表1、2。
I
，LL一一～lj肌一』b一儿九．～。～jU一
图1 二年生银杏叶5～10月份采集样品共有模式图
Fig．1CommonpatternofbiennialG．bUobaleaves
collectedfromMaytoOctober
2．8结果
2．8．1由表1可以看出，同一树龄不同采收期的银
杏叶相似度评价中，二至四年生银杏叶不同采收期
样品指纹图谱相似度较高(大于0．90)；五年生和
六年生银杏叶不同采收期样品指纹图谱相似度变化
范围较大(o．86～0．97)。提示二至四年生银杏叶分
别在5～10月不同的生长期所含成分虽然有差异，
图2六月份采集不同树龄银杏叶共有模式图
Fig．2Commonpatternofdifferenttree—aged
G．bilobaleavescollectedinJune
表1 同一树龄的银杏叶不同采收期指纹图谱相似度评价
TableEvaluationoffi gerprintsimilarity
ofG．bilobaleavesat ametreeages
andifferentcollectingt me
时间树龄——
05—12 06一15 07—15 08—15 09一02 09—16 10一03
二年生0．9500．974 0．9940．9960．9750．9840．959
三年生0．9380．9900．991 0．981 0．9880．9690．955
四年生0．9460．971 0．9890．9280．9570．9850．960
五年生0．8600．9040．9790．9320．8400．9230．895
六年生0．9110．9190．9290．9260．867 0．9460．892
表2 同一采收期不同树龄的银杏叶指纹图谱相似度评价
Table2 Evaluationoffi gerprintsimilarityof
G．bilobaleavesat amecollecting
timeandifferenttreeages
时I司 二年生 三年生 四年生 五年生 六年生
05—12 0．916 0．94l 0．989 0．987 0．958
06—15 0．922 0．970 0．99l 0．985 0．968
07—15 0．929 0．970 0．996 0．956 0．940
08—15 0．928 0．930 0．959 0．885 0．889
09—02 0．854 0．912 0．993 0．901 0．956
09—16 0．897 0．903 0．988 0．849 0．916
10一03 0．921 0．926 0．967 0．861 0．912
但成分的组成和比例有较好的一致性；五年生和六
年生银杏叶分别在5～10月份不同的生长期成分
的组成和比例有一定的变化。
2．8．2由表2可以看出，同一采收期不同树龄的银
杏叶指纹图谱相似度评价中，5～7月不同树龄银杏
叶指纹图谱相似度较高(大于0．90)；8～10月不同
树龄银杏叶指纹图谱相似度变化范围较大(0．84～
0．99)。提示不同树龄银杏叶分别在5～7月所含成
分的组成和比例有较好的一致性，8～10月所含成
分的组成和比例有一定的变化。鉴于邳州银杏叶生
产基地药农传统采药时间为8月底到9月初，为了
保证所采集银杏叶质量有较好的一致性，建议采叶
时间提前到7月份。
～
三～
一
=欠儿ii儿l●ro撒Ⅲl～离一
一
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一
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万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1391·
3讨论
3．1银杏叶高效液相色谱图可分离出90多个峰，
如果按照国家药典委员会关于“中药注射剂指纹图
谱研究的技术要求(暂行)的通知”进行谱峰分析，计
算共有峰相对保留时间和相对峰面积，面积小的峰
就会作为非共有峰或未被识别出来，这样部分信息
会被丢失，而采用计算机辅助相似性评价系统软件
进行全谱相似度计算，对每一个采集点信息进行处
理，能全面反映谱峰之间的相似关系。
3．2在方法学考察中，本研究对精密度、稳定性、重
现性实验数据应用相似度软件处理，结果相似度均
应在0．90以上，符合指纹图谱研究技术要求。
3．3 将不同树龄银杏叶在不同采收期采集的35
批样品进行相似度分析，剔除相似度小于0．90的
样品，建立相似度大于0．90的样品共有模式，作为
邳州银杏叶的标准指纹图谱，以此作为银杏叶投料
标准。
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近红外漫反射光谱技术测定牛膝中蜕皮甾酮
白 雁1，余振喜1，孙素琴2，朱风云1，王东1，陈志红1
(1．河南中医学院，河南郑州450008；2．清华大学分析中心，北京100084)
摘要：目的利用近红外漫反射光谱技术和偏最zb--乘法测定牛膝中蜕皮甾酮。方法近红外漫反射光谱技术
和偏最dx--乘法。结果所建立预测方程样品的预测值和真实值之间的相关系数为0．9489，该法的建立证明了近
红外漫反射光谱技术应用于中药中化学成分的测定的可行性。结论 同其他测定方法相比该法操作简单、速度快、
效率高、无污染、费用低、无需复杂的前处理，可以直接对大量未知样品进行测定。
关键词：牛膝；蜕皮甾酮；近红外漫反射光谱
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)09—1391—04
DeterminationofecdysteroneinRadixAch>rranthisBidentalae
bynear-infrareddiffusereflectancespe troscopy
BAIYanl．YUZHen—xil，SUNSu～qin2，ZHUFeng—yunl，WANGDon91，CHENZhi—hon91
(1．HenanCollegeofTraditionalChineseMedicine，Zhengzhou450008，China；
2．AnalyzingCentreofTsinghuaUniversity，Beijing100084，China)
Abstract：ObjectiveTodetermineecdysteronecont nti RadixAchyranthisBidentalaebynear—in—
flareddiffusereflectancespectroscopy(NIRDRS)combinedwithpartialleastquares(PLS)．Methods
NIRDRSandPLS．ResultsThecorrelationcoefficientofthequantitativemath maticsmodelbetweenthe
predictionandthetruevalueswas0．9489．ItiSfeasibletoapplingtheaboveestablishedmethodt deter—
minationofchemicalconstituentsinChinesemateriamedica．ConclusionComparedwithothermethods，
themethodissimple，rapid，highefficient，lowexpenditure，nopollutionandwithpreparationundoneand
issuitforlargequantityofunknownsamples．
Keywords：RadixAc砂ranthisBidentalae；ecdysterone；near—infrareddiffusereflectancespe troscopy
(NIRDRS)
收稿日期：2004—12-12
万方数据
不同树龄邳州银杏叶在不同采收期指纹图谱比较
作者： 鞠建明， 段金廒， 钱大玮， 朱玲英， 张绍君， 郭巧生， JU Jian-ming， DUAN Jin-ao
， QIAN Da-wei， ZHU Ling-ying， ZHANG Shao-jun， GUO Qiao-sheng
作者单位： 鞠建明,段金廒,钱大玮,朱玲英,JU Jian-ming,DUAN Jin-ao,QIAN Da-wei,ZHU Ling-
ying(江苏省中医药研究院江苏省现代中药制剂工程技术中心,江苏,南京,210028)， 张绍君
,ZHANG Shao-jun(江苏银杏生化集团股份有限公司,江苏,邳州,221300)， 郭巧生,GUO
Qiao-sheng(南京农业大学,江苏,南京,210095)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(9)
被引用次数： 6次

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