全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月· 807·
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载粉防己碱生物材料的制备与定量测定
崔元璐1，戚爱棣2，韩 毙2，李克峰1，姚康德1
(1．天津大学，天津300072}2．天津中医学院，天津300193)
制备载有药物和细胞因子的生物材料和研究生
物材料对药物与细胞因子的控制释放已经成为组织
工程的研究热点之一[1]。传统中药的某些有效成分
具有与细胞因子类似的生理活性和广泛的药理作
用，且价格低廉，理化性质相对稳定，有作为细胞因
子和抗生素替代物应用于组织工程的良好前景。本
课题组的研究表明，低质量浓度的粉防己碱在体外
能够促进软骨细胞的增殖，维持软骨细胞的功能表
达，并具有抗炎、抗变态反应和抗凝血作用。以相分
离一溶剂置换一冷冻干燥法制备载有粉防己碱的聚乳
酸多孔组织工程支架材料，通过扫描电镜分析材料
形貌；利用高教液相色谱法测定载药支架材料中的
载药量。
1材料与仪器
左旋聚乳酸(poly—L—lactica id，PLLA，％为
1．08×105g／mol，美国麻省大学化工系)，粉防己碱
(中国药品生物制品检定所)，三氯甲烷、四氢呋喃、
甲醇等化学试剂均为市售分析纯，色谱流动相用甲
醇为色谱纯，水为超纯水，二己胺为分析纯。
AE200精密电子天平[梅勒一脱利多仪器(上
海)有限公司]，ChristAlpha2—4冷冻干燥机，
PhilipsXL30扫描电子显微镜，Agilenti00高效
液相色谱仪，G131IA四元泵。G1322A脱气机，
G1316A柱温箱，1314AUV可变波长检测器，HP
Rev．A．0501化学工作站。
2方法与结果
z．1材料的制备
2．I．1聚乳酸支架材料的制备o]：精密称取1．5g
聚乳酸，放入200mL磨口三角瓶中，加入50mL四
氢呋晡，在60℃水浴中不断振摇，使其完全溶解，配
制成质量浓度为3％的溶液。将4mL聚乳酸溶液加
入到磨El玻璃称量瓶中，盖严盖子，放入5℃的冰箱
中8h，使溶液凝胶化。取出称量瓶，打开盖子，放入
去离子水中置换四氢呋哺。每隔8h换水1次，连续
置换48h。将凝胶连同玻璃称量瓶一起取出，置于
一40℃低温冰箱中冷冻，使其冻结。取出玻璃称量
瓶，放人冷冻干燥机中，使其完全干燥。取出称量瓶
中的支架材料，备用。
2．1．2含有粉防己碱的聚乳酸支架材料的制备：精
密称取10mg粉防己碱，溶于0．5mL三氯甲烷中，
备用。精密称取1．5g聚乳酸，放人200mL磨口三
角瓶中，加入50mI，四氢呋晡，然后用移液器精密
量取150p．I。粉防己碱三氯甲烷溶液，加入三角瓶
中，在60℃水浴中不断振摇，使其完全溶解，配制成
含有粉防己碱的聚乳酸溶液。将4mL聚乳酸溶液
加入到磨口玻璃称量瓶中，按聚乳酸支架材料的制
备项下方法操作，即得。
2．1．3材料形貌分析：采用PhilipsXL30扫描电
子显微镜观察测试。用不锈钢剃刀片切割材料，将材
料的表面、断面经离子溅射仪喷金镀膜后进行观察，
见图1。可见两种生物材料都由均匀分布的细小纤
维构成，具有相互贯穿的通孔结构，两者(孔隙率、纤
鏊銎品曹；鸷装莒纂备学基金资助项目(303。0457)，中国博士后科学基金资助项目(2004∞5D149)
万方数据
·1808· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月
维直径、纤维问孔隙尺寸)没有明显差别。从形貌角
度来说，载药生物材料适合作为软骨组织工程支架
材料使用。
围1聚乳酸生物材料(A)和含粉防己碱的
聚乳馥生物材料(B)的扫描电镜图片
Fig．1SEMpicturesofPLLAbiomaterials(A)and
tetrandrine一10adedPLLAblomaterials(B)
2．2 HPLC法测定粉防己碱
2．2．1色谱条件：色谱柱(prontosil120—5一C18-ace
A—APS5．0pm)；流动相：甲醇一0．3％二己胺(80I
20)}体积流量：0．8mL／min；测定波长：282Dm；柱
温：25℃。
2．2．2对照品溶液的制备：精密称取粉防己碱对照
品1．15mg，置于10mL量瓶中，甲醇溶解并加至刻
度，制成0．115mg／mL的对照品溶液。用0．45pm
微孔滤膜滤过，作为进样溶液。
2．2．3供试品溶液的制备：精密称取载粉防己碱生
物材料0．1001 g，置于50mL磨El三角瓶中，加入
10mL甲醇，静置1h，超声提取30min，抽滤，滤液
减压回收甲醇至干。残留物用甲醇溶解，转移至2
mL量瓶中，加甲醇至刻度，用0．45p．m微孔滤膜滤
过，即得。
2．2．4 空白试验：取不含粉防己碱的生物材料
0．i002g，按供试品溶液的制备方法制得空白试
液，进行色谱分析，结果表明在对照品相应位置无干
扰(图2)。
*一粉肪己碱
*tetrandrine
圈2粉防己碱对照品(A)、生物材料(B)和
空白生物材料(c)的色谱田
Fig．2HPLCchromatogramsftetrandrlnereference
substanee(A)．tetrandrine—loadedPLLA
blomaterlals(B)，andPLLAbiomaterlals(C)
2．2．5标准曲线的绘制：精密吸取粉防已碱对照品
溶液2．5、5．0、7．5、10．0、12．5、15、17．5、20．0pL，
进样测定，记录色潜图。备质量浓度相应的峰面积经
统计处理，求得回归方程为Y一1009．59302C，
r=0．99995，表明进样量在0．29～2．30pg内线性
关系良好。
2．2．6精密度试验：精密吸取粉防己碱对照品溶液
10“L，连续进样5次，峰面积RSD为1．52％。
2．2．7稳定性试验：取供试品溶液，于0、2、4、6、8、
12h进样10”L，结果12h内粉防己碱峰面积积分
值基本稳定，RSD为3．58％。
2．2．8加样回收率试验：精密称取同一批等量载粉
防己碱生物材料5份，每份含粉防己碱约120,ug，分
别加入粉防已碱对照品115．0pg，制备供试品溶
液，进样10”L，进行色谱分析，计算加样回收率，结
果平均回收率为98．05％，RSD为3．46％。
2．2．9载药量的测定：精密称取载粉防己碱生物材
料适量，制备供试品溶液，进行色谱分析，计算载粉
防已碱生物材料的载药量。共测定了2批样品，每批
测定3个样本，粉防已碱的质量分数分别为1．528、
1．474mg／g，载药率分别为76．4％、73．7％。
3讨论
生物材料制备中先将聚乳酸溶解在四氢呋喃
中，在低温条件下形成聚乳酸的凝胶。因为四氢呋哺
与水互溶，以去离子水置换四氢呋喃。聚乳酸不溶于
水，四氢呋喃是聚乳酸的良溶剂，利用聚乳酸在良溶
剂中溶胀，链段伸展，在不良溶剂中链段收缩的过
程，使聚乳酸凝胶破坏，链段收缩，形成纳米尺度的
聚乳酸纤维，构建纤维多7L支架材料。
由于含有粉防己碱的聚乳酸支架材料制备过程
中用去离子洗脱置换四氢呋喃，致使一部分粉防己
碱损失，因此有必要测定支架材料的实际载药量和
载药率。HPLC法是中药制剂有效成分测定和质量
控制的常用方法，结果表明采用此法测定载药聚乳
酸支架材料中的粉己碱简便、有效。
由于《中国药典92000年版中没有涉及粉防已
碱测定色谱条件中流动相的选择，所以本实验比较
了文献报道o“3的不同流动相体系：甲醇一乙醚一三己
胺(】00：1：0．05)、甲醇一水一三乙醇胺(85：15：
0．25)、三氯甲烷一甲醇一氨水(30：68．9：1．1)。结果
以甲醇一0．3％二己胺(80：20)作为流动相，生物材
料中粉防己碱的分离效果最好。
稳定性试验RSD值偏大，是因为o～12h时间
段内，峰面积数值逐渐增加(从1062．4升高至
1 192．3)，即测得的粉防己碱增加。其原因可能是供
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月· 809·
试品溶液中仍然有与聚乳糖酸结合的粉防己碱，随
着时问的推移，逐渐将防己碱释放出来，导致溶液中
粉防己碱的测量值升高。提示在今后研究中，应当在
供试溶液稳定后再取样测定，以免产生误差。
粉防己碱对照品在190～400nm作光谱扫描，
最大吸收波长有2个，分别为224nlTl和282nm。由
于282nm处干扰少，故选择282nm作为粉防己碱
的检测波长。
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漆酶提取黄芪中黄芪皂苷的研究
蒲军，郭梅。杜连祥。，路福平
(天津科技大学生物工程学院工业微生物重点实验室，天津300222)
漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，是最主要的3
种术质素降解酶之一，可以催化氧化酚类化合物脱
去羟基上的电子或质子，形成自由基，导致酚类及木
质素类化合物裂解，有效的降解木质素。近年来，有
关漆酶的研究越来越受到国际上的重视，它在保护
环境、造纸工业、食品工业及其他领域均有很大的研
究价值和应用潜力。
中药中的杂质大多为淀粉、果胶、蛋白质等，可
选用合适的酶予以分解除去。目前，应用较多的是纤
维素酶。大部分的中药材的细胞壁是由纤维素构成，
植物的有效成分往往包裹在细胞壁内，用纤维素酶
酶解破坏植物细胞壁，有利于有效成分的提取。将漆
酶等木质素降解酶应用于中药提取的报道较少。本
实验将漆酶用于黄芪中有效成分的提取，以期达到
提高提取率、缩短提取时间、减少能耗和有效保存中
药有效成分生物活性的目的。
1材料
漆酶生产菌来自杂色云芝Coriolusversicolor
(Fr．)Quel，购自中国科学院；黄芪甲苷对照品，购
自中国药品生物制品检定所，批号0781—9908{黄芪
饮片购自天津中新药业公司，经本校王海宽鉴定为
蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch．)Bge．
var．mongholicus(Bge．)Hsiao的干燥根l其他试
剂均为国产分析纯。
2方法
2．1漆酶粗酶液的制备：取保藏的杂色云芝斜面进
行活化培养，挑取适量菌丝转接于PDA培养基平
板上，25℃静置培养6d；用打孔器取直径为8mm
琼脂块按一定的接种量接入三角瓶中，25℃振荡培
养(150r／min)，定期检测酶活；到第13天下摇床，
发酵液经8层纱布滤过后于12000r／rain离心2
min，取上清液，测定酶活后一70℃保存，使用前再
测酶活。
2．2黄芪饮片的水浸提取及酶解浸提“]：将黄芪饮
片粉碎后过40目筛，称取lg加入适量水混匀，置
于一定温度的水浴锅中，保温水浸提取一定时间后
滤过，取滤液。同样取1g黄芪粉加入适量水混匀，
用盐酸将pH值调至漆酶反应的最适pH值，温度调
至漆酶反应的最适温度，单独加入漆酶粗酶液处理
一定时间，然后浸提，滤过，取滤液。
2．3供试品溶液的制备o。]；取全部滤液用15mL
水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，用15mL
40％氨试液洗涤2次，用15mL正丁醇饱和水洗涤
2次，于70℃旋转蒸干正丁醇，用2mL甲醇溶解残
渣，即得。
2．4标准曲线的制备“]：称取5mg黄芪甲苷对照
收稿日期：200503—25
作者筒介：荽m孟翟：；：名：墨i巴型达州人’硕士研究生’研究方向为微生物与生化制药口Tql∞2∞60270040
*通讯作者杜连祥Tel：(022)60270037
万方数据
载粉防己碱生物材料的制备与定量测定
作者： 崔元璐， 戚爱棣， 韩崑， 李克峰， 姚康德
作者单位： 崔元璐,李克峰,姚康德(天津大学,天津,300072)， 戚爱棣,韩崑(天津中医学院,天津
,300193)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(12)

参考文献(5条)
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分析测试技术与仪器 1995(01)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200512018.aspx