全 文 ：·论　著·
粉防己碱提高铜绿假单胞菌对氧氟沙星
敏感性的体外试验研究
黄勋，徐秀华
（中南大学湘雅医院感染控制中心，湖南 长沙４１０００８）
摘要：目的　研究粉防己碱作为主动外排泵抑制剂提高铜绿假单胞菌对氧氟沙星的敏感性效果。方法　采用
Ｍ－Ｈ琼脂稀释法筛选临床分离的铜绿假单胞菌，同时测定铜绿假单胞菌在与不同浓度的粉防己碱作用不同时间
对氧氟沙星的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）变化。结果　１００、５０、２５、１２．５、６．２５μｇ／ｍｌ等５个不同浓度的粉防己碱在与
耐药铜绿假单胞菌作用６０、１８０ｍｉｎ后，不同菌株原来对氧氟沙星的 ＭＩＣ值可以降低２３～２７倍。结论　可以考
虑将主动外排泵抑制剂粉防己碱作为一种治疗耐药铜绿假单胞菌辅助药物，增强铜绿假单胞菌对氧氟沙星的敏
感性，从而提高抗菌药物疗效。
关键词：粉防己碱；铜绿假单胞菌；氧氟沙星耐药；外排泵；药敏试验
中图分类号：Ｒ３７８．９９＋１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００５－４５２９（２０１１）２０－４１９１－０３
Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ　ｏｎ　ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ：
ａｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ
ＨＵＡＮＧ　Ｘｕｎ，ＸＵ　Ｘｉｕ－ｈｕａ
（Ｘｉａｎｇｙａ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ４１０００８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ（Ｔｅｔ）ｏｎ　ａｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｌｕｘ　ｐｕｍｐ　ｉｎ　ｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ａｇａｒ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ
ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｍｉｎｉｍａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ），ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　６０ｍｉｎ　ａｎｄ　１８０ｍｉｎ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ａｆｔｅｒ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｅｔ
（１００，５０，２５，１２．５，６．２５μｇ／ｍｌ）ｏｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓ，ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　ｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ｗａｓ
２３ｔｏ　２７ｔｉｍｅｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｏｒｉｇｉｎａｌ　ＭＩＣ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｅｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ　ａｓ　ａ　ａｓｓｉｓｔａｎｔ　ｄｒｕｇ　ｉｎ　ｔｈｅ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｇｅｎｔｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｉｓ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；Ｅｆｆｌｕｘ　ｐｕｍｐ；Ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ
　　铜绿假单胞菌（ＰＡＥ）及多药耐药ＰＡＥ的感染
是目前各种医院感染中最广泛、最严重的问题，是临
床上难以控制的疾病之一［１］。在铜绿假单胞菌的耐
药机制尤其是对喹诺酮类的耐药研究中，主动外排
系统是近年来研究较多、作用显著的一类耐药机
制［２］。为发现更多的外排泵抑制剂，我们采用中药
粉防己碱对临床分离的铜绿假单胞菌进行初步体外
药敏试验，结果报道如下。
１　材料与方法
１．１　菌株来源　所用８株铜绿假单胞菌均为临床
分离株，菌株标本来源于湘雅医院临床微生物室。
收稿日期：２０１１－０６－０５；　修回日期：２０１１－０７－２０
基金项目：湖南省自然科学基金项目（０４ＪＪ４００２８）
１．２　药物　粉防己碱由中国药品生物制品检定所
提供，批号为０７１１－２００００５。氧氟沙星由中国药品
生物制品检定所提供，批号为１３０４５４－２００００１标示
量为９９．５％。细菌药物敏感试验采用 Ｍ－Ｈ 培养
基，为杭州天和微生物试剂有限公司生产。粉防己
碱采用少量１．０ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣＬ溶解，加生理盐水配
成２００、１００、５０、２５、１２．５μｇ／ｍｌ等５个浓度的药液。
１．３　试验方法　采用 Ｍ－Ｈ 琼脂稀释法测定所有
细菌对氧氟沙星的最低抑菌浓度（ＭＩＣ），按参考文
献［２］制备６４、３２、１６、８、４、２、１、０．５、０．２５等９个系
列浓度的含药琼脂平板，将稀释为０．５麦氏标准的
菌液用 Ｍ－Ｈ 肉汤稀释为１∶１０（含菌量约为１０７
ＣＦＵ／ｍｌ）后点种到平板上，待菌液干后放置到３５℃
孵育１６～２０ｈ，菌落生长被完全抑制的最低药物浓
度为该药对检测菌的 ＭＩＣ。将５个不同浓度的粉
·１９１４·中华医院感染学杂志２０１１年第２１卷第２０期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ．２１Ｎｏ．２０　２０１１
防己碱各１ｍｌ加入１ｍｌ的０．５麦氏标准菌液中，
实际 作 用 的 浓 度 分 别 为 １００、５０、２５、１２．５、
６．２５μｇ／ｍｌ，分别作用６０、１８０ｍｉｎ后，将菌液点种
到含药液的琼脂平板上，待菌液干后放置到３５℃孵
育１６～２０ｈ，菌落生长被完全抑制的最低药物浓度
为该药对检测菌的 ＭＩＣ。
２　结　果
２．１　临床菌株对氧氟沙星的 ＭＩＣ值　８株铜绿假
单胞菌对氧氟沙星的 ＭＩＣ值分别为６４、１６、１６、３２、
８、８、２、１μｇ／ｍｌ。
２．２　不同浓度及作用时间的 ＭＩＣ值　１号菌株
ＭＩＣ值原为６４μｇ／ｍｌ，在粉防己碱１００μｇ／ｍｌ作用
６０、１８０ｍｉｎ时，ＭＩＣ值下降为＜０．２５μｇ／ｍｌ；４号
菌株 ＭＩＣ 值原为 ３２μｇ／ｍｌ，在粉防己碱 １００、
５０μｇ／ｍｌ作用６０、１８０ｍｉｎ时，ＭＩＣ 值下降为＜
０．２５μｇ／ｍｌ；２号菌株 ＭＩＣ值原为１６μｇ／ｍｌ，在粉
防己碱１００、５０μｇ／ｍｌ作用６０、１８０ｍｉｎ时，ＭＩＣ值
分别下降为４和＜０．２５μｇ／ｍｌ；３号菌株 ＭＩＣ值原
为１６μｇ／ｍｌ，在粉防己碱 １００μｇ／ｍｌ作用 ６０、
１８０ｍｉｎ时，ＭＩＣ值分别下降为１、＜０．２５、５０μｇ／ｍｌ
作用１８０ｍｉｎ时，ＭＩＣ值下降为４μｇ／ｍｌ；对于原
ＭＩＣ值为８μｇ／ｍｌ的５，６号菌株，在粉防己碱的５
个不同作用浓度下，ＭＩＣ值均有变化，６．２５μｇ／ｍｌ
作用１８０ｍｉｎ时，ＭＩＣ也下降了２３，达到１μｇ／ｍｌ。
对于原来敏感的７、８号菌株（ＭＩＣ≤２μｇ／ｍｌ），在粉
防己碱的５个不同作用浓度下，ＭＩＣ值也有变化。
见表１。
表１　不同浓度粉防己碱在不同作用时间下８株铜绿假单胞菌对氧氟沙星 ＭＩＣ值的变化
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　８　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ｓｔｒａｉｎｓ　ＭＩＣ　ｏｎ　ｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｂｅｆｏｒｅ　ａｎｄ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ
ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　　　　　　　　　　　　　
粉防己碱浓度
（μｇ／ｍｌ）
作用时间
（ｍｉｎ）
原始 ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）
６４　 １６　 １６　 ３２　 ８　 ８　 ２　 １
１００．００　 ６０ ＜０．２５　 ４．００　 １．００ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５
１８０ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５
５０．００　 ６０　 ３２．００　 ４．００　 ８．００ ＜０．２５ ＜０．２５　 ２．００　 ０．５０ ＜０．２５
１８０　 ６４．００ ＜０．２５　 ４．００ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５
２５．００　 ６０　 ３２．００　 ８．００　 ８．００　 ６４．００ ＜０．２５　 ２．００　 ０．５０ ＜０．２５
１８０　 ６４．００　 ４．００　 ８．００　 １６．００　 ０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５
１２．５０　 ６０　 ６４．００　 ８．００　 ８．００　 ６４．００　 ４．００　 ２．００　 １．００ ＜０．２５
１８０　 ６４．００　 ４．００　 ８．００　 ３２．００　 ０．５０ ＜０．２５ ＜０．２５ ＜０．２５
６．２５　 ６０　 ６４．００　 ８．００　 １６．００　 ６４．００　 ４．００　 ４．００　 １．００　 １．００
１８０　 ６４．００　 ８．００　 ８．００　 ３２．００　 １．００　 １．００　 １．００ ＜０．２５
３　讨　论
　　近几年，ＰＡＥ感染在我国也呈迅速上升趋势，
如１９９８－１９９９年全国医院感染监控网资料中，ＰＡＥ
感染居第２位（８．６％），而１９９９－２０００年却上升到
了第１位（９．８％），对头孢噻肟耐药率达７４．４％，诺
氟沙星达４３．６％［３］。耐药性产生的直接后果是导致
抗菌药物的临床治疗失败，由多药耐药ＰＡＥ引起感
染的病死率上升，同时也增加治疗成本，缩短新药应
用周期，导致新的抗菌药物失效的速度加快［１］。
２０世纪８０年代以后，ＰＡＥ的多重药物主动外
排系统陆续被发现，是近年来研究较多，作用显著的
一类耐药机制，一旦主动外排系统表达水平提高，就
能主动将扩散入细菌细胞内的药物或其他底物泵出
细胞外，从而使细菌获得耐药性。外排泵的产生，可
以导致ＰＡＥ对β－内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮
类等多种抗菌药物耐药［４］。随着科学的进一步发
展，更多的外排泵及其更为详尽的耐药机制将被进
一步阐明，尽管至今对于外排泵的功能有许多争议，
但已经清楚地认识到，外排泵对天然或获得耐药性
具有重要作用［５，６］。许多研究均提出了通过外排泵
抑制剂与抗菌药物联合应用，可以提高抗菌药物的
疗效同时扩大抗菌谱，是战胜或阻断耐药的切实可
行的方法。
本试验从研究特异性阻断外排作用的新方法，
发现更多的外排泵抑制剂入手，使用目前已明确的
具有钙拮抗活性的粉防己碱。粉防己碱是从粉防己
干燥块根中提取的一种双苄基异喹啉生物碱，能强
烈抑制“快相”Ｃａ２＋内流，已经证实具有消炎、镇痛、
降血糖、抗肿瘤、抗矽肺、降血压、抗心率失常等广泛
的药理作用，对其抗炎作用的研究主要在抑制炎症
细胞功能、抗自由基损伤、抑制炎症介质释放或对抗
炎症介质的效应等方面进行探讨［７］，国内外尚无粉
防己碱对耐药菌株作用的研究。通过本次初步的试
验探讨，我们可以证实：粉防己碱能够使多药耐药的
ＰＡＥ对氧氟沙星的耐药性明显降低，不同浓度的粉
·２９１４· 中华医院感染学杂志２０１１年第２１卷第２０期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ．２１Ｎｏ．２０　２０１１
防己碱在与ＰＡＥ作用不同时间后，原来的 ＭＩＣ值
可以降低２３～２７倍。而要证实这类药物的作用机
制，则必须通过进一步的试验进行分析。
参考文献
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临床护理路径在艾滋病合并马尔尼菲青霉病治疗中的应用
黄自群，陈汝纯
（钦州市第一人民医院感染科，广西 钦州５３５０００）
关键词：获得性免疫缺陷综合征；马尔尼菲青霉病；临床路径；护理
中图分类号：Ｒ１８１．３＋２　　文献标识码：Ｂ　　文章编号：１００５－４５２９（２０１１）２０－４１９３－０１
　　马尔尼菲青霉病（ＰＳＭ）是由马尔尼菲青霉菌（ＰＭ）引起
的深部真菌病有严重消耗性疾病或免疫功能低下者易于感
染此病。包括严重基础疾病、应用免疫抑制剂和艾滋病
（ＡＩＤＳ）患者，如不及时治疗，可造成全身各系统受损。现将
我院２００７年１月－２０１０年１２月收治的１７８例艾滋病合并
ＰＳＭ住院患者按路径实施护理观察报道如下。
１　资料与方法
１．１　资料　本组１７８例均符合美国疾病控制预防中心１９９３
年颁布的《ＡＩＤＳ诊断标准》和卫生部疾病控制司提出的
《ＡＩＤＳ诊断标准》，其中男１３６例，女４２例，年龄２１～６８岁，
平均３９．５岁，病程１周～２个月。吸毒者５０例，外出打工６０
例，有职业１７例，无职业５１例。
１．２　ＰＭ感染相关检查　血液、脓液培养、组织活检等支持
ＰＳＭ的诊断。
１．３　临床表现　１７８例患者有不同程度的发热、消瘦，体温
波动在３８．５～４１℃。
１．４　治疗方法　本组病例均给予抗ＰＭ 治疗，病情重者主
要用两性霉素 Ｂ，首日５ｍｇ，缓慢静脉滴注（一般需要≥
５ｈ），每日递增５～５０ｍｇ／ｄ，同时给予氟康唑注射液０．４ｇ
静脉滴注，轻～中者用伊曲康唑４００ｍｇ／ｄ口服并给予抗病
毒、抗炎、保肝、护胃、提高机体免疫力及对症等治疗及相应
护理。
收稿日期：２０１１－０７－２５
２　结　果
所有患者经两性霉素Ｂ治疗２０～３５ｄＰＳＭ 症状消失，
１５２例病情好转出院，１２例因多功能衰竭死亡，１４例自动出
院放弃治疗，１个月后随诊患者死亡。
３　按路径实施护理
３．１　拟定相关的护理流程　临床护理路径是患者在住院期
间的护理模式，是有计划、有预见性地进行护理工作。患者
亦了解自己的护理计划目标，主动参与护理过程，增强患者
自我护理意识和能力，达到最佳护理效果，护患双方相互促
进，形成主动护理与主动参与相结合的护理工作模式。因此
患者入院后护士制定临床路径并实施护理，包括护理评估、
饮食、活动、正确的实施治疗、给药措施、护理处理、患者健康
教育、人文关怀等。
３．２　正确的实施治疗及给药措施　本组病例首选两性霉素
Ｂ治疗，该药不良反应多，而且严重，主要包括寒颤、发热、头
疼、食欲下降、恶心、呕吐、肝肾功能受损、静脉炎等。为了从
更细环节操作减少不良反应，因此在治疗前给予患者做好解
释工作，介绍药物的作用、不良反应及应注意的问题。同时
从小剂量（一般成年人每天５ｍｇ）开始，用５％葡萄糖注射液
溶解后加入５％葡萄糖注射液５００ｍｌ中静脉滴注，以后视病
情及治疗效果需要调至治疗量。在输液过程中滴速宜慢，时
间≥５ｈ，且最好现配现用并避光，输液过程中加强巡视，密
切观察药物反应情况，发现问题及时处理。
·３９１４·中华医院感染学杂志２０１１年第２１卷第２０期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｏｓｏｃｏｍｉｏｌ　Ｖｏｌ．２１Ｎｏ．２０　２０１１