全 文 ：对于肉苁蓉花粉管出现分枝现象的原因及其对结实
的影响, 还有待进一步的深入研究。
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喜树茎尖组织培养与植株再生
吕立堂, 朱冬雪Ξ , 赵德刚3
(贵州大学 农业生物工程省级重点实验室, 贵州 贵阳　550025)
摘　要: 目的　探索喜树的人工快繁。方法　以喜树幼苗的茎尖作为外植体, 培养在附加不同激素的培养基上。结
果　以 B 5 培养基附加 62BA 012 m göL , IBA 0. 05 m göL 和 A S (afen ine su lfa te, 10 m göL ) 对丛生芽的诱导与增
值效果最佳, 而附加 IBA 015 m göL , KT 0. 1 m göL 和 A S 10 m göL 的生根效果最佳。试管苗移栽到珍珠岩2土壤
(3∶7) 的基质中生长良好, 成活率高达 96%。结论　为喜树的开发利用提供了一条新途径。
关键词: 喜树; 植株再生; 组织培养
中图分类号: R 282113　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 05 0682 03
Tissue culture of shoot- t ip and plan tlet regenera tion of Camp totheca acum una ta
LU
　 ¨L i2tang, ZHU Dong2xue, ZHAO D e2gang
(Guizhou Key L abo rato ry of A gricu ltu ral B io techno logy, Guizhou U niversity, Guiyang 550025, Ch ina)
Abstract: Object　To exp lo re the art if icia l p ropagat ion of the m edicinal p lan t, Cam p totheca acum ina ta
D ecne. M ethods　T he shoo t2t ip w as tested as the exp lan ts and cu ltu red on cu ltu re m edia w ith differen t
po rt ion s of ho rmone. Results　T he best m edium fo r bud induct ion w as the B 5 basic m edium w ith addit ion s
of 62BA (0. 2 m göL ) , IBA (0. 05 m göL ) , and A S (afen ine su lfa te, 10 m göL ). W h ile B 5 w ith the addit ion s
of IBA (0. 5 m göL ) , KT (0. 1 m göL ) , and A S (10 m göL ) w as su itab le fo r roo t ing. T he seedling w as cu l2
t iva ted and grew w ell on the base m ateria l m ixed w ith perlite2so il (3∶7). T he su rvival ra te of t ran sp lan t
w as up to 96%. Conclusion　T he above m en t ioned m ethod p rovides a new effect ive w ay to exp lo it th is
p lan t resou rces.
Key words: Cam p totheca acum ina ta D ecne. ; p lan t let regenera t ion; t issue cu ltu re
　　喜树 Cam p totheca acum ina ta D ecne. 是珙桐科
(N yssaceae) 的一种落叶阔叶树[1 ] , 主要分布在我
国长江流域及西南各省。其树干通直圆满, 枝条平向
外展, 树冠倒卵形, 姿态端直雄伟, 为优良的园林绿
化树种, 其木材适于做造纸原料、室内装饰材料等。
另外喜树还是我国民间的一种中药材, 其果实、根、
树皮、树枝和叶均可入药, 其中主要含有抗肿瘤作用
的喜树碱 (camp to thecin)。喜树碱主要通过抑制
DNA 拓扑异构酶É 的活性及逆转录病毒的复制来
阻止细胞DNA、RNA 的合成, 使细胞凋亡[2 ]。因而
·286· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209210
基金项目: 贵州省科学技术基金资助 (20023033) ; 贵州省科技厅专项基金 (黔科合字 (2003) JN 012)
作者简介: 吕立堂 (1978—) , 男, 山东莱芜人, 贵州大学农业生物工程重点实验室在读硕士研究生, 从事植物基因工程及其次生代谢产物
方面的研究。3 通讯作者　T el: (0851) 3865027　E2m ail: Zhudongxue@ 163. com; degangzhao@Yahoo. com
喜树碱具有广泛的抗肿瘤、抗白血病、抗免疫缺陷病
毒等活性。临床上用于治疗肝癌、胃癌、肠癌、卵巢
癌、膀胱癌、食道癌、早期白血病等, 其疗效显著。由
于喜树碱在植物组织中含量低, 且野生状态下喜树
资源不稳定, 随着市场上喜树碱需求量的增加, 生产
上消耗的喜树也越来越多。因此, 大规模的种植栽培
已势在必行。本研究通过喜树茎尖培养初步建立起
喜树的快繁体系, 为今后加速喜树的人工繁殖及喜
树药用林培育提供了一条新途径。
1　材料与方法
111　材料与培养条件
11111　材料处理: 喜树种子于 2001 年 11 月采自贵
州大学校园, 将种子播在基质为珍珠岩的花盆中, 于
20 ℃ 培养 3 d, 选取生长健壮的喜树幼苗茎尖作为
外植体。用 75% 酒精消毒 30 s, 无菌水冲洗 3 次,
然后用 011% 升汞消毒 3 m in, 无菌水冲洗 5 次, 无
菌纱布吸干水分。将茎尖切成约 2 cm 垂直插在培
养基中。所用培养基为B 5 基本培养基, 附加 30 göL
蔗糖, 8 göL 琼脂, pH 518, 121 ℃ 灭菌 15 m in。
11112　培养条件: 光照强度为 2 000 lx, 每日光照
12 h, 培养温度 (25±1) ℃。
112　方法
11211　茎尖丛生芽诱导的正交实验设计: 根据有关
资料及以往工作经验, 选取 62BA (A )、IBA (B )、
A S (C) 3 种激素进行试验, 每种激素分为 3 个水平
(浓度均为 m göL ) , 选用 L 9 (34) 正交表, 考察激素
对丛生芽的诱导效果。根据设计安排 9 次试验, 每
次实验 40 个外植体。因素水平安排见表 1。
表 1　正交实验因素水平表
Table 1　Factor and level of orthogonal test
水　平
因　　素
A B C
1 　　　0105 　　　0 　　　 5
2 0110 0105 10
3 0120 0110 20
11212　单芽的培养与根的诱导: 待单芽长到约
1 cm 时, 切取单芽将其转移到壮芽培养基上培养,
当单芽在壮芽培养基上长到 215 cm 时, 转移到生
根培养基上诱导生根。
11213　组培苗的移栽: 待苗长出 3～ 6 条长达 2 cm
左右的根时, 将组培瓶的瓶口打开, 置于室内光照下
炼苗 3 d, 然后移至装有不同基质的花盆中, 4 周后
统计移栽成活率。
2　结果与分析
211　培养基 62BA (A ) , IBA (B ) , A S (C) 对茎尖
丛生芽诱导的影响: 外植体接种 2 周后, 下部茎段愈
伤化, 上部丛生芽开始萌动, 5 周后统计芽诱导率,
结果见表 2。
表 2　丛生芽诱导结果
Table 2　Result of induc ing multiple shoots
实验号 A B C 平均单芽数
1 　　0105 　　0100 　　　5 　　114
2 0105 0105 10 310
3 0105 0110 20 316
4 0110 0100 10 315
5 0110 0105 20 415
6 0110 0110 5 215
7 0120 0100 20 810
8 0120 0105 5 910
9 0120 0110 10 1210
　　由表 2 可知, 各种处理对丛生芽诱导的影响差
异很大, 多数处理均能诱导出丛生芽, 其中以 7, 8
和 9 号 3 组处理诱导效果较好。在这 3 组处理中, 又
以 9 号诱导效果最好, 8 号次之, 表明A S 的浓度以
10 m göL 为宜。丛生芽的诱导增殖效果随 62BA 浓
度的升高而提高, 当 62BA 的浓度达到 012 m göL
时, 诱导效果最好。 IBA 的浓度以 011 m göL 为宜,
浓度过底, 不利于细胞的分裂, 从而影响丛生芽的增
殖与生长。从表 3 极差分析结果来看, 试验安排的 3
种激素对丛生芽诱导的影响作用以 62BA 为最大,
其次为A S, 3 种激素对丛生芽的诱导作用大小依次
为: 62BA , A S, IBA , 诱导喜树丛生芽产生的最佳激
素配比为A 3B 3C 2即B 5+ 62BA 012 m göL + IBA 0. 1
m göL + A S 10 m göL , 诱导的丛生芽见图 1。为进一
步反映各因素对丛生芽诱导的影响, 笔者对实验结
果进行了方差分析, 结果见表 4。由表 4 可知, 62BA ,
IBA 和 A S 对丛生芽诱导的影响差异均无显著性。
表 3　极差分析表
Table 3　Analysis of extreme differences
K ij
平均诱导单芽数
62BA IBA A S
K 1 　　　217 　　　413 　　　413
K 2 315 515 612
K 3 917 610 514
R 710 117 119
212　壮芽与生根培养: 在 3 种不同的壮芽培养基
(B 5+ 62BA 110 m göL + KT 011 m göL , B 5+ 62BA
0. 5 m göL + KT 0. 1 m göL , B 5+ NAA 2. 0 m göL +
KT 0. 2 m göL ) 中, 以 B 5 附加 62BA 015 m göL 和
KT 011 m göL 的培养基上的芽生长既快又好, 18 d
单芽可长到 215 cm , 且芽苗粗壮。将所得的芽苗接
种在生根培养基上, 生根效果 (表 5) 以 B 5+ IBA
015 m göL + KT 0. 1 m göL + A S 10 m göL 最好, 诱
·386·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
导生根时间为 16 d, 生根率达到了 90% , 生根苗见
图 2。表 5 中 2 号培养基生根率也达到了 90% , 但诱
导生根所需时间比 1 号培养基长。
表 4　丛生芽诱导的方差分析结果
Table 4　Var iance analysis of induc ing multiple shoots
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值
62BA 　 85140 2 4217 15160
IBA 4174 2 2137 0186
A S 5127 2 2164 0196
误差 5150 2 2175
总和 100191 8
　　F 0105= 19100　F 0101= 99100
表 5　诱导生根结果
Table 5　Results of induc ing roots
处理号
培养基ö(m g·L - 1) 生根时间öd 生根率ö% 根数
1 B5+ IBA 015+ KT 011+ A S 10 16 90 7±1
2 B5+ IBA 1+ KT 011 19 90 5±1
3 B5+ NAA 2+ KT 012 14 78 5±1
图 1　丛生芽
F ig. 1　M ultiple shoots
图 2　生根苗
F ig. 2　Rooting shoots
213　移栽: 从表 6 结果看出, 喜树组培苗在经过灭
菌的基质中的移栽成活率均高于 70% , 其中以经过
灭菌的珍珠岩2田土 (3∶7) 的基质效果最好, 成活
率达到了 96% , 其次为灭过菌的田土。而未经灭菌
的基质的移栽成活率在 50% 左右。表明再生幼苗
的抵抗能力弱, 基质中的各种细菌或真菌对幼苗根
系的生长不利, 从而影响移苗成活。
表 6　移栽成活结果
Table 6　Surv iva l rate of tran splan t
基　质
成活率ö%
消毒 未消毒
珍珠岩 78 46
田土 92 40
珍珠岩2田土 (3∶7) 96 53
3　讨论
　　本实验通过正交试验设计, 研究了不同浓度的
3 种激素配合使用对喜树茎尖丛生芽诱导和增殖培
养条件。结果表明丛生芽的诱导增殖效果与 62BA
浓度成正相关, 当 62BA 的浓度达到 012 m göL 时,
诱导效果最好, 这一结果与W iedenfeld 等[3 ]的研究
有较大的差异, 可能是由于本次实验所用外植体为
盆栽苗的茎尖, 而 H elm u t 等所用外植体为无菌苗
的茎尖。另外, 进一步加大 62BA 的浓度是否能提高
丛生芽的诱导效果还有待进一步研究。壮芽培养是
为了提高芽的生长适应能力, 对生根及移栽成活率
有较大影响。未壮芽的单个芽苗如果直接诱导生根,
生根所需时间长, 且生根率较低。壮芽后的芽苗诱导
生根较为容易, 其中以 B 5+ IBA 015 m göL + KT
011 m göL + A S 10 m göL 的培养基效果最佳, 生根
率高且粗壮。喜树再生苗的移栽成活率与基质及其
处理有关, 基质经消毒, 有利于苗移栽成活。
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·486· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月