全 文 ：membrane when the ext racellular K+ concentraction
is increased[ 14] . In the present study, DFCT shifted
the NA and KCl concentrat ion-response curves to the
right. These results might ref lect the inhibit ion of
calcium influx into the cellular cytoplasm which are
supported by those prev iously reports that DFCT
could markedly block calcium inf lux through ROCs
and PDCs in cellular membrane of vascular smooth
muscle according to 45 Ca across-membrane measure-
ment [ 15] . In this w ay, the vasodilator effect of DFCT
has been associated with an inhibitory modulat ion of
calcium entry into vascular smooth muscle.
In conclusion, our results indicate that , in rabbit
thoracic aorta, the w ater decoction of DFCT exhibits
a vasodilatory ef fect on contract ion induced by NA,
w hich is related to endothelium and involved in NO.
Also, this vascular relaxation probably is mediated by
inhibit ion of calcium influx via ROCs and PDCs.
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人参茎叶皂苷对失血性休克大鼠糖皮质激素受体的影响
凌昌全1,李
敏2,苏永华1,李
勇1,黄雪强1, 沈志雷2,谭金兴3

( 1
第二军医大学长海医院 中医科, 上海
200433; 2
第二军医大学 军队卫生学教研室, 上海
200433; 3
第二军医大学
病理生理学教研室,上海
200433)
摘
要:目的
观察人参茎叶皂苷 ( ginsenosides, GSS) 对失血性休克大鼠糖皮质激素受体 ( GR) 的影响, 并分析其
作用机制,为研制及时抢救失血性休克患者的天然药物制剂提供实验依据。方法
雄性 SD 大鼠随机分为失血性
休克组和对照组,失血性休克组分别每日 ig 200, 100, 50 mg / kg GSS 水溶液, 对照组和模型组 ig 蒸馏水 2 mL, 共
10 d。以 [ 3H] 地塞米松为配体,用一点分析法测脑和肝胞液 GR 结合活性 ( Rs)、半定量 RT-PCR 方法测肝胞液
GR mRNA 水平、放免法测血浆促肾上腺皮质激素 ( ACTH) 和皮质酮 ( GC) 浓度。结果
GSS 组大鼠脑和肝胞液
的 GR 结合活性高于单纯失血性休克组, 其中以中剂量组最明显 ( P < 0
01) ; GSS 组大鼠肝胞液 GR mRNA 表达
水平高于单纯失血性休克组; GSS 组大鼠血浆 ACTH 和 GC 浓度和单纯失血性休克组没有明显差别。结论
GSS

433
中草药
Chinese T raditional and Herbal Drugs
第 34 卷第 5 期 2003年 5月

收稿日期: 2002-08- 24基金项目:国家杰出青年基金资助项目 ( 30025045) ; 国家自然科学基金面上项目 ( 30271675)
作者简介:凌昌全( 1957
) ,男,安徽怀宁人,医学博士,博士研究生导师,主任医师,教授,专业研究方向为中西医结合。
可减轻失血性休克大鼠 GR 结合活性的下降幅度, 作用机制可能与其促进了 GR mRNA 表达有关, 并可能存在一
个最佳剂量。
关键词:人参茎叶皂苷; 糖皮质激素受体; 失血性休克
中图分类号: R286
25


文献标识码: A


文章编号: 0253 2670( 2003) 05 0433 04
Effects of ginsenosides on glucocorticoid receptor in hemorrhagic shock rats
LING Chang-quan1, L I Min2, SU Yong-hua1, L I Yong1,
HUANG Xue-qiang1, SHEN Zh-i lei2, TAN Jin-xing3
( 1. Department of T CM , Changhai Hospital; 2. Department of M ilitar y Hygiene; 3. Depar tment of Pat hophysiology ,
Second M ilitar y Medical Univ ersity, Shanghai 200433, China)
Abstract: Object
To evaluate the effects of ginsenosides ( GSS) in stem and leaves of ginseng on g lucocor-
t icoid receptor ( GR) in the hemorrhagic shock rats, and study the mechanism. Methods
Rats w ere divided in-
to hemorrhag ic shock group and control group. The rats in hemorrhagic shock groups w ere ig 200, 100, 50 mg/
kg/ d GSS, model group and control g roup w ere ig dist illed w ater 2 mL for 10 days. T he Rs of GR in brain and
hepat ic cy tosol of rats were measured by radioligand binding assay , using [ 3H] dexamethasone as the ligand.
T he level of GR mRNA expression in hepat ic cytosol were determined by RT-PCR. Plasma adrenocort icotrophic
hormone ( ACTH) and glucocorticoid ( GC) concentrat ions w ere determined by the radioimmunoassay. Results

Rs of GR in brain and hepatic cytosol were higher in hemorrhag ic shock+ GSS groups than those in hemor-
rhagic shock group, and the Rs of GR was the highest in hemorrhagic shock+ 10 mg/ mL GSS group ( P<
0
01) ; Expression of GR mRNA in hepat ic cytosol w as higher in hemorrhagic shock+ GSS groups than those in
hemorrhagic shock group; The plasma concentrations of ACTH and GC were not altered by GSS. Conclusion

GSS can allev iate the decrease of the Rs of GR in brain and hepat ic cytosol through the w ay to accelerate the ex-
pression of GR mRNA. Perhaps the 10 mg/ mL is the best dosage of g insenosides.
Key words: ginsenosides; g lucocorticoid receptor; hemorrhagic shock


应激可导致糖皮质激素受体 ( GR) 结合活性下
降[ 1]。以往研究证实中医方剂
参附汤
可减轻失
血性休克时 GR 结合活性的下降幅度[ 2]。人参是

参附汤
的君药, 其主要有效成分是人参皂苷。人
参茎叶原为废弃物,现发现其所含的皂苷与人参根
皂苷化学成分和药理活性基本一致[ 3] , 若人参茎叶
皂苷在提高糖皮质激素受体、促进失血性休克的救
治方面具有人参根皂苷相似甚至相同的作用, 那么
对研制及时抢救失血性休克患者、提高部队作战能
力的天然药物制剂的意义是显而易见的。因此本实
验对人参茎叶是否也有调节 GR 结合活性的作用,
其作用机制是什么,有无量效关系等问题进行了初
步研究。
1
材料与方法
1
1
药物: 人参茎叶皂苷 ( ginsenosides, GSS) 黑
龙江东宁制药厂提供,纯度为 91
67%, 用蒸馏水配
制成 20, 10, 5 mg / mL 3 个浓度的水溶液待用。
1
2
动物分组: 雄性 SD 大 鼠 30 只, 体 重
( 175
5) g,第二军医大学实验动物中心提供, 许可
证号 SCXK (沪) 2002-0006。大鼠适应环境 7 d 后
随机分为失血性休克组和对照组, 每组 6 只。失血
性休克组包括 3个 GSS 组和 1个模型组, GSS 组分
别每日 ig 高、中、低 ( 200, 100, 50 mg/ kg) 3个剂量
的 GSS 水溶液,模型组和对照组 ig 蒸馏水 2 mL/
次,共 10 d。
1
3
失血性休克模型制备[ 4] :将 GSS 组和模型组
大鼠于末次 ig 30 min 后,氯胺酮 ( 0
7 mL/ 500 g,
ip) 麻醉,左侧颈动脉插管,放血。放血量为总血量
的 20% (依据每个动物的体重计算其总血量) , 1
min 内放完,缝合伤口。12 h 后处死。为避免昼夜
节律对激素分泌及其受体的影响, 各组动物完成实
验程序后,均于统一时间快速断头处死,取所需组织
供实验用。
1
4
指标的测定: 血浆促肾上腺皮质激素
( ACTH) 和皮质酮 ( GC) 浓度的测定采用放免法。
脑胞液和肝胞液 GR 结合活性测定, 以 [ 3H] 地塞
米松为配体, 用一点分析法; 肝胞液 GR mRNA 水
平测定, 采用 RT-PCR 方法,上游引物为: 5
AGGC-
CGGTCAGT GTTT TCTA 3
; 下游引物: 5
AGGG-
GT GAGCTGTGGTAAT G 3
, 产物大小为 433 bp。

434
中草药
Chinese T raditional and Herbal Drugs
第 34 卷第 5 期 2003年 5月
扩增: 每个反应用 2
5
L 10X PCR Buf fer ( w/ 20
mmol/ L MgCl2) , 19
25
L H 2O, 0
5
L 10 mmol/ L
4xdNT Pmin, 0
25
L iNos-UP, 0
25
L iNos
Down, 0
25
L T aq DNA Polymerase ( 1
25 U,上海
博彩生物公司) ,混匀,分装到 0
2 mL PCR 薄壁管
里,每管 23
L。内参
-Act in 采用同样的方式进行
(
-Act in-U P: 5
T GGGACGATATGGA-GAAGAT
3
;
-Act in-Doen: 5
ATT GCCGATAGT-
GATGACCT 3
)。在每管中加入 2
L RT 产物, 混
匀。加入 30
L 石蜡油。PCR 扩增条件: 94
45
s, 预变性 120 s, 72
延伸 60 s,循环 35次, 最后延
伸 300 s。DNA 扩增产物用 1
6% 的 Agarose 电泳
和 EB 染色后用 T asnonGIS-100数码凝胶图象分析
系统作扩增结果检测和半定量分析。
1
5
统计分析:数据用 SPSS10
0软件进行 F 检验。
2
结果
2
1
GSS对失血性休克大鼠脑胞液、肝胞液 GR 结
合活性的影响: 大鼠急性失血后 12 h, 脑胞液 GR
结合活性大幅度下降,与对照组比较,模型组脑胞液
GR 结合活性下降了 80
8% ,而 GSS 高、中、低剂量
组分别下降了 75%, 49
0%, 69
7%; 急性失血后
12 h,大鼠肝胞液 GR 结合活性也明显下降,与对照
组比较, 模型组肝胞液 GR 结合活性下降了
57
8%, 而 GSS 高、中、低剂量组分别下降了
45
0%, 39
4% , 37
5%。结果见表 1。
表 1
GSS 对失血性休克大鼠脑胞液、肝胞液
GR 结合活性的影响 ( x
s, n= 6)
Table 1
Effect of GSS on Rs of GR in brain and hepatic
cytosol in hemorrhagic shock rats ( x
s, n= 6)
组别 剂量
/ ( mg
kg - 1)
脑胞液
/ ( fmol
mg- 1)
抑制率
/ %
肝胞液
/ ( fmol
mg- 1)
抑制率
/%
对照 - 152
73
46
80 - 649
15
100
19 -
模型 - 29
33
16
14
80
8 274
15
32
98
57
8
GSS 200 38
18
28
28
75
0 356
77
44
21
* 45
0
100 77
87
30
08
* *
49
0 393
45
57
77
* * 39
4
50 46
32
14
81
69
7 408
67
69
66
* * 37
1


与对照组比较:
P < 0
01;
与模型组比较: * P < 0
05
* *
P < 0
01;
与 GSS高剂量组比较:
P< 0
05



P < 0
01 v s control group; * P < 0
05
* * P < 0
01 v s model
group;
P < 0
05 v s GSS high dose group
2
2
GSS对失血性休克大鼠肝胞液 GR mRNA 水平
的影响:由图 1可见,大失血 12 h后,大鼠 GR mRNA
的表达受到了明显抑制,模型组 GR mRNA 表达水平
比对照组下降了 52
9%,而 GSS 可缓解这种抑制,高
剂量组 GR mRNA 表达水平只下降了 9
3%,低剂量
组下降了 8
6%,中剂量组还升高了 19
2%。
图 1
GSS对失血性休克大鼠肝胞液
GR mRNA 水平影响电泳结果
Fig. 1
Electrophoresis of GSS on level of GR mRNA
of hepatic cytosol in hemorrhagic shock rats
2
3
GSS 对失血性休克大鼠血浆 ACTH, GC 含量
的影响: 见表 2。急性大失血使大鼠血浆 ACTH 和
GC 的含量大幅度上升 ( P< 0
001) , GSS 各组与模
型组相比没有明显变化。
表 2
GSS对失血性休克大鼠血浆 ACTH,
GC 含量的影响 ( x
s, n= 6)
Table 2
Effect of GSS on levels of ACTH, GC in plasma
of hemorrhagic shock rats ( x
s, n= 6)
组别 剂量/ ( mg
kg- 1) ACTH/ ( pg
mL - 1) GC/ ( ng
mL- 1)
对照 -

52
14
13
81
39
32
24
60
模型 - 187
54
34
12* 357
41
15
32*
GSS 200 176
32
33
00* 375
50
46
30*
100 180
23
42
35* 353
12
54
34*
50 193
68
52
47* 396
20
52
16*


与对照组比较: * P < 0
01


* P < 0
01 v s control group
3
讨论


GC 在维持应激时机体内环境稳定方面起着极其
重要的作用,其生物效应的发挥主要靠细胞内 GR的
介导[ 5]。研究表明,应激过程中 GR结合活性下降导
致细胞水平 GC 功能不全,是休克发生、发展的关键
因素之一[ 6, 7]。因此,寻找调节 GR 的药物,有着十分
重要的军事和临床意义。我们的研究先后发现参附
汤、生脉散等经典方药分别对失血性休克和热损伤模
型大鼠肝、脑胞液异常降低的 GR水平有明显的上调
作用[ 8, 9]。尽管参附汤、生脉散都只有 4 味中药组
成,但其有效成分仍然非常复杂,影响深入研究。根
据中医配伍原理和一般的逻辑推理,认为参附汤、生
脉散都能上调糖皮质激素受体的主要有效药物组伤
可能是人参, 故选择了人参的主要有效成分 GSS 作
为研究对象。研究结果显示, GSS 对失血性休克大鼠
GR确有明显的保护作用。
在应激过程中, GR 结合活性的下降与垂体-肾
上腺皮质激素调节、GR 蛋白的降解速度大于合成
速度、或因脱磷酸化作用使结合型 GR 转变为非结
合型 GR 等因素有关[ 10]。从本实验结果分析, 失血

435
中草药
Chinese T raditional and Herbal Drugs
第 34 卷第 5 期 2003年 5月
性休克组大鼠, ig GSS 与 ig 蒸馏水相比, 血浆
ACTH 和 GC 的含量并没有明显变化, 但肝胞液
GR mRNA 表达水平则大幅度地提高,这提示 GSS
对急性大失血大鼠 GR结合活性的保护作用可能不
是通过垂体-肾上腺皮质激素调节, 而可能是通过加
强 GR蛋白的合成速度。至于磷酸化脱磷酸化是否
也发挥作用,有待于进一步研究。GSS 的 3 个剂量
组中以中剂量组对 GR 的调节作用最为明显, 据此
推测, GSS保护应激机体 GR 可能有一个最佳剂量,
值得进一步探讨。
本研究的结果为 GSS 的进一步开发利用提供
了初步的实验依据,尽管其确切的作用机制尚待进
一步研究,但随着研究的深入,必将为研制及时抢救
失血性休克患者,提高部队作战能力的天然药物制
剂提供科学的实验依据。
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红花黄色素改善大鼠缺氧心肌能量代谢的研究
朴永哲,金
鸣,臧宝霞,陈文梅,吴
伟,李金荣

(北京市心肺血管疾病研究所
首都医科大学附属北京安贞医院, 北京
100029)
摘
要:目的
探讨红花黄色素 ( SY ) 缓解大鼠心肌缺氧性损伤作用及其对能量代谢的影响。方法
建立大鼠离
体心脏的冠状动脉灌流模型,以 2, 4-二硝基苯肼比色法测心室肌组织乳酸脱氢酶 ( LDH) 漏出量, 以荧光素酶法测
心室肌组织 ATP 含量, 透射电镜观察心尖部组织超微结构; 制备大鼠心室肌组织线粒体混悬液, 分别以比浊法与
荧光偏振法观察线粒体肿胀与膜流动性的变化。结果
SY 可减少大鼠低灌流离体心脏 LDH 漏出 ,缓解心室肌组
织 ATP 含量下降及其超微结构的损伤; SY 可缓解大鼠心肌线粒体混悬液中线粒体的肿胀及其膜流动性下降。结
论
SY 可改善大鼠心肌能量代谢,进而缓解心肌缺氧性损伤。
关键词:红花黄色素; 乳酸脱氢酶; 三磷酸腺苷; 超微结构; 线粒体
中图分类号: R286
2


文献标识码: A


文章编号 : 0253 2670( 2003) 05 0436 04
Study of safflower yellow on improving energetic metabolism in hypoxic myocardium of rats
PIAO Yong-zhe, JIN M ing, ZANG Bao-xia, CHEN Wen-mei, WU Wei, LI Jin-rong
( Beijing Institute of Cardiopulmonary Blood Vessel Diseases
Beijing Anzhen Hospital,
Capital Univ ersity of Medical Science, Beijing 100029, China)
Abstract: Object
To invest igate the action of saf flower yellow ( SY) against rat cardiac hypox ic damage
and the ef fect on energy metabolism. Methods
T he level of lact ic dehydrogenase ( LDH) leaked in the coronary
eff luence w as measured w ith 2, 4-dit itropheny lhydrozine colorimetry. Af ter insuf ficient perfusion, ATP level in
ventricular myocardium was determined with luciferin- luciferase bioluminescence technique and ventricular t rans-
m ission eletromicroscopy w as performed. Sw elling and membrane fluidity changes w ere observed in rat myocar-
dial mitochondrion prepared by homogenizat ion and repeated centrifug at ions, by means of turbidimetry and f luo-

436
中草药
Chinese T raditional and Herbal Drugs
第 34 卷第 5 期 2003年 5月

收稿日期: 2002-08- 21基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30171746) ; 北京市中医药科技发展基金资助项目; 北京市医学科学重点学科资助项目