全 文 ：2007年 9月
September 2007
色 谱
Chinese Journa l of Chrom atography
Vo.l 25 No. 5
740 ～ 742
收稿日期:2007-03-12
第一作者:原红霞 ,女 ,硕士研究生 , Te l:(024)23986295, E-m a il:yuanhongxia609@ 163. com.
通讯联系人:于治国 ,男 ,副教授 , Te l:(024)23986295, E-m a il:zhiguo-yu@163. com.
反相高效液相色谱法分离测定墨旱莲中的鳢肠醛
原红霞 , 　高晓霞 , 　赵云丽 , 　王晓英 , 　唐　倩 , 　于治国
(沈阳药科大学药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:对墨旱莲中的有效成分鳢肠醛进行了分离和结构鉴定 , 并对其含量进行了分析。色谱条件:Krom as il C18柱
(200mm ×4.6mm, 5μm),流动相为乙腈-0. 1%磷酸水溶液(体积比为 65∶35),流速为 1.0mL /m in,柱温为 30℃, 检
测波长为 365 nm, 进样量为 10μL。结果表明, 鳢肠醛的峰面积与其质量浓度有良好的线性关系(r=0.999 3)。方法
的加样回收率为 96.7%～ 100. 0%。该方法简便 、快速 、准确 ,可作为墨旱莲质量控制的一个有效方法。
关键词:反相高效液相色谱法;鳢肠醛;墨旱莲
中图分类号:O658　　文献标识码:A　　文章编号:1000-8713(2007)05-0740-03　　栏目类别:研究论文
Isolation and Determ ination of Ecliptal inHerba Ecliptae by
Reversed-PhaseH igh Performance L iquid Chromatography
YUAN Hongxia, GAO X iaoxia, ZHAO Yunli, WANG X iaoying, TANG Qian, YU Zhiguo
(School ofPharmacy, Shenyang Pharmaceutica lUniversity, Shenyang 110016 , China)
Abstract:The ecliptalw as isolated fromHerba Ecliptae by high perform ance liquid chromatog-
raphy and identified by m ass spectrometry and nuclear m agnetic resonance (1H NMR). A
m ethod for determ ination of ecliptal inHerba Ecliptae was developed by using a K rom asil C18
column(200mm ×4.6 mm , 5 μm)w ith am ixture of acetonitrile and 0.1% phosphoric acid so-
lu tion (65∶35, v /v) asmobile phase at a flow rate of 1.0 mL /m in. The detection w avelength
was set at 365 nm and temperaturew as set at30℃. The volum e of in jectionw as 10 μL. There
was good linear relationship (r =0.999 3) between themass concentration and the peak area of
ecliptal in the range of 3.0 - 60.0 μg /mL. The recovery was found to be in the range of96.7%
- 100.0%. T he results of the experiments have demonstrated that the es tablished method is
rapid and simplew ith good accuracy and reproducib ility. T hemethod is suitable for the quality
contro l ofHerba Ec liptae from different sources.
K ey words: reversed-phase high performance liquid chrom atography (RP-HPLC);ecliptal;
Herba Ecliptae
　　墨旱莲 (Herba Ecliptae)俗称旱莲草 ,为菊科
鳢肠属植物鳢肠的地上干燥部分 ,是常用中药之一 ,
具有滋肝补肾 ,凉血止血之功能[ 1] 。经研究发现墨
旱莲具有较强的肝保护作用 [ 2 -4]及显著的抗炎 、免
疫调节作用 [ 5, 6] 。目前国内外对墨旱莲的化学成
分 [ 7 - 9]和药理方面 [ 2 - 6, 10] 的研究较多 ,但有关药材
的质量控制的报道相对较少 ,且是对墨旱莲中香豆
草醚类成分进行分析的报道[ 11, 12] 。噻吩类化合物
是墨旱莲中的一类特有成分 ,鳢肠醛 (化学名为 α-
醛基三聚噻吩 ,结构式见图 1)[ 13]就是其中的一种 。
为了对墨旱莲药材质量进行控制 ,我们选择鳢肠醛
作为指标性成分 , 采用反相高效液相色谱法 (RP-
HPLC)对其含量进行了测定。试验结果表明该方
法准确 、快速 、专属性强 ,为墨旱莲的深入研究及质
量控制提供了可行的方法。
图 1　鳢肠醛的结构式
F ig. 1　Structure of ec liptal
1　实验方法
1. 1　仪器与试药
　　高效液相色谱仪 (日本岛津公司 ),包括 LC-10
ATvp输液泵 , SPD-10 Avp可变波长紫外检测器;
TA-130柱温箱;Anastar色谱数据处理 系统。
Avance-300超导核磁共振仪(NMR ,美国 Bruker公
　第 5期 原红霞 ,等:反相高效液相色谱法分离测定墨旱莲中的鳢肠醛
司 );2010A-LCMS(日本 Shim adzu公司);RE-52型
旋转蒸发仪 (上海博通经贸有限公司 );DZF-1型真
空干燥箱 (北京永光明医疗仪器厂);ZF7B三用紫
外分析仪(上海康华生化仪器制造厂);熔点测定仪
(XT4A数字显示双目显微熔点仪 );DILW型电子
恒温水浴(北京永光明医疗仪器厂 );Sephadex LH-
20(大连开米隆科技有限公司 );柱色谱用硅胶 (青
岛海洋化工厂);薄层色谱用硅胶 G(青岛海洋化工
厂 );超声波清洗器(KQ ,昆山市超声波仪器厂)。
　　乙腈(色谱纯 ),二次蒸馏水 (自制),磷酸 、石油
醚 、乙酸乙酯 、正丁醇均为分析纯 , 95%乙醇 (药
用 )。鳢肠醛对照品 (自制 , HPLC归一化纯度
99.8%),墨旱莲药材购自各地药材公司及药店 (经
沈阳药科大学孙启时教授鉴定为正品 )。
1. 2　鳢肠醛对照品的制备
　　取墨旱莲生药 1 000 g,用 95%乙醇渗漉 ,滤过 ,
合并滤液 ,减压回收乙醇得浸膏 。取浸膏 ,加入 5倍
量水 ,于 80℃水浴中加热 0.5 h,趁热过滤 ,水相依
次用石油醚 、乙酸乙酯萃取 。将乙酸乙酯萃取液减
压回收得粗提物约 50 g。粗提物经硅胶柱分离 ,依
次用不同比例的石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱 (极
性由小到大 ),于石油醚-乙酸乙酯体积比为 20∶1时
得黄色固体 。再进行凝胶柱色谱分离 ,用甲醇洗脱 ,
得到噻吩类化合物鳢肠醛 (黄色簇状结晶 )。
1. 3　含量测定
1. 3. 1　色谱条件
　　色谱柱:K romasil C18 (200 mm ×4.6 mm , 5
μm);流动相:乙腈-体积分数为 0.1%的磷酸水溶
液 (体积比为 65∶35);流速:1.0 mL /m in;柱温:30
℃;检测波长:365 nm;进样量:10μL。
1. 3. 2　对照品溶液的制备
　　取对照品约 7. 5 mg,精密称定 ,置于 50 mL容
量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得对照品
储备液 (含鳢肠醛 150μg /mL)。
1. 3. 3　供试品溶液的制备
　　取经 40 ℃干燥的墨旱莲粉末 (过 80目筛 )约
0.5 g,精密称定 ,精密加入体积分数为 95%的乙醇
10 mL ,称定重量 ,超声提取 30m in,放冷 ,称重 。用
95%的乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,经 0.45 μm微
孔滤膜滤过 。取续滤液按照上述色谱条件测定 ,以
外标法计算含量 。
2　结果与讨论
2. 1　自制对照品的结构鉴定
　　“ 1.2”节所得黄色结晶的熔点为 144 ～ 145 ℃;
易溶于氯仿 、乙酸乙酯 ,难溶于甲醇 、石油醚 。质谱
数据:m /z 276 (M +)。紫外光谱 λmax(甲醇溶液 ):
394 nm , 365 nm。 1H-NMR (CDC l3):9.84 (1H , s,
CHO), 7.67 (1H , d, J =4.0 Hz, 3-H);7.13 (1H , d,
J =3.7 Hz, 13-H), 7.05 (1H , dd, J =5.3, 3.7 Hz,
12-H);7.16 ～ 7.27 (4H , m , 4, 7, 8, 11-H)。以上数
据与文献 [ 8]的报道一致 ,证明该结晶为鳢肠醛。
HPLC(色谱条件同 “ 1.3.1 ”节 )归一化纯度为
99.8%。
2. 2　色谱条件的选择
　　分别用甲醇-水 、甲醇-水-磷酸 、乙腈-水 、乙腈-水-
磷酸以不同比例进行考察 ,结果表明乙腈-水-磷酸系
统色谱峰峰形好 ,保留时间短 ,柱效高 ,可达到理想的
分离度。检测波长选择其最大吸收波长 365 nm。
2. 3　HPLC系统适用性试验
　　取供试品溶液 10μL进样 ,记录色谱图 ,鳢肠醛
的保留时间约 10.0 m in,对称因子为 0.95 ～ 1.05,
与相邻峰的分离度均大于 1.5 ,理论塔板数不低于
3 000。供试品及对照品的色谱图见图 2。
图 2　(a)鳢肠醛对照品和(b)样品的色谱图
Fig. 2　Chromatogram s of(a) ec liptal standard
and (b) a samp le
2. 4　提取条件的选择
2. 4. 1　提取方法及溶媒的考察
　　取经 40℃干燥的墨旱莲药材(产地为江苏)粉
末(过 80目筛)约 0.5 g,精密称定 ,考察了不同的
提取溶媒和不同的提取条件 (见表 1), 结果发现
95%乙醇回流提取测得的鳢肠醛含量最高 ,但 95%
741
色 谱 第 25卷
乙醇超声提取的含量与其相差不大 ,因超声方法操
作简便 ,所以选择 95%乙醇超声提取。
表 1　样品中鳢肠醛提取方法的选择(n =3)
Table 1　Selection of extractionm ethod for eclip tal
from samples (n=3)
Extraction me thod
Sample
am ount /g
Content /
(mg /g)
(1) 95% ethanol reflux 0. 4976 0. 2306
(2) 75% ethanol reflux 0. 5024 0. 1856
(3) 50% ethanol reflux 0. 5020 0. 1237
(4) 95% ethanol u ltrasonic 0. 4976 0. 2284
(5) 75% ethanol u ltrasonic 0. 4996 0. 1782
(6) 50% ethanol u ltrasonic 0. 5000 0. 1104
(7)m ethanol reflux 0. 5032 0. 2017
(8) 75% m ethanol reflux 0. 4998 0. 1694
(9) 50% m ethanol reflux 0. 4994 0. 1158
(10)m ethanol u ltrasonic 0. 4976 0. 1857
(11) 75%m ethanolu ltrasonic 0. 5024 0. 1629
(12) 50%m ethanolu ltrasonic 0. 5014 0. 1182
2. 4. 2　提取时间的考察
　　取经 40 ℃干燥的墨旱莲药材 (产地为江苏 )粉
末约 0.5 g,精密称定 ,用 95%乙醇超声提取 ,考察
了提取时间对测得的鳢肠醛含量的影响 (见表 2),
结果发现提取 30 m in后 ,鳢肠醛已提取完全。
表 2　样品中鳢肠醛提取时间的选择(n =3)
Tab le 2　Selection of extraction tim e for ec liptal
from samples (n=3)
Extrac tion time /m in Sample am ount /g Content /(m g /g)
15 0. 5006 0. 2146
30 0. 4991 0. 2292
45 0. 5018 0. 2296
2. 5　HPLC方法学考察
2. 5. 1　线性范围
　　分别精密量取储备液 0.2, 0.4 , 1.0 , 2.0 , 3.0和
4.0mL,置于 10mL量瓶中 ,加入甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,得标准系列溶液 。分别进样 10 μL,以标准溶
液浓度 (mg /L)为横坐标(X ),色谱峰面积为纵坐标
(Y),绘制标准曲线 ,得鳢肠醛的回归方程为:Y =
1.2×104 X - 1.3 ×103 (r =0.999 3)。鳢肠醛在
3.0 ～ 60.0μg /mL范围内呈良好的线性关系。
2. 5. 2　精密度
　　精密吸取同一供试品 (产地江苏 )溶液 10 μL,
重复进样 6次 ,记录色谱图 ,测量峰面积 ,其相对标
准偏差 (RSD)为 1.5%,表明仪器的精密度良好 。
　　平行制备 6份供试品 (产地江苏),测得鳢肠醛
的平均含量 (按生药计 )为 0.228 4 mg /g, 其 RSD
为 1.9%,表明方法的精密度良好 。
2. 5. 3　溶液的稳定性
　　取新制备的同一份供试品溶液 ,分别在室温放
置 0 , 1, 2, 4 , 8, 12 h时进样 ,测得峰面积的 RSD为
1.2%(n =6),表明供试品溶液在 12 h内稳定 。
2. 5. 4　方法的回收率
　　称取已知含量的墨旱莲样品 (产地江苏 )9份 ,
每份 0.25 g,精密称定 ,分别精密加入对照品储备溶
液 0.2, 0.4和 0.6 mL,每个平行 3份 ,按 “1.3.3”节
所述方法操作 ,在上述色谱条件下进行分析 ,计算鳢
肠醛的含量 ,并根据加入量计算回收率 (见表 3)。
表 3　样品中鳢肠醛的回收率(n =3)
Table 3　R ecovery of eclipta l in sample (n =3)
O rig inal /mg Added /mg Found /mg Recovery /% RSD /%
0. 057 0. 030 0. 086 96. 7 1. 4
0. 057 0. 060 0. 116 98. 3 1. 1
0. 057 0. 090 0. 147 100. 0 1. 2
2. 6　样品测定
　　将不同产地的墨旱莲药材按 “ 1.3.3”节方法操
作 ,测定其中鳢肠醛的含量。结果表明 ,鳢肠醛的含
量分别为湖北 0.238 mg /g,广东 0.275 mg /g,江苏
0.228 mg /g,沈阳 0.281 mg /g,安徽 0.334 mg /g,
北京 0.228 mg /g。
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