全 文 ：正交设计优选复方当红注射液提取工艺
吕　鹏
(天津市天津医院 ,天津　 300211)
　　当红注射液是由以当归和红花为主料制得的注
射液 ,具有舒筋活血 ,通络止痛的作用 ,临床上主要
用于治疗腰腿疼痛、腰间盘突出症等。本实验以当归
中主要有效成分阿魏酸为质控指标 ,采用正交设计
法考察加热回流时间、煎煮时间、醇沉浓度、加水量
对提取工艺的影响 ,以优选最佳提取方案。
1　仪器及药品
　　高效液相色谱仪: Waters 515泵 , 486紫外检测
器 , 2021色谱工作站 (美国 ) ; UV-760CRT型双光
束紫外可见分光光度计 (上海第三分析仪器厂 )。
阿魏酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
0773-9506) ,所用试剂均为分析纯。 当归 Angelica
sinensis ( Oliv. ) Diels和红花 Carthamus tinctorius
L. 药材均购于天津市中药饮片厂。
2　方法与结果 [ 1]
2. 1　检测波长的选定: 配制阿魏酸甲醇溶液 ( 10
μg /mL) ,在 200～ 400 nm 波长扫描 ,λmax= 321
nm ,作为检测波长。
2. 2　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Nova-PakR C18柱
( 3. 9 mm× 150 mm , 4μm) ,流动相: 甲醇 -1% 冰醋
酸 ( 25∶ 75) ,流速: 1 mL /min,灵敏度: 0. 1 AUFS,
进样量: 20μL,柱温: 室温。
2. 3　线性关系考察:精密称取阿魏酸对照品适量 ,
以甲醇溶解定容至 25 mL容量瓶中 ,分别精密量取
1, 2, 3, 4, 5, 6 mL置 10 mL量瓶中 ,用甲醇稀释至
刻度 ,摇匀 ,在上述色谱条件下测定 ,以浓度为横坐
标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,进行回归计算 ,方程为
C= 4. 924+ 2. 86× 10- 5 A , r= 0. 999 7。表明阿魏酸
在 10. 12～ 60. 72μL /m L呈良好线性。
2. 4　提取工艺及优选: 按 5∶ 1取当归、红花粗粉
(过 1号筛 )适量 ,加蒸馏水 ,回流提取挥发油 ,过滤 ,
药渣再经煎煮后 ,过滤 ,合并提取液 ,浓缩 ,并用乙醇
沉淀除去杂质 ,回收乙醇。 所得溶液用 0. 1% 活性
炭脱色处理 ,用 10% 碳酸钠调 pH 7～ 7. 5,加入适
量吐温-80,溶于适量注射用水 ,加入氯化钠使之溶
解 ,用 G3垂熔漏斗过滤 ,灌封 ,即得。
精密吸取样品液 20 mL,置分液漏斗中 ,用乙酸
乙酯萃取两次 ,合并乙酸乙酯萃取液 ,用少量水洗涤
后 ,于水浴上蒸干 ,用甲醇溶解定容至 25 mL容量
瓶中。取样品供试液 ,在 HPLC仪中进样 20μL,依
上述条件测定。
以样品中阿魏酸的含量为考察指标。选用回流
时间、二次煎煮时间、醇沉浓度、加水量 4个因素 ,
每个因素选择 4个水平 ,采用 L16 ( 45 )正交表进行
试验 ,结果见表 1, 2, 3。
表 1　因素水平表
Table 1　 Factors and levels
水平 因　　素
A煎煮时间 /h B回流时间 /h C加水量 D醇沉浓度
1 　 0. 5 　 0. 5 　 2 12 70% 70%
2 1 0. 5 1. 5 10 0% 70%
3 1 1 1 8 50% 50%
4 2 1 0 6 50% 70%
表 2　 L16 ( 45 ) 正交试验结果
Table 2　Results of L16 ( 45 ) orthogonal test
试验号 A B C D E (误差 ) 阿魏酸含量
/ (μg· mL- 1)
1 1 1 1 1 1 48. 52
2 1 2 2 2 2 51. 99
3 1 3 3 3 3 58. 10
4 1 4 4 4 4 58. 92
5 2 1 2 3 4 29. 72
6 2 2 1 4 3 28. 33
7 2 3 4 1 2 31. 97
8 2 4 3 2 1 31. 67
9 3 1 3 4 2 49. 86
10 3 2 4 3 1 34. 96
11 3 3 1 2 4 33. 36
12 3 4 2 1 3 34. 27
13 4 1 4 2 3 47. 19
14 4 2 3 1 4 43. 33
15 4 3 2 4 1 41. 94
16 4 4 1 3 2 45. 32
K 1 217. 53 175. 29 155. 53 158. 09 157. 09
K 2 121. 69 158. 61 157. 92 164. 21 179. 14
K 3 152. 45 165. 39 182. 96 168. 11 169. 89
K 4 177. 78 170. 18 173. 04 179. 05 165. 33
R 95. 84 15. 68 27. 43 20. 96 22. 05
　　由以上结果可见 ,加热回流提取 2 h ,再煎煮两
·617·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2002-11-09
表 3　方差分析表
Table 3　 Analysis of variance
方差来源 自由度 离均差平方和 方差 F值 P值
A 3 1 234. 25 411. 42 26. 12 P < 0. 05
B 3 40. 33 13. 44 0. 853 4
C 3 127. 92 42. 64 2. 707 3
D 3 68. 35 21. 12 11. 341　 P < 0. 05
E (误差 ) 4 62. 99 15. 75
　　F 0. 05 ( 3, 4)= 9. 12　F0. 01 ( 3, 4)= 28. 7
次 ,每次 0. 5 h,醇沉两次 ,每次使醇沉浓度达到
50% ,再加入 8倍量的水 ,即 A1 B1 C3D4为最佳提取
条件。通过正交试验结果直观分析 ,由 R值可看出 ,
影响因素由大到小依次为 A> C> D> B。由方差分
析结果看出 ,煎煮时间和醇沉浓度对试验指标影响
差异具有显著意义 ,回流时间和加水量影响较小。
2. 5　验证试验:按优选的最佳工艺条件 ,制备 3批
样品 ,测定复方当红注射液中阿魏酸含量 ,结果为
58. 78μg /mL。
3　讨论
　　通过优化试验 ,筛选出最佳提取工艺 ,既节省了
煎煮时间又节约了乙醇的用量 ,降低了成本 ,适合医
院内制备及使用。
References:
[ 1]　 Gu M , Zh ang L, Zhang Z X. Determination of ferulic acid in
Xiaoyao Powd er and Radix Angel icae Sinensis by HPLC [ J].
Chin Tradi t Pat Med (中成药 ) , 2000, 22( 5): 342.
HPLC法测定甘草中甘草素、异甘草素、甘草苷的含量
何三民 1 ,石森林 2
( 1. 金华市中心医院 ,浙江 金华　 321000; 2. 浙江中医学院 ,浙江 杭州　 310053)
　　《中华人民共和国药典》 2000年版一部收载有
甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 G. in-
f lata Ba t.、光果甘草 G. glabra L. 3个种。为了保证
临床疗效 ,本实验对甘草中甘草素、异甘草素、甘草
苷的含量进行了比较。
1　仪器与材料
Waters高效液相色谱仪 , Lambdal2紫外可见
分光光度计 ( PE) , M etter AE 163电子分析天平。乙
腈、二水醋酸、甲醇均为分析纯 ,水为重蒸水。
甘草购自浙江中医学院实验药厂 ,胀果甘草和
光果苷草均购自浙江省金华市医药站药材公司。甘
草素、异甘草素、甘草苷 (自制 ,均经光谱学鉴定 ,采
用面积归一化法测得其纯度分别为 98. 05% ,
98. 13% , 98. 12% )。
2　方法与结果
2. 1　供试液制备: 取甘草粉末 ( 60目 )约 100 mg ,
精密测定 ,置微型索氏提取器中加甲醇 10 mL回流
2 h,回流液于 70℃水浴回收甲醇 ,浓缩至约 2 mL,
放冷后转移至 5 mL容量瓶中 ,甲醇稀释并定容至
刻度 ,混匀后滤过 ,弃去初滤液 ,即得。
2. 2　对照品溶液制备:分别精密称得甘草苷、甘草
素、异甘草素对照品 2. 00, 0. 80, 0. 25 mg ,置 2 mL
容量瓶中 ,加甲醇溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀后即得。
2. 3　色谱条件: 色谱柱: Zo rdox ODS ( 150 mm×
4. 6 mm ) ( Dupont ) ;柱温: 25℃ ;流速: 1 mL /min;
流动相:乙腈-5%醋酸梯度洗脱 ,安排见表 1。
表 1　色谱条件
Table 1　 Chromatographic conditions
时间
/min
流动相
乙腈 5%醋酸
检测波长
/nm
0. 0～ 12. 0 20 80 310
12. 0～ 15. 0 50 50 365
15. 0～ 25. 0 80 20 365
2. 4　标准曲线制备: 用微量注射器分别吸取 1. 0,
2. 5, 5. 0, 7. 5, 10. 0μL的混合对照品溶液 ,进样测
定。 以进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标作图 ,得回
归方程、相关系数和线性范围。 甘草苷: Y =
83. 45X+ 2. 23, r= 0. 999 3, 0～ 10μg;甘草素: Y=
87. 31X - 0. 25, r= 0. 999 1, 0～ 4. 0μg;异甘草素:
Y= 685. 13X - 0. 21, r= 0. 999 5, 0～ 1. 25μg。
2. 5　精密度试验:精密吸取 3种对照品的混合液 ,
每次 10μL,连续进样 6次 ,测定峰面积 ,计算得甘
草素、异甘草素、甘草苷 RSD 分别为 1. 38% ,
1. 37% , 1. 91% (n= 6)。
2. 6　稳定性试验:分别在样品制备后 1, 2, 4, 8, 16h
·618· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2003-02-18基金项目:国家科技部创新博士基金 ( 96-901-06-75)作者简介:何三民 ( 1963— ) ,浙江义乌人 ,浙江省金华市中心医院药剂科中药师 ,主要从事中药医院制剂研制。 Tel: ( 0579) 2338512-739