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Effects of Cryptoporus volvatus ferment substance on airway hyperresponsiveness and inflammation in asthmatic mice with spleen-deficiency syndrome

隐孔菌发酵物对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响



全 文 :·1356· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
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隐孔茵发酵物对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响
包兆胜“2,李和权1,邵传森1,章辉1,谢强敏”
(1.浙江大学医学院,浙江杭州310031;2.台州学院医学院,浙江椒江318000)
摘 要:目的建立脾虚证哮喘小鼠模型,观察隐孑L菌发酵物(CVFS)对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的
影响。方法 以卵白蛋白(OVA)致敏+饮食不节+劳倦过度伤脾法建立脾虚证哮喘小鼠模型;测定小鼠的肺阻力
(R。)和支气管一肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞,观察肺组织和免疫器官脾脏的病理变化。结果脾虚证哮喘
小鼠的气道高反应性、BALF中的嗜酸性粒细胞数目,肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化以及脾脏指数与单纯哮
喘小鼠比较有明显差异(P<0.05)。CVFS能明显改善单纯哮喘小鼠和脾虚证哮喘小鼠由乙酰甲胆碱(MCH)诱
导的气道高反应性,减少BALF中的嗜酸性粒细胞数目,以及改善肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化,而对脾虚证
哮喘小鼠作用更为明显。CVFS能明显增加脾虚证哮喘小鼠脾脏指数,而对单纯哮喘小鼠的脾脏指数无明显影响。
结论()VA致敏+饮食不节+劳倦过度伤脾法可建立脾虚证哮喘小鼠模型;CVFS可明显改善脾虚症状,抑制脾
虚证哮喘小鼠的气道高反应性和炎症反应,提示CVFS可用于临床脾虚证哮喘的治疗。
关键词:隐孔菌发酵物;脾虚证;哮喘;气道高反应性
中图分类号:R286.43 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)09—1356—05
EffectsofCryptoporusv lvatusfermentsubstanceo airwayhyperresponsiveness
andinflammationinasthmaticmicewithspleen—deficiencysyndrome
BA0Zhao—shen91~,LIHe—quanl,SHA0Chuan—senl,ZHANGHuil,XIEQiang—rainl
(1.CollegeofMedicalScienceofZhejiangUniversity,Hangzhou310031,C ina;
2.MedicalDepartmentofTaizhouC llege,Jiaojiang318000,China)
Abstract:ObjectiveToestablishamodelofasthmamicewithspleen—deficiencysyndrome(asthma—
SDS)andtoinvestigatetheffectsofCryptoporusv lvatusfermentsubstance(CVFS)ontheairwayhy—
perresponsivenessandinflammationinmodelmice.MethodsAnasthma—SDSmodelofmicewasestab—
lishedbyovalbumin(OVA)一sensitizedplusover—eatingandover—exerting.Thechangesoflungresistance
(RL),inflammatorycellsinbronchoalveolaravagefluid(BALF),lungtissuepathology,andspleenindex
wereobserved.ResultsComparedwiththesimpleasthmamodelofmice.theairwayhyperrespon—
siveness,eosinophilsnumberintheBAI。F,lungtissuepathology,andspleeni dexintheasthma—SDS
modelofmiceshoweda significantdifference(P<0.05).CVFScouldinhibitmethacholine(MCH)一in—
ducedairwayhyperresponsiveness,decreaseeo inophilsnumberinBALF,andimproveeosinophilsinflam—
matoryinfiltrationin helungtissueofthesimpleasthmaandtheasthma—SDSmodelofmice.CVFShad
morepotenteffectinasthma—SDSmodelthansimple
asthma—SDSmodelofmice,butnoinfluencedspleen
ma—SDSmodelofmicecouldbeestablishedbyoVA.
asthmamodel.CVFSalsoincreasedspleeni dexin
indexinsimpleasthmamodel.ConclusionAna th—
sensitizedplusover—eatingandover~exerting.CVFS
收稿日期:2005—01—20
基金项目:浙江省科技厅重大科技攻关项目(2005C21072)
作者简介:包兆胜(1965),男,浙江临海人,医学硕士,台州学院医学院高级讲师,从事免疫学和抗炎免疫药理学研究。
Tel:(0576)5159295E—mail:BZS一295@163.corn
*通讯作者谢强敏Tel:(0571)87217380Fax:(0571)87217380Email:xieqm@zju.edu.cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1357·
notonlysignificantlyimprovesspleen—deficiencysyndromeinmice。butalsoinhibitstheairwayhyperre—
sponsivenessandinflammationin heasthma—SDSmodelofmice.Consequently,theresu tssuggestethat
CVFScouldbeusedfortheclinicalasthmapatientswithspleen—deficiencysyndrome.
Keywords:Cryptoporusvolvatus(Peck)Hubbardferments stance(CVFS);spleen—deficiencysyn—
drome;asthma;airwayhyperresponsiveness
中医学把支气管哮喘称为“哮证”或“哮病”。认
为哮喘缓解期以虚证为主,以肺、脾、肾三脏气虚、阳
虚为本。认为“脾为生痰之源,肺为贮痰之器”。若因
劳伤、食伤等伐脾,致使脾不健运,水湿停积与寒热
互结必生痰浊,故脾为生痰之源。中医认为哮证主治
在痰,根治在脾口]。隐孔菌为隐孔菌科隐孔菌Cryp—
toporusvolvatus(Peck)Hubbard的子实体,有舒筋
活络、祛风除湿的功效[2j,在民间用于治疗支气管炎
和哮喘。本实验根据哮喘脾气虚的病机,探讨隐孔菌
发酵物(Cryptoporusvolvatusfermentsubstance,
CVFS)对脾虚证哮喘模型小鼠的影响。
1 材料
1.1 药品与试剂:CVFS,由杭州泰士生物科技有限
公司提供,批号010702,临用时以生理盐水配成
25%和5%混悬液;卵白蛋白(OVA)和乙酰甲胆
碱(methacholine,MCH)购于美国Sigma公司;乌
拉坦(Urethane),中国医药公司上海化学试剂公司。
1.2动物:NIH小鼠,体重(20±2)g,清洁级,雌
雄各半,购于浙江大学医学院实验动物中心,合格证
书:医动字第220010014号。
1.3 仪器:PariMaster压缩吸入机(Bari,Mas—
ter;德国);系统显微镜(OlympusBX51,日本);冷
冻离心机(Eppendorf5804R,德国)。小鼠肺功能测
定仪(自制),MedLab生物信号采集处理系统
5.0.1版(南京美易科技有限公司)。
2 方法
2.1 致敏小鼠:实验第1天,乙醚麻醉小鼠,以
OVA1mg溶于10%A1(OH)。凝胶1ml。中,每只
小鼠两后足掌各SC0.05mL。实验第11天,每只小
鼠用上述OVA0.1mLip给药以加强致敏。
2.2动物分组、给药途径和剂量:共分7组,每组
9~10只小鼠,雌雄各半。均ig给药。正常组:正常
小鼠,不经任何处理;模型组(单纯哮喘模型和脾虚
证哮喘模型):ig生理盐水,每只0.5mI。;CVFS
0.3、2.7g/kg组:两种模型致敏第20天起ig给药,
每天1次,共10d。
2.3脾虚证哮喘模型制备[3]:致敏的第12天起,给
被致敏的小鼠每天ig30mI。/kg1次,而后将小鼠
放入温水中游泳,直至其无力游动或欲溺水为止。造
成所谓“饮食不节+过劳伤气”脾虚证模型。以上步
骤每天1次,连续10d。
2.4抗原攻击:致敏第23天,将致敏小鼠放入4L
玻璃钟罩内,用雾化吸入器雾化1“//0OVA(用生理
盐水配制)30rain,每天1次,共7d。
2.5 小鼠气道高反应性测定[4]:实验第30天,用
25%乌拉坦按4mL/kg麻醉小鼠,仰卧位固定,剪
开颈部皮肤,①行气管插管,再行小鼠颈外静脉插管
和胸膜腔插管,置于小鼠体描记器内,接通气管插管
引伸于体描记器外,同时于体描记器的侧孔接上压
力换能器和MedLab生物信号采集处理系统,将所
有导管接通完毕,密闭体描记器,描记随小鼠呼吸而
引起的容积变化,即潮气量(yT)。②用一端塞入细
玻管造成气阻的“Y”型管行气管插管,另一端连上
压力换能器和MedI。ab生物信号采集处理系统,即
可记录阻力端内外(即气管内和大气压)之间的压
力差,可得气流速率(y)。实验前用标准气流计定标
准。③用一自制钝头带3个小孔的金属管由第5间
插入小鼠的胸膜腔内,该管用导管与差压换能器一
MedLab生物信号采集处理系统连接,差压换能器
的另一头与气管插管连接(口腔压),即得跨肺压
(Ptp)。待体描记器内的小鼠状态完全稳定后,分别
用MCH0.125、0.25、0.5、1.0、2.0ptg/kgiv给药,
观察VT、V、Ptp变化,通过计算机处理得肺阻力值
(R-.一V/Ptp),以MCH为零时R。值作为基线
100%,再换算成不同MCH剂量下R。增加值。
2.6支气管肺泡灌洗:小鼠致敏第22天,再经抗原
攻击7d(每天1次),第30天脱臼处死动物,气管
插管,用1%牛血清一生理盐水溶液1mL灌洗支气
管肺泡,来回冲洗3次,收集支气管肺泡灌洗液
(BAI。F)。
2.7 BALF中自细胞计数和细胞分类计数:混匀收
集的BAI.F,取0.1mL用白细胞稀释液1:1稀
释,用细胞计数板计数白细胞,涂片用酸性粒细胞特
殊染色后在显微镜下作白细胞分类计数。
2.8肺组织病理学切片检查:取肺置于10%福尔
马林固定液中固定,作病理切片,苏木素伊红染色后
万方数据
·1358· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
在显微镜下观察肺组织过敏性炎症表现。
2.9脾脏指数测定:小鼠处死后取脾脏,称质量,计
算脾脏指数。
2.10统计学处理:用计算机和SigmaStat统计软
件(SigmaSt t1.01forWindows95,1992,Jandel
Corporation,美国)。
3 结果
3.1 对MCH诱发的小鼠R。增加的影响:致敏小
鼠经抗原多次攻击后,以MCHiv诱发气道高反应
性。表I结果显示MCH呈剂量依赖性地增加小鼠
RL。与正常组比较,MCH在0.125、0.25、0.5、1.0
和2.0/-g/kg时,单纯哮喘模型组R。,值分别增加了
26.5%、28.3%、39.8%、68.3%和120.7oA;脾虚
证哮喘模型组R。值分别增加了44.1%、90.5%、
79.7%、91.3%和139.3%。脾虚证哮喘模型组与
单纯哮喘模型组比较R。值分别增加了13.9%、
48.5%、28.5%、13.8%和8.4%。CVFS2.7g/kg
治疗的单纯哮喘组与单纯哮喘模型组比较,MCH
0.125、0.25、0.5、1.0和2.0119/kg5个剂量点的
抑制率分别为17.1%、14.o%、20.6%、29.7%和
46.3%,平均抑制率为25.5%。CVFS2.7,g/kg治
疗的脾虚证哮喘组与脾虚证哮喘模型组比较,MCH
5个剂量点的抑制率分别为29.9%、47.ooA、
41.o%、44.0oA和56.0%,平均抑制率为43.6%。
表1 CVFS对MCH诱发的哮喘小鼠R。的影响(;±s)
Table1 EffectofCVFSonRLofasthmamiceinducedbyMCH(;±s)
与正常组比较:+P<0.05~P脾虚证哮喘模型组比较:aP<0.05△△P<0.01zxZXAp<0.001;表2,表3同
‘P<0.05一P<0.Ol⋯P<0.001v5normalgroup;”P<0.054。 P<0·01⋯j’<0.001WSsimpleasthmaodel
group:△P<0.05△△P<0.01△△△P<0.001USspleen—deficiencysyndromeasthmamodelgroup;Tables2and3 aresame
3.2 对脾虚证哮喘小鼠BAI。F中炎症细胞的影胞和中性粒细胞数目,但作用强度不及其对脾虚证
响:致敏小鼠经抗原多次攻击后,BALF中的白细胞哮喘小鼠,而且其对单纯哮喘小鼠白细胞总数增加
总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数目明显增多。与 无明显影响,见表2。
正常组比较,单纯哮喘模型组分别增加了2.93、733.3对抗原攻击后小鼠支气管肺组织病理学的影
和13.0倍;脾虚证哮喘模型组分别增加了2.88、响:镜检可观察到单纯哮喘模型组和脾虚证哮喘模
114和11.6倍。脾虚证哮喘模型组的嗜酸性粒细胞型组的小鼠肺组织血管周围和支气管周围有嗜酸性
比单纯哮喘模型组增加更为明显,两者比较差异显 粒细胞浸润,与正常组小鼠比较有明显差异。脾虚证
著(P<0.05)。CVFS0.3和2.7g/kg组能明显减 哮喘模型组又较单纯哮喘模型组病理变化严重,经
少脾虚证哮喘小鼠BAI。F中的自细胞总数、嗜酸性CVFS0.3和2.7g/kg治疗后,嗜酸性粒细胞浸润
粒细胞和中性粒细胞数目。虽然CVFS0.3和2.7 程度均明显减轻,见图1。
g/kg组也能显著抑制单纯哮喘小鼠的嗜酸性粒细 3.4对脾虚证哮喘小鼠脾脏指数的影响:小鼠经抗
表2 CVFS对脾虚证哮喘小鼠BALF中炎症细胞的影响(i±s)
Table2 EffectofCVFSOilinflammatorycellsinBALFofasthmaticmicewithspleen—deficiencysyndrome(;±s)
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1359·
A-正常组 B-单纯哮喘模型组 c一脾虚证哮喘模型组D-单纯哮喘+cVFs2.79/kgE-脾虚证哮喘+cvFs2.79/kg
图1 CVFS对哮喘小鼠支气管一肺组织噌酸性粒细胞浸润的影响(X400)
Fig.1EffectofCVFSoneosinophilsinfiltrationofbronchus—pulmonarytissueinasthmamice(×400)
原致敏后,脾脏指数明显增大,单纯哮喘模型组与正 本实验结果表明:脾虚证哮喘小鼠的气道高反
常组和脾虚证哮喘模型组比较差异均显著(P< 应性,BALF中的嗜酸性粒细胞数目,肺组织嗜酸性
0.01),见表3。脾虚证哮喘模型小鼠给予CVFS0.3 粒细胞炎性病理变化以及脾脏指数与单纯哮喘小鼠
和2.7g/kg治疗,与脾虚证哮喘模型组比较,脾脏 比较有明显差异(P<0.05)。CVFS能明显改善单
指数明显增加(P予CVFS0.3和2.7g/kg治疗后,与单纯哮喘模型 高反应性,减少BAI。F中的嗜酸性粒细胞数目,以
组比较无明显差异(P>o.05)。 及改善肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化,而对脾
表3 CVFS对哮喘小鼠脾脏指数的影响(卫±s) 虚证哮喘小鼠作用更为明显。CVFS能明显增加脾
Table3 EffectofCVFSonspleenindex
ofasthmamice(;±s)
组别 动物/只脾脏指数/(mg·g_1)
4讨论
本实验以OVA为抗原,以A1(OH)。凝胶为佐
剂,SC和ip致敏,再气雾吸人OVA进行攻击,建立
了小鼠哮喘模型,结果表明:模型小鼠BALF中白
细胞总数比正常小鼠明显增加,嗜酸性粒细胞数量
也显著提高,肺部病理学切片检查可见嗜酸性粒细
胞浸润,而且在小鼠肺功能测定中也发现同一剂量
的MCH激发时,模型组R。增高程度明显高于正常
组小鼠,与文献报道一致[5“]。根据中医“劳伤、食伤
等伐脾,致使脾不健运”的原理,复制了脾虚证哮喘
模型,即在哮喘模型的基础上累加脾虚证,造成脾虚
证哮喘模型小鼠体重显著下降,体毛疏松粗糙,毛色
无光泽,表现乏力、倦怠、喜扎堆,便溏等症状,与文
献报道一致[7]。本实验还观察到小鼠用OVA致敏
经抗原攻击后脾脏指数与正常小鼠比较明显升高,
而脾虚证哮喘模型组小鼠采用同样方法致敏和抗原
攻击却未观察到脾脏指数明显升高,提示脾虚证可
影响小鼠免疫器官脾脏的质量,但其免疫功能并未
被抑制,这在本实验的其他功能指标上可反映出来。
这些结果提示本实验中采用的造模方法是成功的。
虚证哮喘小鼠脾脏指数,而对单纯哮喘小鼠的脾脏
指数无明显影响,提示CVFS可能不是一个免疫抑
制剂,而可能通过免疫调节起作用。
目前临床治疗哮喘首选药物为免疫抑制剂糖皮
质激素,但长期使用会有许多不良反应。为了避免激
素的副作用,人们设法采用其他抗炎药物来替代激
素。根据中医药治疗的整体调治,扶正固本,在治疗
疑难杂证所具有独特的优势,开发中草药新药源来
治疗哮喘就具有十分重要的意义。早在15世纪《滇
南本草》就有关于隐孑L菌的记载。隐孑L菌在民间用于
治疗气管炎和哮喘。因该菌为腐生真菌,生态环境严
格,以致蕴藏量少,资源紧缺,故对隐孔菌发酵培养
来作为新药源的开发。通过与野生隐孔菌比较,发酵
培养隐孑L菌化学成分基本上与野生隐孑L菌相似[8]。
最近研究证明:人工发酵的虫草菌粉对致敏豚鼠抗
原攻击引起的R。。升高和动态肺顺应性下降以及大
鼠气道嗜酸性粒细胞炎性浸润有明显抑制作用[9]。
同样,CVFS对大鼠多形核粒细胞生成和释放炎症
介质白三烯(LTB。、LTC。和LTD。)有明显抑制作
用Do]。从隐孔菌发酵物中提取的多糖成分能明显减
少抗原攻击致敏豚鼠肺组织释放白三烯,抑制致敏
豚鼠气管Schultz—Dale反应[1叼;抑制致敏豚鼠抗原
攻击的气道炎症和气道高反应性,也明显抑制血小
板活化因子(PAF)诱导的嗜酸性粒细胞趋化作
用[12|。隐孔菌发酵物平喘和抗变态反应作用机制可
能与其抑制白三烯生成和释放,调节Thl和Th2
细胞平衡有关(未发表)。
综合上述结果表明,CVFS可明显改善脾虚
万方数据
·1360· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
症状,抑制脾虚证哮喘小鼠的气道高反应性和炎症
反应,从而提示了CVFS可用于临床脾虚证哮喘的
治疗。
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注射用熊胆粉对大鼠脑血栓的影响
张庆镐1,徐惠波2,朴惠善p
(1.延边大学医学院,吉林延边133000;2.吉林省中医中药研究院,吉林长春130000)
摘要:目的观察注射用熊胆粉对脑血栓、脑缺血动物模型的影响。方法观察注射用熊胆粉iv给药后对大鼠
大脑中动脉血栓模型、不完全性脑缺血、血小板、血栓形成、血瘀大鼠血液流变性的影响。结果 注射用熊胆粉可明
显抑制大鼠体内外血栓的形成,降低血液黏度,改善血液流变性,抑制血小板聚集,降低血小板黏附性,改善血栓性
缺血脑组织病变程度,降低毛细血管通透性,且可降低损伤脑组织中丙二醛(MDA)水平,保护超氧化物歧化酶
(sOD)活性。结论注射用熊胆粉对脑缺血有保护和治疗作用。
关键词:注射用熊胆粉;脑血栓;脑缺血;血液流变学;毛细血管通透性
中图分类号:R286.10 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)09—1360—05
EffectofF以Ursipowderfoinjectiononcerebralthrombosisinrats
ZHANGQing—ga01,XUHui_b02,PIAOHui—shanl
(1.MedicalS hoolofYanbianUniversity,Yanbian133000,China;2.JilinResearchInstituteof
TraditionalChineseMedicine,Changchun130000,China).
Keywords:FelUrsipowderinjection;cerebralthrombosis;cerebral—ischemia;hemorrheology;
permeabilityofbloodcapillary
熊胆粉具有清热、镇痉、明目等功效,近年来,由 于熊胆粉资源日益扩大,引起了人们的广泛重视,并
收稿日期:2005—02—12
基金项目:吉林省科技发展计划重点项目(9703047
作者简介:张庆镐(1964一),男,朝鲜族,吉林省延吉人,副教授,硕士学位,研究方向为中药药效学。
Tel:(0433)2732078E—mail:zq90621@yahoo.corn.en
*通讯作者朴惠善Tel:(0433)2660604E—mail:phshan50@yahoo.corn.en
万方数据
隐孔菌发酵物对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响
作者: 包兆胜, 李和权, 邵传森, 章辉, 谢强敏, BAO Zhao-sheng, LI He-quan, SHAO
Chuan-sen, ZHANG Hui, XIE Qiang-min
作者单位: 包兆胜,BAO Zhao-sheng(浙江大学医学院,浙江,杭州,310031;台州学院医学院,浙江,椒江
,318000), 李和权,邵传森,章辉,谢强敏,LI He-quan,SHAO Chuan-sen,ZHANG Hui,XIE
Qiang-min(浙江大学医学院,浙江,杭州,310031)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(9)
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1. 杨振平.张萍.牛玉杰.YANG Zhenping.ZHANG Ping.NIU Yujie 肺染木尘对大鼠肺脏器系数及支气管肺泡灌洗液
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9. 陈江华.刘金保.陆丽.梁成结.张静.董晓先.赵卫.赵汉宁.王桂房.何慧华.CHEN Jian-hua.LIU Jin-bao.LU Li.
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3.朱一亮 U75302阻断LTB<,4>对豚鼠哮喘反应的调节作用[学位论文]硕士 2006
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