全 文 ：· 10 8 6 · 中草药 C h in e s e T r a d it io n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 3 5 卷第 2 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月
( k a e m P fe r o l 3一O 一r u t i n o s id e ) 。
化合物 v : 黄色粉末 , F A B 一M S m /z : 6 0 9 (〔M 一
H 丁 ) 。 根据其’H 一N MR 、 ‘, C 一N M R 数据及与文献〔7〕
对照 , 确定为芦丁 。
致谢 : 云 南白药集 团博士后 工 作站邓德 山 博士
鉴定植物样品 ; 中国科学院上海有机化 学研 究所黄
悦博士帮助检索相关文献 。
R e f e r e n C e S :
[ l j S h i J L
, z h u G P
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1 3 9 7
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密蒙花化学成分及其活性研究
韩 澎‘ , 崔亚君 2 , 郭洪祝“ , 果德安 ,
( 1
. 北京大学药学院 ,北京 1 0 0 0 8 3 ; 2 . 首都医科大学中医药学院 , 北京 1 0 0 0 1 3 )
摘 要 : 目的 为了进一步揭示中药密蒙花药理活性物质基础 ,研究发现活性成分 ,对中药密蒙花的化学成分及其
活性进行系统 的研究 。 方法 经过正相 、反 相硅胶柱 , S即 h ad e x L H 一20 ,制备液相等色谱方法反复分离 。 利用各种波
谱数据分析鉴定了 1 个化合物的结构 , 并有针对性地对分离得到的化合物进行了醛糖还原酶抑制活性测试和以
D N A 拓扑异构酶 w 为靶点的抑菌活性筛选 。 结果 分离得到 的化合物中 ,黄酮及其昔类 4 个 , 分别是 I (芹菜素 ,
a p ig e n i n ) 、 l (蒙花昔 , l in a r in ) 、 皿 (芹菜素一 7 一O 一芸香糖昔 , a p i g e n in 一 7 一O 一。一L 一r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 一 6升爵D 一g lu e o p y r a -
n o s id e )和 w (木犀草素一 7 一O 一葡萄糖昔 , lu t e o lin 一 7 一O 一件D 一g l u e o p y r a n o s id e ) ;苯 乙醇昔 4 个 ,分别是 V (毛蕊花昔 , v e r -
b a s e o s id e , 即洋丁香昔 , a e t e o s id e ) 、 u (异洋 丁香昔 , i s o a e t e o s id e ) 、 VI 一 1乙2 ( e is t a n o s id e F a & b ) 、姗 一 1衣2 ( e a m P n e o s id e
狂 a肠 ) ; 三菇皂昔 3 个 ,分别是 仪 (密蒙花昔 A , m im e n g o s id e A ) 、 x (密蒙花昔 B , m im e n g o s id e B ) 、 XI ( s o n g a r o s id e
A ) 。活性测试结果表 明 : 班 、 皿 、 砚具有较强醛糖还原酶抑制活性 , 抑制率均高于 阳性对照懈皮素 ; I 、 皿 、 v 、 ”和 xI
对 D N A 拓扑 异构酶 W 均有不同程度的抑制作用 , 在与环丙沙 星相同质量浓度下 (l m g / m l J ) ,产生类似的抑制效
果 。 结论 n 个化合物中 ,化合物 班 , 珊 一 1 、 2 , 姗 一 1 、 2 和 xI 为首次从本属植物以及本种植物中分离得到 。 首次 以
D N A 拓扑异构酶 W 为靶点对密蒙花中的流份及单体化合物进行 了抑菌活性筛选测试和醛糖还原酶抑制活性测
试 , 考察结果具有实际指导意义 。
关键词 :密蒙花 ; 醛糖还原酶抑制剂 ; D N A 拓扑异构酶 IV
中图分类号 : R 2 8 4 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 0 2 5 3 一 2 6 7 0 ( 2 0 0 4 ) 1 0 一 1 0 8 6 一 0 5
C h e m i e a l e o n s t i t u e n t s o f B u d d l ej a e o. fj 艺e i n a l i s a n d t h e i r b i o a c t i v i t i e s
H A N P e n g ’ , C U I Y a
一
iu n Z
,
G U O H o n g
一 z h u ‘
,
G U O D e
一 a n l
( 1
.
S e h o o l o f P h a r m a e y , P e k in g U n iv e r s i t y , Be i一in g 1 0 0 0 8 3
, Ch i n a ; 2
.
S e h o o l o f T r a d it io n a l Ch in e s e M e d ie i n e
,
C a p it a l M e d ie a l U n i v e r s i t y
,
Be ii in g 1 0 0 0 1 3
, C h i n a )
A b s t r a e t : o b j e e t T o i n v e s t i g a t e t h e e h e m i e a l e o n s t i t u e n t s o f B u d d l eja e 化fi e i n a l i s M a x im
. , t h e r e l a -
t i o n s h i p b e t w e e n t h e i r b io a e t i v i t i e s , a n d t h e m e d i e i n a l a P P li e a t i o n o f t h e h e r b
.
M e t h o d s V a r i o u s e h r o
-
m a t o g r a p h i e t e e h n i q u e s w e r e e m p l o y e d fo r t h e i s o l a t i o n a n d p u r i f ie a t i o n o f t h e e o n s t it u e n t s
,
i n e l u d in g s i li e a
g e l
,
S e p h a d e x L H
一 2 0 , a n d P r e
一
H P L C
.
T h e s t r u e t u r e s o f 1 1 i s o l a t e d e h e m i e a l e o m p o u n d s w e r e e l u e id a t e d
b y e h e m i e a l a n d s p e e t r a l a n a l y s is (N M R
, IR
,
U V
, a n d M S )
.
T h e a l d o s e r e d u e t a s e i n h ib i t i n g t e s t a n d t e s t
o n D N A t o p o i s o m e r a s e IV in h i b i t o r y e f fe e t w e r e a p p l ie d t o e v a l u a t e t h e b i o a e t i v i t y o f b o t h t h e p u r i f ie d
收稿 日期 : 2 0 0 4 一 0 1 一 0 8
墓金项 目 : 国家科技部攻关课题 ( 9 9 ~ 92 9一 0 1一 2 9)作者简介 : 韩 澎 , 女 ,硕 士 , 毕业于北京大学药学院 。
二 通讯作者 T e l/ F a x : ( 0 10 ) 8 2 8 0 2 0 2 4
E 一m a il : p h a n @ e a p i t a lb i o e h ip
. e o m
E 一m a i l : g u o h z @ b jm u
. e d u
. e n
中草药 C h in e s e T r a d it i o n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 3 5 卷第 1 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月 · 1 0 8 7 ·
e o m P o u n d s a n d t h e e r u d e f r a e t io n
.
R e s u l t s E l e v e n e o m P o u n d s w e r e is o l a t e d f r o m t h e e x t r a e t s o f B 以2刀王‘-
i n a l is
.
T h e y a r e f o u r f l a v o n e s a n d t h e i r g l y e o s id e s : a p i g e n in ( I ) , l i n a r i n ( l ) , a p ig e n i n 一 7 一O 一 a 一L -
r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 一6 ) 一日一D 一 g l u e o p y r a n o s id e ( l ) , a n d l u t e o l i n 一 7 一O 一日一D 一 g l u e o s id e ( 皿 ) ; f o u r p h e n y l e n -
t h a n o id g l y e o s id e s : v e r b a s e o s id e ( V ) 八 s o a e t e o s id e ( VI ) , e i s t a n o s i d e F , a a n d b ( VI 一 1 a n d Z ) , e a m p n e o -
s id e l
, a a n d b ( VI
一1 a n d Z ) ; t h r e e t r i fe r p e n o id s a p o n in s : m im e n g o s id e A ( 仄 ) , m im e n g o s id e B ( x ) ,
s o n g a r o s id e A ( XI )
.
S o m e o f t h e t h e m ( s u e h a s l , l , a n d VI ) s h o w e d t h e a l d o s e r e d u e t a s e i n h ib i t o r y a e -
t iv it i e s w i t h a h i g h e r i n h ib i t o r y r a t e t h a n t h a t o f q u e r e e t i n ( t h e P o s i t iv e e o n t r o l ) , o t h e r s ( s u e h a s l , I ,
V , vI , a n d XI ) d is p l a y e d t h e i n h ib i t i t o r y a e t i v i t i e s a g a i n s t t h e D N A t o p o i s o m e r a s e IV
.
C o n e l u s i o n
A m o n g a l l t h e i s o la t e d e o m p o u n d s , 班 , VI 一 1 a n d Z , 姗一 1 a n d Z , a n d Xl a r e s e p a r a t e d f o r t h e f ir s t t im e b o t h
f r o m t h e p l a n t a n d t h e g e n u s
.
T h e i r b i o a e t i v i t i e s o f b a e t e r io s t a t ie a n d a g a i n s t a ld o s e r e d u e t a s e w i t h D N A
t o n o i s o m e r a s e IV a s t a r g e t a r e t e s t e d fo r t h e f i r s t t im e a n d a r e r e l a t e d t o t h e m e d i e in a l a D o l i e a t io n o f B
.
K e y w o r d s : B u d d l ej a e q fj 玄c i n a l i s M a x im . ; a ld o s e r e d u e t a s e i n h ib i t o r ; D N A t o p o i s o m e r a s e IV
密蒙花为常用中药 , 是少数治疗眼部疾病中药
中用的较多的一种 。 《中华人 民共和国药典》2 0 0 年
版规定密蒙花为马钱科醉鱼草属植物 B u d dl ej a o- 界
fi ci n al i : M a xi m
. 的干燥花蕾及其花序川 。醉鱼草属
植物在全世界约有 1 0 多种 , 本属 的药用植物比较
多 。 国内外学者对本属其他药用植物的化学成分和
生物学活性方面作了较多的研究 , 但对于密蒙花在
这两方面的研究则相对较少 。 为了阐明密蒙花中的
有效成分及作用机制 , 找到活性单体 , 为药材的质量
控制及其新药的研究与开发提供科学依据 , 本实验
采用现代光谱和波谱技术对其 中的化学成分进行 了
系统研究 , 并结合其功效对提取部位和分离到的化
学成分进行了体外生物学活性 的筛选 , 以期发现活
性天然产物以及明确活性机制 。
1 仪器和材料
X 4 型显微熔点测定仪 (温度计未校正 ) ; A EI 一
M S 一 5 0 质谱仪 ; J E O L A l i e e 3 0 0M 、 V a r ia n I N O V A
5 0 0 型核磁共振波谱仪 。 分析用 A gl l e n t 1 10 型高
效液相色谱仪 (包括在线脱气 、 四元泵 、 柱温箱 、 自动
进样器 、二级管阵列检测器 、A g i l e n t C h e m s t a t i o n ) ;
制 备用 JA S C O P 1 0 型 高效 液相 色谱仪 , JA S C O
U V I 。。型紫外检测器 。 D 1 01 大孔树脂 (天 津制胶
厂 ) ; 柱色 谱用 硅胶 ( 2 0 0 ~ 3 0 目 , 青 岛海 洋化 工
厂 ) ; S e p h a d e x L H 一 2 0 ( 2 5 一 1 0 0 拼m , P h a r m a e ia 公
司 ) ;反相硅胶 O D S ( F u j i S i ly s i a C o . L t d · , 日本 ) ;
硅 胶 预制 薄 层 板 (青 岛 海洋 ) ; 反 相 硅 胶 薄 层 板
( M e r e k C o
.
) ; 聚 酞 胺 薄 膜 ( 浙 江 黄 岩 ) ; S e n s h u
H P L C 制备色谱柱 (O D S , 5 拌m , 2 0 m m X 2 5 0 m m ) ;
I n e r t s i l O D S
一 3 C l 。色 谱柱 ( 5 拜m , 2 5 0 m m X 4 . 6
m m , G I 一S e ie n e e
·
C o
·
L t d
.
) ; 显 色剂为 5 %硫 酸 乙
醇溶液 , 5 %三氯化铝乙醇溶液 。 其余溶剂均为分析
纯产品 。
密蒙花 B 司之厅王‘动al i : M a xi m . 药材购 自安徽毫
州 , 经郭洪祝副教授鉴定 , 标本存放于本室 。
2 提取和分离
密蒙花药材 30 k g , 95 % 乙醇渗流提取 , 提取液
浓缩 , 用水分散后分别以石油醚 、醋酸乙醋 、正丁醇萃
取 , 得到 4 个部位 。 取醋酸乙醋部分 1 0 9 , 经硅胶柱
色谱 , 氯仿一 甲醇梯度洗脱 ;反相柱色谱 , 甲醇 一水梯度
洗脱 ;得到各流份 , 其 中 2一 6 流份经过制备液相 , 甲
醇一水 ( 40 , 6 0) 洗脱得到淡黄色粉末 V (4 g ) , 7 一 9
流份经过制备液相和凝胶柱 S印h ad e x L H 一 20 得到
两个淡黄色粉末 VI ( 21 m g )和 班 ( 65 m g ) , 10 流份析
出白色粉末 W ( 18 m g ) ; F 6 部位经过反相柱色谱和
制备液相 , 得到两对淡黄色粉末物质 vI 一1 、 2 和珊一 1 、
2 , 液相检查为两对难以分离的峰 , 薄层检识在紫外灯
下为亮蓝色荧光 , 提示可能为两对异构体混合物 。
取正丁醇部位 1 20 9 , 加水分散 , 经大孔吸附树
脂色谱 , 水 一乙醇梯度洗脱 。 其中 80 % 乙醇洗脱部位
40 9
, 经过硅胶柱色谱 , 醋酸乙醋 一甲醇梯度洗脱得到
各流份 。 其中 , F Z 经过硅胶柱色谱 (石油醚 一丙酮梯度
洗脱 ) , n 流份析 出淡黄色粉末 , 丙酮重结晶后得到
I ( 15 m g ) ;F7 中位经过硅胶柱色谱 (氯仿一甲醇梯度
洗脱 ) , 在 9 一 1 0 流份析 出白色粉末 l ( 5 0 0 m g ) ; 1 1 一1 2
流份 l ib e r m a n 反应强烈 , 经过凝胶柱 S e p h a d e x L H -
2 0 和制备液相 , 分别得到白色晶体 IX ( 10 m g ) 、白色
粉末 xI ( 1 2 m g )和 白色粉末 x ( 2 0 m g ) 。
3 结构鉴定
化合物 I : 淡黄色粉末 , 易溶于氯仿 , 微溶于 甲
醇 。 硫酸显紫红色 。 H CI 一M g 反应阳性 , 其紫外图谱
· 1 0 8 8 · 中草药 C h in e s e T r a d it i o n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 3 5 卷第 1 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月
显示 25 4 , 3 4 0 n m 处有最大吸收 。 碳谱数据见表 1 。
推测其 结构 为 : 5 , 7 , 4忆 t r ih y d r o x y f l a v o n e , 即芹 菜
素 , 经过与文献对照川 , 基本一致 。
化 合物 l : 淡黄色无 定型粉 末 , 易溶 于 甲醇 。
U V 入黔H n m : 2 0 0 、 2 6 5 、 3 3 5 。 碳谱数据见表 1 。 推测
该化合物结构为 a e a e t i n 一 7 一O 一 a 一L 一 r h a m n o p y r a n o s y l
( 1 一 6关日一D 一 g l u e o p y r a n o s id e , 即密蒙花昔 , 经过与文
献川对照 , 数据基本一致 。
化合物 l : 淡黄色无定型粉末 , 易溶于甲醇 , 不
溶 于 氯 仿 、 丙 酮 。 T O F 一M s ( n e g a t i v e io n ) : m / z
5 7 7
.
2 仁M 一H 〕。 U V 入黔H n m : 2 0 0 、 2 5 4 、 34 0 。 碳谱
数据见表 1 。 推断该化合物结构为 : a p ig en i n 一 7 一。一 a -
L 一r h a m n o p y r a n o s y l ( l 一 6 ) 一件D 一 g l u e o p y r a n o s i d e , 即
芹菜素一 7 一O 一芸香糖昔 。 与文献闭对照基本一致 。
化合物 W : 白色粉末 , 不溶于 甲醇 、 水 、氯仿 、丙
酮 , 易溶于 DM SO 一d 6 。 U V 入黔H n m : 2 1 5 、 2 54 、 3 5 5 。
碳谱数据见表 1 。 确定该化合物结构为木犀草素 7 -
O 一葡萄糖昔 , 经过与文献川对照 ,基本一致 。
表 1 黄酮类化合物碳谱数据 (D M s o 一 d ‘ )
T a b le l ’3 C 一N M R d a t a o f f l a v o n o i d s (D M SO
一d ‘ )
位置
2
3
4
16 4
.
3
10 3 . 0
18 1 . 9
16 1 . 5
9 9
.
0
16 3 . 7
9 4 . 1 6
15 7 . 5
1 0 3
.
8
12 1 3
12 8 6
11 6 . 1
1 6 1
. 3
11 6 . 1
1 2 8
. 6
1 6 4 . 4
1 0 3 . 1
1 6 4
1 0 3
. 1
1 8 2 1
1 6 2
. 5
9 9
. 7
1 6 3
. 0
9 4 . 8
1 5 7 0
1 0 5 . 5
1 2 2
. 7
1 2 8
.
5
1 1 4 . 8
1 6 1
. 2
1 1 4 . 8
1 2 8 . 5
9 9 . 9
7 3 . 1
7 6
. 3
6 9 . 7
7 5
. 7
6 6 . 2
1 00 . 6
70 4
70 . 8
72
. 1
68
. 4
17 . 9
5 5 . 6
1 64 . 6
1 0 3 . 1
1 8 1
. 9
1 6 1
.
2
9 9 . 6
1 6 3
. 0
94 . 8
1 5 7 . 0
1 0 5 . 3
1 2 1
.
2
1 1 3
. 5
1 4 5
.
9
1 50 . 3
1 1 6 . 0
1 1 9
. 2
9 9 。 9
73
,
2
7 6 . 4
6 9 . 6
77 . 2
60
.
7
入黔H n m : 2 1 0 、 3 3 0 。 碳谱数据见表 2 。 经与文献比较 ,
确定该化合物为 p一 ( 3 ‘ , 4 ‘一d ih y d r o x y 一 p h e n y l ) 一 e t h y l -
O
一 a 一L 一r h a m n o p y r a n o s y l ( 1 一 3 ) 件D 一 ( 4 1- 0 一e a ff o y l ) -
g l u e o p y r a n o s id e
, 即洋丁香昔 (毛蕊花昔 ) 。 与文献 仁”〕
对照 , 数据基本一致 。
化合物 vI : 淡黄色无定型粉末 , 易溶于甲醇和水 ,
不溶于氯仿 、丙酮 。 U V 25 4 、U V 3 5下有蓝色荧光 。 硫酸显
紫红色 。 T o F 一M s : m /z 6 2 4〔M + 〕。 U V 入黔“ n m :
2 05
、 3 3 5 。 碳谱数据见表 2 。 推断该化合物结构为 件
( 3‘ , 4 , 一d ih y d r o x y 一 p h e n y l ) 一 e t h y l 一O 一 a 一L 一 r h a m n o p y -
r a n o s y l ( l 一 3 ) 日一D 一 ( 6 1 一O 一 e a f fo y l ) 一 g l u e o p y r a n o s id e ,
即异洋T 香昔 ( i s o a e t e o s id e ) 。 经过与文献仁5 1对照 , 数
据基本一致 。
化合物 VI 一 1 、 2 :淡黄色粉末 , 易溶于甲醇 。U V 25 ; 、
U V 36 5下有蓝色荧光 , 硫酸显紫红色 。 U V 入黯H n m :
2 0 5 、 3 3 0 。 F A B
一
M S : m / 2 5 2 7 「M + K ] + 。 碳谱数据
见 表 2 。 推 断其结构 为 肉从蓉 昔 ( C i s t a n o s id e ) F
(a 衣b ) 。 经过与文献川对照 , 数据基本一致 。
表 2 苯乙 醇普类化合物碳谱数据 (D M SO 一d ‘)
T a b l e 2 1 3 C 一NM R d a t a o f P h e n y le t h a n o id
g l y e o s i d e s (D M S O
一 d ‘ )
V U 呱 姐
C a f f e o y l 1 1 25
. 5 1 2 5 . 5 1 2 5
, 6 4 / 1 2 5
. 5 9 1 2 5 . 4 4
2 1 14
.
7 1 14
. 9 1 1 4 . 7 1 1 3
.
8 6
3 14 5 1 4 5
.
2 1 4 5
. 4 14 5 . 6 4
4 14 8
.
5 14 8
. 4 1 4 8
. 5 3 / 14 8
.
4 8 14 8
.
6 4
5 1 15
.
8 1 15
. 8 1 1 5 . 8 1 1 5
.
8
6 1 2 1
. 4 1 2 1
. 4 1 2 1
.
5 1 2 1
. 4 8
归 14 5 . 6 14 5 · 5 1 4 5 · 6 1 4 5 . 6 4
1 13 . 6 1 13
.
8 11 3
.
8 5 / 1 1 3
. 6 9 1 1 4 . 7 / 13 3
. 5
C O 1 65
. 7 16 6 . 5 16 5 . 8 2 / 1 6 5
. 78 1 6 5 . 7
A g ly e o n e 1 1 29
. 1 1 2 9
.
1 1 3 3
. 2
2 1 16 3 1 16
. 3 1 1 7
.
2
3 14 5 . 0 14 5 . 0 1 4 4 . 9
4 14 3 . 6 14 3 . 5 1 4 4 . 9
5 1 15 . 5 1 15 . 4 1 1 5
.
1
6 1 19 . 6 1 19 . 5 1 2 1
. 5
俘 35 . 0 3 5 . 1 7 1 . 5
a 7 1
. 6 7 2
. 0 7 5
.
2
G l e 1 10 2
.
3 1 0 2
.
6 9 6
. 6 / 9 2
. 3 1 0 2
. 3
2 74
. 5 7 4 . 1 7 4
. 4 7 5 . 2
3 79
. 0 8 0
.
8 7 9
. 1 7 8
. 8
4 6 8
. 7 6 8
.
1 6 8
.
7 7 / 68
.
69 6 8
.
8
5 7 4 . 5 7 3 . 7 7 3 . 3 7 4 5
6 6 0
.
7 6 3 . 4 6 0 . 9 6 0 7
R h a 1 10 1
. 2 1 0 0 . 6 1 0 1 . 2 / 10 1
. 0 7 10 1
.
2
2 7 0 . 4 7 0 . 6 7 0 . 6 3 / 70
. 5 0 7 0 . 6
3 7 0 . 3 7 0 . 3 70
. 0 7 0 . 4
4 7 0 . 5 7 2
. 1 7 1
. 7 70 . 9 7
5 6 9 1 6 8
.
5 6 9 . 74 / 6 9
. 3 7 69 . 0 5
6 1 8
.
2 1 7
.
8 18
. 2 18
.
1 7
月任尸几
:
Q曰10八己
bQ1卫1
4
5
6
O C H s
1 6 2
. 9
9 4 . 8
1 5 6 . 9
1 0 5 4
1 2 1
1 2 8 . 6
1 1 6
. 1
1 6 1 . 2
1 1 6
. 1
1 2 8 . 6
9 9 . 9
7 3 . 1
7 6 . 3
6 9 . 6
7 5 . 6
6 6 . 0
1 0 0
.
5
7 0 . 3
7 0 . 7
7 2 1
6 8
. 3
1 7 8
化合物 V : 淡 黄色无定型粉末 , 易溶于 甲醇 和
水 , 不溶于氯仿 、 丙酮 。 U V 25 、、U V 36 5下有蓝色荧光 ,
硫酸显紫红色 。 E SI 一M S : m /z 64 7「M十 N a ] + 。 U V
中草药 C h in e s e T r a d i t io n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 3 5 卷第 1 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月 · 1 0 8 9 ·
化 合 物 vI 一1 、 2 : 淡 黄 色 粉 末 , 易 溶 于 甲醇 。
U V 25 4 、 U V 36 5 下有 蓝色荧 光 , 硫 酸显 紫红 色 。 U V
入黔H n m : 2 0 5 、 2 2 0 、 3 3 0 。 F A B 一M S : m / 2 6 7 9 [M +
K ] 十
。 碳谱数据见表 2 。 由此推断该化合物结构为经
基 化的洋丁香昔 , 即凌霄乃昔 ( e a m p n e o s id e l ) (又
称 件h y d r o x y 一 a e t e o s id e ) , 为一对差 向异构体 。 经与
文献[6j 对照 ,数据基本一致 。
化合物 Ix : 白色粉末 , 微溶于甲醇 , 易溶于 D M -
5 0
。 U V 入黔 H n m : 2 4 5 、 2 5 4 、 2 6 3 。 F A B 一MS : m / z
1 1 1 1 [M + K 〕+ 。 碳谱数据见表 3 。 经过与文献 [ , ]对
照 , 波谱数据与密蒙花昔 ( m im e n g os ide ) A 基本一
致 , 故推断该化合物为 m im e n g o s id e A 。
化合物 x : 白色晶体 , 微溶 于醇 , 易溶 于 DM -
5 0
。 U V 入黔H n m : 2 4 5 、 2 5 4 、 2 6 5 。 碳谱数据见表 3 。
与文献 [ , j报道的密蒙花昔 B ( m im e n g o s id e B ) ,数据
基本一致 , 因此该化合物推断为 m im e n g o s id e B 。
表 3 皂昔类化合物碳谱数据 (昔元部分 )
T a b l e 3 ‘3 C 一N M R d a ta o f s叩o n i n s ( g l y co n e )
仪 X 刀
位 置
DM SO 一d 6 C S D S N C D 3O D 一d 6
l
2
3
4
5
6
7
8
9
l 0
l l
l 2
l 3
1 4
1 5
1 6
1 7
1 8
l 9
2 0
2 1
2 2
2 3
2 4
2 5
2 6
2 7
2 8
2 9
3 0
O C H 3
::{:
.…O口口9幻9曰产n月10,J夕一R泞乃J任1弓」
:; :
7 6 . 2
1 4 8
. 4
1 2 1 . 7
4 2
.
8
3 2 . 3
2 1 . 6
3 7 . 1
4 1 . 4
8 4 4
4 4 . 4
4 8
.
1
1 8
.
9
3 3 . 7
4 1 . 4
5 5 7
3 7
. 3
12 7
.
2
1 2 6
‘ 5
13 7
. 6
4 3
. 7
2 5
.
2
2 9
.
1
4 0 . 9
13 5
.
9
3 9 . 1
3 2 . 9
3 5 . 9
化合物 习 : 白色粉末 , 易溶于 甲醇 。 U V 入黔 H
n m : 2 4 5 、 2 5 4 、 2 6 3 。 F A B 一M S : m / z : 1 1 1 1 [M 十K ] + 。
, H
一
N MR 和 ‘℃一N M R 数据表明该化合物为一个连有
4 个糖的三菇皂昔类结构 。 经酸水解结合薄层色谱 ,
与标准糖样 比较 , 该化合物中含有吠糖 、 鼠李糖和葡
萄糖 。碳谱数据见表 3 。 经过共薄层色谱及液相色谱
分析 , 证实该化合物为准噶尔铁线莲昔 A (s on g a r o -
s id e A ) 。 波谱数据与文献闭基本一致 。
4 活性测试
4
.
1 醛糖还原 酶 抑 制括 性 测试闭 : 醛 糖还原 酶
(A R )是聚醇代谢通路中的关键限速酶 。大量动物实
验和临床研究表 明 , 醛糖还原酶抑制剂 (A R I) 可以
有效改善糖尿病患者聚醇代谢通路异常 , 从而达到
预防和延缓糖尿病并发症的 目的 。 本试验 以 D L 一昔
油醛为底物 、还原型辅酶 l (N A D P H I )为辅酶 , 37
℃下连续监测 3 40 n m 处反应体系吸光度的变化 ,
对 中药密蒙花中的化学成分和不 同的萃取部位 、流
份进行体外醛糖还原酶抑制活性初步筛选 。 筛选结
果表明 : 萃取部位和流份中正丁醇部位活性最强 , 其
次是石油醚部位和大孔树脂 60 % 乙 醇洗脱流份 : 单
体化合物 中的异洋丁香昔 、密蒙花昔 、芹菜素一 7 一O -
芸香糖昔具有较强醛糖还原酶抑制活性 , 抑制率均
高于阳性对照懈皮素 。 另外一些单体化合物 (如 m i -
m e n g os id e B 和洋丁香昔 ) 、醋酸乙醋部位和大孔树
脂 40 % 、 80 % 乙醇洗脱流份则具有较弱的醛糖还原
酶抑制活性 , 其余单体化合物抑制率低 于 10 % , 认
为没有活性 。
4
.
2 以拓扑异构酶 w 为靶点的抗菌活性筛选 : 研究
表明 , 中药密蒙花 中的总黄酮和总苯 乙醇昔在细胞
水平上有 明显 的抗菌 (金黄色葡萄球菌和溶血性链
球菌 )活性 [l0 〕。 其 中的活性成分为密蒙花昔和洋丁
香 昔 , 抗 菌最 小 质 量 浓度 为 0 . 86 、 。. 43 m g / m L ,
0. 4 4 、 0. 4 4 m g / m L
。 另据报道 , 从 阿拉善马先篙中
分离得 到的洋丁香昔 ( ve r b as c os ide )具有拓扑异构
酶抑制剂样作用仁‘’〕。 为 了在分子水平上进一步阐明
其药效和抗菌机制 , 发现新的拓扑异构酶抑制剂 , 从
天然产物中寻找新 的抗菌药物本试验以拓扑异构酶
W 为靶点 , 对 中药密蒙花中的化学成分 (包括单体化
合物和提取分离有效部位和流分 )进行抗菌活性筛
选 。 测定结果显示 :石油醚部位 ( P E 一MM H ) 、醋酸乙
醋部位 ( E t O A e 一MM H ) 、大孔树脂 4 0写乙 醇洗脱部
位 (4 。写 H P 一20 )和单体成分芹菜素 、异洋丁香昔 、密
蒙花昔 、洋丁香昔以及 so n g a r os id e A 对拓扑异构酶
W 有较强的抑制作用 。 在与环丙沙星 (阳性对照 )相同
SA
工叮诊汽吕,JO公八只
.…n乙左工夕一甲口月了0CaA。Jb111工,hg目
3 9
. 9
2 6
.
2
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. 7
4 4 . 0
4 8
. 0
1 8 . 3
3 4 . 6
4 3
. 3
5 3 9
3 7
. 4
13 1
.
9
13 1 . 8
8 4 8
4 3
. 9
3 3
. 0
2 2
. 7
4 1 . 9
4 2
.
2
4 6 . 9
3 1 . 2
3 1 . 7
2 6
. 4
6 4 . 3
1 3 . 2
17 2
1 7 . 8
1 8
.
5
7 7
.
1
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. 3
2 3 . 7
,里9自
吕,JUA丹1LO乃ILQ
. -.…h113亡Jg翻勺白h月了今d1CJj4乙‘JZqdg目h1IQ白血h,J曰
. 1 0 9 0 . 中草药 C h i n e s e T r a d i t i o n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 3 5 卷第 1 0 期 2 0 0 4 年 1 0 月
质量浓度下 (1 m g / m L ) , 产生类似的抑制效果 。
5 结果与讨论
从密蒙花中分离得到并鉴定了 n 个化合物 。其
中 , 化合物 l (芹菜素一 7 一O 一芸香糖昔 ) , 化合物 珊 一 1 、
2 ( e is t a n o s i d e F a 乙b ) , 化合物 VIl 一 1 、 2 ( C a m p n e o s id e
l a & b )和化合物 XI ( s o n g a r o s id e A )为首次从该种
以及该属 (醉鱼草属 )中分离得到 。 得到的皂昔类化
合物中 , so n g a r os ide A 具有柴胡皂昔母核 。 在该属
中分离得到过系列具有柴胡皂营母 核的皂普类 物
质〔‘2〕, 该类结构不稳定容易发生变化 。 比较 m im e n -
g o s id e A 和 s o n g a r o s id e A 的结构可以发现 , 后者为
前者 17 位氧环开环后的产物 。 m im e n g os ide A 为密
蒙花中的原型皂昔 , 为该种植物中特征性化合物 。
醛糖还原酶抑制活性筛选实验结果表 明 , 密蒙
花 70 %甲醇提取物显示出醛糖还原酶抑制作用 , 活
性成分为其中含有的黄酮类物质 (密蒙花昔 、木犀草
素 一 7一O 一芸香糖昔 ) , 以 及苯 乙醇昔类物质 (洋丁香
昔 、异洋丁香昔 )和皂昔类成分 ( m im e n g o s id e B ) 。 黄
酮类化合物的醛糖还原酶抑制活性 的报道比较多 ,
但是苯乙醇昔类物质和皂昔类物质的相关报道比较
少 ,这几类成分之间是否存在协 同作用 , 还有待于研
究 。
拓扑异构酶 w 抑制试验结果不仅验证 了原有报
道中密蒙花的抗菌部分 , 而且从抑菌机制上发现这
些化合物具有环丙沙星类似的作用机制 。 这提示黄
酮和苯乙醇昔类化合物值得深人研究 , 并通过构效
关系的阐明 , 有望发现新的类型的抗菌物质 。
致谢 : 北京生物芯片国 家工程 中心 的张培林和
李瑞老 师 , 北京大 学中医药现代研究中心 常海涛 、王
传社老 师在活性测试方面给予的 帮助 。
R e f e r e n C e s :
[ 1〕 C h P (中国药典 ) [S〕. V o l 1 . 2 0 0 0 .
[ 2 ] I n s t i t u t e o f P h a r m a e y o f C h i n e s e A e a d e m y o f S e i e n e e s
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B e i ji n g : S e i e n e e P r e s s , 1 9 8 1
·
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f r o m B u d l叮a 口fj 飞c i n a l i s 仁J〕· J Ch i n p h a r m S c i (中 国药
学 ) , 1 9 9 7 , 6 ( 4 ) : 1 7 8一 18 1 .
[4〕 L 1 Y M , J i a n g S H , G a o w Y . P h e n y l p r o p a n o id g l y e o s id e s
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r i a n i n gP
o e n s i s [J〕. p hy toc h e m ist 即 , 2 00 0 , 54
( 8 ) : 9 2 3 一9 2 5
.
〔5〕 A n d a r y C , Wy ld e R , L a ff i t e C , 。t a l . S t r u e t u r e s o f v e r b a s -
e o s id e a n d o r o b a n e h o s id e , e a f f e i e a e id s u g a r e s t e r s f r o m
o r o 加n c h e ra P u。一 g e n i s t a e 〔J〕· p hy t 、h ‘m i s t即 , 1 9 8 2 , 2 1
( 5 ) : 1 12 3
.
仁6皿 zm a k u r a y , K o b a y a s h 诬S , M i n a A . 肠 t t e r p h e n y l p r o p a n o id e
g ly e o s id e s fr o m Ca 帅5 15 c h i n e n s i s [J〕. P hy to c h e m i s t卿 ,
1 9 8 5 , 24 ( l ) : 13 9 一 14 6
.
[ 7〕 N i n g D , Y a h a r a S , T o s h ih i r o N T . S t r u e t u r e o f m im e n g o -
s id e s A a n d B , n e w t r i t e r p e n o ide g ly e o s id e s f r o m B u d己l￡, a ‘
F l o 、 p r o d u e e d i n C h i n a [ J〕. C he m P h a r m B u l l , 19 9 2 , 4 0
( 3 ) : 7 8 0一 7 8 2
.
〔8 ] S h im i z u K , A m a g a y a S , O g ih a r a Y . N e w d e r i v a t i v e s o f
s a ik o s a p o n i n s [J」. C h e m P h a rm B u l l , 1 9 8 5 , 3 3 ( 2 ) : 3 3 4 9 -
3 3 5 5
.
〔9 ] N i s h im u r a C , Y a m a o k a T , M i z u t a n i M , 。t a l . P u r if i e a t i o n
a n d e h a r a e t e r i z a t i o n o f t h e r e e o m b i n a n t h u m a n a ld o s e r e d u e -
t a s e e x p r e s s e d i n b a e u lo v i r u s s y s t e m 仁J〕· B i o c入e m B ioP hy s
A ‘t a , 19 9 1 , 10 7 8 : 1 7 1一 17 8
.
仁1 0〕 1 1 X L . A n t i一b a e t e r i a l a e t i v i t i e s o f c o n s t i t u e n t s f r o m F o l s
B u 己J I沼j “。 江J」一V O r t h w e s t P h a r m J (西北药学杂志 ) , 1 9 9 6 ,
11 ( 4 ) : 1 64 一 16 6
.
[ 1 1」 G a o J J , L i R Z , H a n G Q , e t a l . S t u d i e s o n t h e T o p o i s o -
m e r a s e in b ib i t o r s o f p h e n y lp r o p a n o id g ly e o s id e s f r o m P e d i c u -
l a r i s a l a s e h a 、 i e a M a x im
.
[J〕. J 丑e lj i n g M 砚己 U n i v ( 北京医
科大学学报 ) , 一9 9 6 , 8 ( l ) : 1 5 0一 1 5 1 .
仁1 2〕 Y a m a m o t o A , M iy a s e T , U e n o A , e t a l . B u d d l明 s a p o n i n s
I 一 W , F o u r n e w o l e a n a n e 一 t r i t e r p e n e s a p o n i n s f r o m t h e a r i a l
p a r t s o f 召 u d d l明 川p o n i o a H e m s l [J〕. e 人e从 尸人a r 从 B u zz ,
19 9 1 , 3 9 ( 2 ) : 2 7 6 4一 2 7 66
.
C h e m i e a l c o n s t i t u e n t s o f C l a d o n i a s t e l l a r i s
WA N G X i a o
一
l i n g ‘
, 2 ‘ , Y A N G B o
一
l u n ‘
( 1
.
E n v i r o n m e n t a l a n d C h e m ie a l E n g in e e r i n g I n s t i t u t e , X i , a n J ia o t o n g U n iv e r s i t y , X i ’a n 7 1 0 0 4 9 , C h i n a ; 2
.
D e p a r t m e n t
o f C h e m i s t r y a n d C h e m i e a l E n g in e e r in g , B a o j i C o l le g e o f A r t s a n d S e i e n e e s
,
A b s t r a c t ;
C
.
s t e l l a r i s
o b j e c t T o s t u d y t h e e h e m i e a l e o n s t i t u e n t s i n l i e h e n p l a n t o f
B a o j i 7 2 1 0 0 7 , C h i n a )
C l a d o n i a s t e l l a r i s
.
M e t h o d S
、勺 a s e x t r a e t e d w i t h p e t r o l e u m e t h e r
, s e p a r a t e d a n d p u r i f ie d b y
p r e p a r a t iv e T L C o n s i l i e a g e l
.
A l l t h e e o m p o u n d s w e r e id e n t i fi e d o n t h e b a s is
e o l u m n e h r o m a t o g r a p h y a n d
o f s p e e t r a l a n a ly s i s
.
R e s u l t s
S ix e o m p o u n d s w e r e o b t a i n e d
.
T h e i r s t r u e t u r e s w e r e e h a r a e t e r i z e d a s u s n i e a e id ( I ) , e v i n ie a e id ( I ) ,
p e r l a t o li e a e id ( 皿 ) , o l iv e t o r i e a e id ( IV ) , 2 一h y d r o x y l 一 4 一m e t h o x y l 一 6一 p e n t y l b e n z o i e a e id ( V ) a n d Z , 4 一d ih y -
收稿日期 : 2 0 0 4一 0 3一 22基金项 目 : 陕西省教 育厅基金资助项 目‘。I JK o 8 0)
, 通讯作者 E 一 m a i l : x i a o l i n g w a n g @ e y o u . c o m