全 文 ：对 CCl4造成的大鼠慢性肝损伤具有防治作用。
TN Fα主要来源于单核细胞 [4 ] ,在肝脏有炎性
损伤时 ,也可来源于炎症区的肝细胞 [5 ]。它能激活多
种炎症细胞 [4 ] ,并可直接损伤肝细胞 [5 ] ,增强炎症活
动度 ,加重对肝组织的损伤。韩家文等 [6 ]报道苦参素
能抑制单核巨噬细胞的功能。 王会贤等 [7 ]指出其具
有双向调节免疫作用。 体外实验证实 [ 8 ]其对肝细胞
凋亡有阻断作用。本研究也证实:苦参素能下调血清
TN Fα水平。从而提示:苦参素对慢性肝损伤的防治
作用可能与其下调血清 TNFα水平有关 ,其确切的
作用机制有待于进一步探讨。
参考文献:
[1 ]　陈缙云 ,向文玉 ,周国燎 ,等 .氧化苦参碱对实验性肝损伤保护
作用的观察 [ J ]. 药学通报 , 1983, 18( 7): 23-25.
[2 ]　黄志刚 ,翟为溶 .实验性肝纤维化模型种类及特点 [ J] . 肝脏 ,
1997, 2( 1): 51-55.
[ 3]　吴　军 ,包林平 ,贺伯明 ,等 .血清 IV型胶原测定在临床肝纤
维化中的应用 [ J ].上海医学检验杂志 , 1998, 13( 3): 142-143.
[4 ]　 Yoshiok a K, Kakum u S, Arao M , et al . Immunohistochemi-
cal s tudies of in t ra-hepatic tumour necrosis factorαin ch ronic
liv er diseas e [ J] . J Clin Pathol , 1990, 43: 298-302.
[ 5 ]　 Gon zá l ez-Amaro R, Garcí a-M onzó n C, Garí a-Bucy L, et a l.
Induction of tum our necrosis factor α production b y h uman
hepatocytes in ch ronic vi ral h epati ti s [ J] . J Exp M ed, 1994,
179: 841-848.
[6 ]　韩家文 ,冯晓君 ,白惠卿 ,等 . 氧化苦参碱对小鼠激活的巨噬细
胞吞噬功能的影响 [ J] .北京医科大学学报 , 1987, 19( 4): 269-
270.
[7 ]　王会贤 ,章灵华 ,杜守英 ,等 . 氧化苦参碱对淋巴细胞增殖的影
响 [ J] .中草药 , 1994, 25( 7): 362-389.
[8 ]　王俊学 ,王国俊 ,蔡　雄 ,等 . 氧化苦参碱及甘草甜素对小鼠肝
细胞凋亡的影响 [ J ] .第二军医大学学报 , 1999, 20 ( 4 ): 222-
224.
墨旱莲乙酸乙酯总提物对正常小鼠免疫功能的影响
刘雪英 ,王庆伟 ,蒋永培* ,赵越平* ,汤海峰
(第四军医大学唐都医院 药剂科 ,陕西 西安　 710038)
摘　要: 目的　研究墨旱莲乙酸乙酯总提物 ( EAEEP)对小鼠免疫功能的影响。方法　以大、中、小 3个剂量给药 ,
考察 EAEEP对小鼠免疫脏器系数、碳粒廓清指数、迟发性变态反应、血清溶血素及脾抗体形成细胞等指标的影
响。结果　 EAEEP可显著降低小鼠的脾指数及碳粒廓清指数 ,抑制迟发性过敏反应 ,降低溶血素水平。 EAEEP可
显著提高小鼠的胸腺指数 ,对脾细胞抗体形成功能无显著影响。 结论　 EAEEP具有调节小鼠免疫功能的作用。
关键词: 墨旱莲 ;墨旱莲乙酸乙酯总提物 ;碳粒廓清率 ;迟发型变态反应 ;血清溶血素 ;抗体形成细胞
中图分类号: R286. 95　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0341 03
Effect of ethyl acetate extract of Eclipta prostrata on immune system in normal mice
LIU Xue-ying , WANG Qing-w ei, JIAN G Yong-pei, ZHAO Yue-ping , TAN G Hai-feng
　　 ( Depa rtment o f Pharmacy, Tangdu Hospital, Four th Militar y M edical Univ ersi ty, Xi an Shanx i 710038, China )
Key words: Ecl ipta prostrata L. ; ethy l aceta te ex t ract o f E. prostrata; charcoal clearance; delayed
type hypersensi tivi ty ( DTH) ; hemoly sin; plague fo rming cell
　　中药墨旱莲为菊科鳢肠属植物鳢肠 Eclipta
prostrata L. 的干燥地上部分 ,始载于《唐本草》 ,具
有滋肝补血、凉血止血之功 ,用于牙齿松动、须发早
白、眩晕耳鸣、腰膝酸软、阴虚血热、吐衄、尿血等
症 [1 ]。墨旱莲水煎剂可显著增强小鼠的非特异免疫
及细胞免疫功能 [2 ]。有报道其免疫增强作用的分子
基础是其黄酮成分 [3 ]。 而对墨旱莲的免疫抑制活性
成分则未见报道 ,我们在实验中首次发现墨旱莲的
乙酸乙酯总提物具免疫抑制活性 ,并对其免疫抑制
功能的机制进行了研究。
1　材料及方法
1. 1　药品与试剂:墨旱莲乙酸乙酯总提物 ( ethylac-
etate ex t ract o f Eclipta prostrata, EAEEP)由西京
医院植化室汤海峰、赵越平药师提供 ,每克相当于原
生药 120 g。 主要成分为皂苷类物质 , ) ,研为细末 ,
过 200目筛 ,用时以蒸馏水配制成适宜浓度。
·341·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-06-13作者简介:刘雪英 ( 1972-) ,女 ,山东潍坊人 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事中药药理学的研究。 E-mail: xyliu@ ch inaice. com
Tel: 029-3377716
* 第四军医大学西京医院药剂科
1. 2　仪器:德国 Sartorius电子天平 , WZ800-D3A
可见紫外分光光度计 (北京第二光学仪器厂 ) ,
LDZ5-2型低速自动平衡离心机 (北京医用离心机
厂 ) , Olympus CH电子显微镜 ( Olympus optical
Co. Ld)。
1. 3　动物: 昆明种小鼠 ,雌雄兼用 , 18～ 22 g , 6～ 7
周龄 ,二级动物 ,购自第四军医大学实验动物中心 ,
动物合格证号:陕动准字 01号。
1. 4　方法
1. 4. 1　分组与给药方法: 实验小鼠随机分组 ,不禁
食水 ;用药组 ig EAEEP,分别为 4, 8, 16 mg /kg 3
个剂量或 8, 16 mg /kg 2个剂量 ,对照组用等容量生
理盐水 ( NS) ,每日 1次 ,连续 6 d。
1. 4. 2　小鼠免疫器官称重法:末次给药 24 h后 ,眼
眶放血处死动物 ,称体重 ,用电子天平精密称胸腺及
脾脏重量 ,计算胸腺指数及脾指数 [4 ]。
1. 4. 3　小鼠碳粒廓清法: 末次给药 30 min后 ,尾 iv
墨汁 0. 1 mL /10 g体重 ,注射后 2, 10 min用吸管
(预先用肝素溶液湿润 )分别从眶后静脉丛取血 20
μL,溶于 2 mL 0. 1% Na2 CO3溶液中摇匀 ,于 650
nm测吸光度 A [4 ]。
1. 4. 4　 SRBC所迟发型足跖厚度增加法: 给药第 3
天 ,小鼠 ip 2% SRBC 0. 2 mL致敏 ,末次给药后 ,用
游标卡尺测量左后足跖部厚度 ,然后于测量部位 sc
20% SRBC 20μL,注射后 24 h再用游标卡尺测量
左后足跖部厚度 ,以攻击前后足跖厚度的差值来表
示迟发性变态反应的程度 [5 ]。
1. 4. 5　血清溶血素测定法: 给药 3 d后 , ip 0. 2%
SRBC 0. 2 mL致敏。末次给药后 24 h,眼眶取血 ,室
温放置 1 h, 2 000 r /min离心 10 min,取血清用 N S
200倍。取稀释血清 1 mL置试管内 ,加 10% SRBC
0. 5 m L, 1∶ 10补体 1 mL。另设不加血清的对照管 ,
置 37℃ 水浴中保温 30 min,然后将管移入冰浴中
终止反应 , 2 000 r /min离心 10 min,取上清液 1 mL
加都氏剂 3 mL,混匀放置 10 min, 540 nm处测吸
光度。 另取 10% SRBC 0. 25 mL,加都氏剂 3. 75
m L,同法测吸光度 ,作为 SRBC 半数溶血值
( HC50 )。小鼠血清溶血素抗体含量以样品 ( HC50 )
表示。
HC50= 样品吸光度值 /SPBC半数溶血值×稀释倍数 [5 ]
1. 4. 6　定量溶血分光光度法: 给药第 3天 , ip 2%
SRBC 0. 2 mL致敏。末次给药后 24 h,处死动物 ,取
脾 ,用 N S制成 2× 106 /mL脾细胞悬液。另取试管 ,
每管加入脾细胞悬液 (空白对照管用 N S代替 )、
0. 2% SRBC和 1∶ 10补体各 1 mL,混匀 ,置 37℃
水浴温育 1 h, 3 000 r /min离心 10 min,取上清液
在 413 nm处测吸光度 A值 [5 ]。
2　结果
2. 1　 EAEEP对小鼠免疫器官指数的影响: 与 NS
组比较 , ig 给予 3个剂量的 EAEEP混悬液 ,其中
大、中剂量显著降低小鼠的脾指数 ,而显著增加小鼠
的胸腺指数 ,小剂量则无显著性差异 ,见表 1。
表 1　 EAEEP对小鼠胸腺及脾脏指数的影响 ( x± s ,n= 10)
组　别 剂量
( mg /kg)
胸腺指数
( mg /kg)
脾指数
( mg /k g)
N S - 2. 98± 0. 59 2. 94± 0. 40
EAEEP 4 3. 32± 0. 71 2. 75± 0. 81
8 3. 33± 0. 72* 2. 33± 0. 34* *
16 3. 53± 0. 69* 2. 27± 0. 30* *
　　与 NS组比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 2　 EAEEP对小鼠碳粒郭清率的影响: 结果表
明 , EAEEP的大、中剂量均显著降低小鼠的碳粒郭
清指数 ,小剂量无明显作用 ,见表 2。
表 2　 EAEEP对小鼠碳粒郭清率的影响 (x± s ,n= 11)
组　别 剂量
( mg /kg)
K
(× 10- 2 ) T值
N S - 5. 73± 2. 03 7. 74± 1. 18
EAEEP 4 4. 50± 2. 56 6. 94± 1. 33
8 3. 67± 0. 86* 6. 46± 0. 91* *
16 3. 41± 0. 86* 6. 38± 0. 72*
　　与 NS组比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 3　 EAEEP对小鼠迟发性变态反应的影响: 与
N S组比较 , EAEEP的大剂量显著抑制小鼠的迟发
性过敏反应 ,中剂量组则无明显的影响 ,见表 3。
2. 4　 EAEEP对小鼠血清溶血素抗体形成的影响:
ig EAEEP的大剂量能显著抑制小鼠溶血素的形
成 ,而中剂量组则无明显的影响 ,见表 4。
表 3　 EAEEP对小鼠迟发性足跖肿胀的影响 ( x± s ,n= 10)
组　别 剂量 ( mg /kg) 足跖厚度 (m m)
N S - 0. 37± 0. 07
EAEEP 8 0. 35± 0. 05
16 0. 19± 0. 07* *
　　与 NS组比: * * P < 0. 01
表 4　 EAEEP对小鼠血清溶血素抗体的影响 (x± s)
组　别 剂量 ( mg /kg) HC50
N S - 77. 96± 11. 09
EAEEP 8 66. 67± 4. 39
16 44. 67± 4. 85* *
　　与 NS组比: * * P < 0. 01
2. 5　 EAEEP对脾细胞分泌抗体功能的影响:
EAEEP的大、中剂量对脾细胞分泌抗体功能均无
显著影响 ,见表 5。
·342· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
表 5　 EAEEP对脾内抗体形成细胞的影响 (x± s ,n= 10)
组　别 剂量 ( mg /kg ) A413 nm
NS - 0. 39± 0. 06
EAEEP 8 0. 34± 0. 05
16 0. 33± 0. 05
3　讨论
近代研究表明 ,许多扶正药物对机体免疫功能
有双向调节作用。中药之所以产生双向调节作用 ,与
其所含有两种或多种功效、作用相反的化学成分是
分不开的 [ 6]。墨旱莲对小鼠脾细胞产生 IL-2的影响
在免疫抑制状态下呈提高作用 ,而在免疫增强状态
下呈抑制作用 ,具有双向调节作用 [7 ]。我们首次发现
墨旱莲乙酸乙酯总提物 (为皂苷类成分 )具免疫抑
制活性 ,能显著抑制小鼠免疫器官脾的发育 ,并显著
抑制巨噬细胞的吞噬功能 ,明显抑制 T细胞介导的
迟发性变成反应 ,降低血清溶血素水平 ,表明其显著
抑制机体的非特异免疫、细胞免疫及体液免疫功能 ,
提示墨旱莲中含有功效相反的化学成分 ,其对免疫
功能的双向调节作用是其各成分综合作用的结果。
同时 EAEEP可显著提高小鼠胸腺指数 ,促进胸腺
的发育 ,揭示对不同的免疫器官有不同的作用 ,也为
免疫双向调节作用的原因之一。
参考文献:
[1 ]　中国药典 [ S] . 2000年版 .一部
[2 ]　胡慧娟 ,杭秉茜 ,刘　勇 . 旱莲草对免疫系统的影响 [ J ]. 中国
药科大学学报 , 1992, 23( 1): 55-57.
[ 3]　张　梅 ,邸晓辉 ,刘　梅 .旱莲草中黄酮类成分的免疫调节作
用 [ J ]. 中草药 , 1997, 28( 10): 615.
[4 ]　李仪奎 . 中药药理实验方法学 [M ] . 上海:上海科学技术出版
社 , 1991.
[5 ]　薛　彬 . 免疫毒理学实验技术 [M ] . 北京:北京医科大学中国
协和医科大学联合出版社 , 1995.
[6 ]　张宏方 . 从中西医理论的异同看中药药理研究之思路 [ J ]. 医
学与哲学 , 1996, 17( 2): 86-88.
[ 7]　熊晓玲 ,李　文 . 部分扶正固本中药对小鼠脾细胞 IL-2产生
的双向调节作用 [ J ]. 中国实验临床免疫学杂志 , 1991, 3 ( 4):
37-38.
葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧 -复氧时脂质过氧化损伤的保护作用
朱智彤 ,姚　智 ,李会强 ,娄建石* ,卢　奕
(天津医科大学 免疫教研室 ,天津　 300203)
摘　要: 目的　观察葛根素 ( puerarin, Pue)对缺氧 -复氧损伤造成的大鼠乳鼠心肌细胞脂质过氧化反应的作用。 方
法　分别测定各个时点对照组、模型组及各给药组 ( 1, 0. 1, 0. 01 g / L Pue )培养上清中 SOD活性和 MDA含量 ,细
胞 M TT代谢率的变化。结果　缺氧及复氧都可造成 SOD活性下降、 MDA含量升高及 M T T代谢率下降 ,复氧后 2
h最为显著 (P < 0. 01)。 3种剂量 Pue均能对抗这 3个指标的异常变化 ,但浓度越小 ,作用越弱。结论　 Pue能减轻
缺氧时产生的自由基损害 ,减少 SOD的消耗 ,并可能促进其合成 ,亦可保护心肌细胞的线粒体功能 ,这些作用呈剂
量依赖趋势。
关键词: 缺氧-复氧 ;心肌细胞 ;葛根素 ;过氧化物歧化酶 ;丙二醛
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 04 0343 04
Protective effect of puerarin on cardiomyocytes of neonatal mice injuried by
lipid peroxidation during hypoxia-reoxygenation
ZHU Zhi-tong , YAO Zhi , LI Hui-qiang , LO U Jian-shi , LU Yi
( Depa rtm ent o f Immunology , Tianjin Univ ersity o f Medical Science, Tianjin 300203, China )
Key words: hypoxia-reoxygenation; ca rdiomyocy te; puerarin; superox ide dismutase; melondialde-
hyde
　　缺氧及其后更为严重的复氧损伤是各种缺血 -
再灌注损伤 ( ischemia-reperfusion injury )的共性。
文献报道脂质过氧化反应与缺氧 -复氧损伤 (hypox-
ia-reoxygenation injury )的发生、发展密切相关。 而
对葛根素是否通过增强心肌细胞的抗氧化能力来发
挥其保护作用知之甚少。 本研究采用给培养的心肌
·343·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2000-10-23作者简介:朱智彤 ( 1971-) ,女 ,天津人 ,讲师 ,在读博士 ,研究方向:免疫药理。 Tel: ( 022) 23313909　 E-mai l: zh uzt-h el lo@ yah oo. com
* 本校药理教研室