全 文 ：·药剂与工艺·
RP-HPLC法测定密蒙花中毛蕊花苷的含量
韩　澎 1 ,崔亚君 2 ,郭洪祝 1* ,果德安 1
( 1. 北京大学药学院 北京大学中医药现代研究中心 ,北京　 100083; 2. 首都医科大学中医药学院 ,北京　 100013)
摘　要: 目的　测定密蒙花中毛蕊花苷的含量 ,为药材及其制剂的质量控制提供依据。 方法　采用 RP-HPLC法测
定药材中毛蕊花苷含量。色谱条件: Iner tsil ODS-3 C18色谱柱 ( 5μm, 250 mm× 4. 6 mm) ;流动相: 甲醇 -乙腈 -1%醋
酸水溶液 ( 8∶ 16∶ 76) ;检测波长: 254 nm。 通过正交实验确定最优提取方案为: 20倍量的 70%乙醇回流提取 1. 0
h。结果　该分析方法可以使样品达到基线分离 ,毛蕊花苷的保留时间约 14 min。该方法具有良好的精密度、重现性
和稳定性 ,平均回收率为 100. 71% , RSD= 1. 41% ;线性关系良好 ,相关系数为 0. 999 9。用同样方法测定了 10个不
同产地密蒙花药材中毛蕊花苷的含量 ,在 0. 79% ～ 2. 30%。 结论　该分析方法快速 ,简单 ,无需对样品进行太多柱
前处理 ,即可达到基线分离 ,测量结果准确 ,适用于密蒙花药材中毛蕊花苷的含量测定 ,为密蒙花药材及制剂的质
控提供依据。
关键词: 密蒙花 ;毛蕊花苷 ;含量测定 ;高效液相色谱 ;正交试验
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 12 1082 03
Quantitative determination of verbascoside in Buddleja off icinalis by RP-HPLC
HAN Peng1 , CU I Ya-jun2 , GUO Hong-zhu1 , Guo De-an1
( 1. Schoo l o f Pha rmacy , Peking Univ e rsity , Beijing 100083, China; 2. School of TCM ,
Capital Univ e rsity of Medical Science , Beijing 100013, China)
Abstract: Object　 To establish an HPLC method fo r the quanti ta tiv e determina tion of v erbasco side in
Buddleja of f icinalis Maxim. for it s quality cont rol. Methods　 To determine the content of v erbasco side in
B. of f icinal is by RP-HPLC. Chroma tog raphic condition: C18 column ( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm) , a mobi le
pha se of methano l-acetonit rile-wa ter containing 1% acetic acid ( 8∶ 16∶ 76) and waveleng th o f 254 nm.
The condi tion for the ex traction of v erbascoside was optimized by the o rthogonal test as: continuous ex-
traction by 20 times of ho t 70% ethanol solution for 1 h. Results　 This ch romatog raphic condi tion w as ap-
plicable fo r the quanti tativ e determination of v erbasco side in B . of f icinalis. Verbasco side was separated
successfully f rom o ther consti tuents, and the retention time w as 14. 25 min. The average recovery rate of
v erbascoside w as 100. 71% with RSD 1. 41% (n= 6) . The co rrela tion coef ficient of standard curve w as
0. 999 9 (n= 7) . The verbascoside content in B . of f icinalis f rom ten dif ferent locations w as determined to
be in the range of 0. 79%— 2. 30% . Conclusion　 This analy tical method is proved to be sensi tiv e, quick,
simple, and accurate fo r the quantity determination of verbascoside w ith good repea tabili ty , repro-
ducibility, and stabi li ty. The recovery rate and the linear correlation are perfect. This RP-HPLC method is
reliable and recommendable fo r the quali ty cont rol o f bo th material and preparation of B . of f icinalis .
Key words: Buddleja of f icinal is Maxim. ; v erbasco side; quanti tativ e determination; HPLC; orthogo-
nal test
　　密蒙花为常用中药 ,性微寒、味甘 ,归肝经。具有
清热养肝、明目退翳的攻效 ,用于目赤肿痛、多泪羞
明、眼生翳膜、肝虚目暗、视物昏花 [1 ]。密蒙花中含有
黄酮类、苯乙醇苷类、皂苷类及环烯醚萜类等 [2～ 4 ]。
其中 ,黄酮、苯乙醇苷类化合物的含量比较高。《中华
人民共和国药典》 2000版一部规定密蒙花为马钱科
植物密蒙花 Buddleja of f icinalis Maxim.的干燥花
蕾及其花序 ,并收载了其性状和显微鉴别。在特征成
分的含量测定方面 ,只收载了其中一个成分蒙花苷
的 HPLC的测定方法 [1 ] ,而另一个主要成分毛蕊花
·1082· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-04-16基金项目:国家重点科技攻关项目 (99-929-01-29)
* 通讯作者: Tel: ( 010) 82802024　 E-mail: g uoh z@ bjm u. edu. cn
苷的测定方法还未见报道。 本实验以毛蕊花苷为指
标 ,建立了密蒙花的 RP-HPLC含量测定方法 ,并测
定了 10份不同地区的密蒙花商品药材中毛蕊花苷的
含量 ,为密蒙花药材及其制剂的质量控制提供依据。
1　仪器与药品
Agi lent 1100型高效液相色谱仪 (包括在线脱
气、四元泵、柱温箱、自动进样器、二极管阵列检测
器、 Hp— Chem sta tion) , MA110型 1 /10000电子分
析天平 (上海第二天平仪器厂 ) , 1 /10000电子分析
天平 (德国 Sarto rious BP211D) ,超声波清洗器 ,旋
转蒸发仪。
　　三蒸水经 0. 45μm水系微孔滤膜滤过 ,蒸馏水
购于北京大学医学部分析中心 ,乙腈为色谱纯 ,其他
试剂均为分析纯。
毛蕊花苷对照品 (自制 ,经 UV, IR, ESI-M S,
1 H-NMR和 13 C-NMR鉴定并确认结构 ,纯度 >
98% )。 密蒙花药材经郭洪祝博士鉴定 ,干燥、粉碎 ,
过 100目筛。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Inertsil ODS-3 C18柱 ( 5
μm, 250 mm× 4. 6 mm ) ( GlScience. Co. Ltd) ;流动
相: 甲醇 -乙腈 -1%醋酸水溶液 ( 8∶ 16∶ 76) ;流速:
1 mL /min;检测波长: 254 nm;柱温: 25℃ ;进样量:
20μL。
2. 2　提取方法考察:采用正交试验法优化提取方
法。 考察了提取溶剂 ( A)、提取时间 ( B)、提取方法
( C)及溶剂用量 ( D) 4个因素对提取结果的影响。因
素水平表见表 1。 L9 ( 34 )正交表设计及结果见表 2。
表 1　正交试验因素水平表
Table 1　 Dif ferent factors and levels of orthogonal test
水平 因　素
A B /h C D/倍
1 甲醇 0. 5 超声 15
2 95%乙醇 1. 0 回流 20
3 70%乙醇 1. 5 冷浸 25
　　从极差 ( R值 )可以直观地看出 ,毛蕊花苷提取
率的影响因素: A> B> C> D;各因素的最优水平组
合为 A3 C2 B2D2。对上述结果进行方差分析 (表 3) ,从
方差分析结果可以看出 ,影响因素 A具有显著性 ,
影响因素顺序为: A> C> B> D;各因素的最优水平
组合为: A3 C2 B2D2。与直观分析结果一致。最终确定
提取方案为: 20倍量的 70%乙醇回流提取 1. 0 h。
2. 3　线性关系考察: 精密称毛蕊花苷对照品 16. 5
mg,置 10 mL量瓶中 ,用 70%乙醇溶解 ,稀释至刻
度 ,混匀 ,得 1. 65 mg /mL的对照品溶液。将对照品
溶液分别进样 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8μL。以峰面积为纵坐
标 ,进样量为横坐标 ,作图得到标准曲线。在 1～ 10
μg时峰面积和进样量之间的线性关系良好。回归方
程为 Y= 1 062. 2X - 192. 4, r= 0. 999 9。
表 2　 L9 ( 34 )正交设计及结果
Table 2　 L9 ( 34 ) orthogonal design and results
序号 A B C D 毛蕊花苷峰面积
1 1 1 1 1 1 560
2 1 2 2 2 2 209
3 1 3 3 3 　 980. 9
4 2 1 2 3 1 036
5 2 2 3 1 　 251. 2
6 2 3 1 2 　 554. 2
7 3 1 3 2 1 968
8 3 2 1 3 2 140
9 3 3 2 1 2 228
K 1 4 749 4 563 4 253 4 038
K 2 1 841 4 599 5 472 4 731
K 3 6 336 3 763 3 200 4 156
R 4 495 　 836 2 272 　 692
表 3　方差分析结果
Table 3　 Variance analysis
变差来源 离差平方和 自由度 F值 P值 显著性
A 1 154 817 2 37. 8 0. 03 P < 0. 05
B 　 49 637 2 1. 6 0. 38
C 　 287 287 2 9. 4 0. 10
D(作为误差项 ) 　 30 548 2
2. 4　供试品溶液制备: 精密称取密蒙花 0. 5 g,用
10 mL 70%乙醇回流提取 1. 0 h,滤过 ,用少量 70%
乙醇反复洗涤 3～ 4次 ,将滤液合并 ,转移至 25 mL
量瓶中 ,以 70%乙醇稀释至刻度 ,摇匀。再经微孔滤
膜滤过 ,即得。
2. 5　方法学考察
2. 5. 1　精密度试验:取同一份密蒙花药材的供试液
连续重复进样 5次 ,测定毛蕊花苷峰面积值 ,其
RSD为 0. 67% (n= 5)。
2. 5. 2　重现性试验:精密称取 5份同一批密蒙花药
材粉末 ,每份 0. 5 g ,分别置于 50 mL茄形瓶中 ,并
加入 10 m L 70%乙醇 ,于水浴中回流 1 h。滤过 ,定
容至 25 m L,混匀。微孔滤膜 ( 0. 45μm)滤过后 ,采
用 HPLC分别检测 ,测定毛蕊花苷含量 ,其 RSD为
0. 65% (n= 5)。
2. 5. 3　稳定性试验: 取一份密蒙花药材的供试液 ,
在相同的色谱条件下分别在 0, 1, 2, 4, 8, 14, 24 h采
用 HPLC检测 ,测定毛蕊花苷峰面积 ,其 RSD为
0. 25% (n= 7)。
2. 5. 4　加样回收试验:精密称取 15 mg毛蕊花苷
对照品 ,以 70%乙醇定容于 25 mL量瓶中 ,配成
·1083·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
0. 57 mg /mL的对照品溶液。精密称取 7份同一批
的密蒙花药材粉末 ,每份 0. 5 g。 1号作为空白对照
组 , 2～ 7号作为加样回收组。 分别将 7份样品置于
50 m L茄形瓶中 ,加入 10 mL 70%乙醇。其中 2～ 7
号样品 ,每份均精密加入对照品溶液 4 mL。 7份样
品于水浴中回流 1 h。滤过 ,定容至 25 mL。微孔滤
膜 ( 0. 45μm)滤过后 ,采用 HPLC分别检测 ,结果平
均加样回收率为 100. 71% , RSD为 1. 41% (n= 6)。
2. 6　样品测定: 将 10个不同产地密蒙花药材粉末
配成供试品溶液 ,进样 ,测定峰面积 ,代入回归方程
得到毛蕊花苷的含量。 结果见表 4。
表 4　不同地区密蒙花药材中毛蕊花苷含量
Table 4　 Verbascoside inB. of f icinalis f rom diff erent areas
序号 购买地 购买时间 毛蕊花苷含量 /%
1 青海西宁 2002-01 1. 32
2 河北宣化 2002-01 1. 97
3 河北安国 2002-01 1. 21
4 山西太原 2001-08 0. 96
5 辽宁锦州 2001-08 1. 47
6 云南曲靖 2001-08 2. 30
7 吉林长春 2001-08 0. 79
8 湖北黄冈 2001-08 0. 79
9 福建福州 2001-08 1. 22
10 广东深圳 2002-01 0. 62
3　讨论
3. 1　对于毛蕊花苷的含量测定 ,提取溶剂的选择最
为关键 ,从峰面积上可以看出 ,随着水比例的增大 ,
峰面积越大 ,表明毛蕊花苷的提取愈充分 ;然而 ,高
极性成分的比例亦相应增加 ,从而增大处理难度。为
此 ,选用 70%乙醇作为提取溶剂 ,既可以较充分地
提取出毛蕊花苷 ,又避免了以后的柱前预处理工作 ,
简化操作步骤。
3. 2　在色谱条件的探索中 ,单纯用甲醇 -水或乙腈-
水系统均不能够得到最佳分离 ,而二者的合用可以
达到较理想的分离度 ;加入醋酸可以有效地防止拖
尾 ;毛蕊花苷在 254 nm处有较强的吸收 ,在该波长
下检测还可以避免其他杂质峰的干扰 ,故选用 254
nm为检测波长。
3. 3　《中华人民共和国药典》中尚无针对密蒙花中
毛蕊花苷的含量测定方法。本实验建立的分析方法
操作简单、快速 ,样品无需进行柱前处理即可达到基
线分离 ,结果准确、可靠 ,可作为密蒙花药材及其制
剂质量控制依据之一。 从结果可以看出 ,不同产地密
蒙花药材中毛蕊花苷含量差别较大 ,建议在今后药材
及其制剂的质量标准上应该注意该项指标的考察。
References:
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Buddleja of f icinal is [ J] . J B ei jin g Med Univ (北京医科大学
学报 ) , 1996, 28( 6): 472-473.
配伍对葛根芩连汤中甘草酸含量的影响
戴开金 ,罗佳波 ,吴昭晖 ,谭晓梅 ,任建生
(第一军医大学 中药制剂研究重点实验室 ,广东 广州　 510515)
摘　要: 目的　研究配伍对葛根芩连汤中甘草酸含量的影响。 方法　采用 L8 ( 27 )正交设计及统计软件 S PSS 10. 0
统计处理 ,以 HPLC法测定配伍中甘草酸含量。结果　黄连对甘草酸的含量影响差异具有显著性 (P < 0. 05) ,黄芩、
葛根对甘草酸含量影响差异无显著性 ,三者两两交互作用不显著 ,黄连和甘草配伍煎液中产生沉淀 ,且其含有一定
量的甘草酸。 结论　黄连降低葛根芩连汤中甘草酸的含量 ,黄芩、葛根对其含量没有影响。
关键词: 葛根芩连汤 ;配伍 ;甘草酸 ;高效液相色谱
中图分类号: R283. 2; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 12 1084 04
Influence of compatibility on glycyrrhizinic acid in Gegen Qinlian Decoction
DAI Kai-jin, LUO Jia-bo , WU Zhao-hui , T AN Xiao-mei , REN Jian-sheng
( Key Labo rato ry of Pha rmaceutics of Chinese Ma teria Medica , First M ilitar y Medical Univ ersity ,
Guang zhou 510515, China )
·1084· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-10基金项目:国家自然科学基金面上重点资助项目 ( 39970886) ;广东省自然科学基金资助项目 ( 001070)