全 文 ：·1868· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期8005年12月
试将PMT和H6H构建到双价载体上，通过发根农
杆菌转化莨菪，增加发根提高酶的表达活力，使东莨
菪碱量最高的转化发根系比野生型(43mg)提高了
9倍，据了解这是目前利用遗传代谢工程在莨菪中
获得的最大东莨菪碱的量““。
本实验利用发根农杆菌Ri质粒首次成功地从
莨菪H．nigerL．中诱导出毛状根。筛选出了各自
的生长快速的优质株系，建立了发根培养体系，为进
一步利用遗传代谢工程手段调节莨菪次生代谢物的
量和进行药用活性成分的工业化生产奠定了基础。
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甘草药材HPLC指纹图谱研究
吴昭晖1，罗佳波1，游文玮2
(1．南方医科大学中药新药研究重点实验室，广东广州510515；2．南方医科大学化学系，广东广州510515)
摘 要：目的建立甘草药材的HPLC指纹图谱。方法采用反相高效液相色谱法，选用ZorbaxSB—Cla柱(250
mm×4．6mm，5pm)色谱柱；流动相为乙腈一1．2％醋酸溶液(梯度洗脱)；分析时间70rain{检测波长为254nm。结
果建立了甘草药材的HPLC指纹图谱，标定了甘草药材38个共有指纹峰，方法学考察结果符合指纹图谱技术要
求。结论方法稳定、可靠、重复性好，可为甘草药材质控标准的制定和含甘草的中药方剂的物质基础研究提供
参考。
美键词：甘草；指纹图谱}HPLC
中图分类号：R282．02 文献标识码：A 文章编号：02532670(2005)121868—05
FingerprintsofRadixGlycyrrhizaebyHPLC
WUZhao—huil。LU0Jim_b01，YOUWen—wet2
(1．KevLaboratoryofTraditionalChineseMedicineandNewDrugofSouthernMedicalUniversity，Guangzhou
510515．China}2．DepartmentofChemistryofSou hernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China)
Abstract．ObjectiveToestablishtheHPLCfingerprintsofRadixGlycyrrhizae．MethodsThRP—
HPLCmethodwasused，ZorbaxSBClecolumn(250mm×4．6mm，5pm)wagemployed；the
收稿日期：2005—02—1
荐妻磊界!霎蠢扉嚣黧差考鲁妻霜耋譬嚣届需贸：：j嚣)年厦门大学化学系毕业，现为南方医科大学分析测试中心高级工程师，研究方向
为现代仪器分析。Tel：(020)61648172Email；youww@fimmu．corn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月· 869·
acetonitrile一1．2％aceticacid(gradientelution)wasusedasmobilephase，analytictimewas70min，and
detectivewa elengthwasat254nm．ResultsTheHPLCfingerprintsofRadixGlycyrrhizaeweresetup．
Theresultshowedthat38peakswerecommonindifferentsources．Theresultsofmethodvalidationmet
technicalstandardoffingerprints．ConclusionThemethodis stableandreliablewithagood
reDroducibilitvandprovidesareferencestandardfothequalitycontrolofRadixGtycyrrhizae．
Keywords：RadixGtycyrrhizae；fingerprints；HPLC
甘草为豆科植物GlycyrrhizauralensisFisch．、
胀果甘草G．inflataBat l．、光果甘草G．glabraL．
的干燥根及根茎，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止
咳、缓急止痛、调和诸药的功效。甘草是重要的常用
中药，素有“国老”之称，为中药方剂的常见配伍成
分。东汉成书的《神农本草经》将其列为上品，此后历
代本草都有记载。1977年起，《中国药典》各版均有
收载。甘草所含成分复杂，含有甘草酸等三萜类、黄
酮类化合物以及香豆素类和生物碱类化合物等“3。
由于受产地、气候和生态环境等的影响，不同甘草药
材所含的成分也存在着一定差异。《中国药典》对甘
草药材的质量控制仅限于甘草酸单一成分的测
定⋯，不能系统、完整地反映甘草的内在质量。目前，
指纹图谱已成为国际公认的控制中药和天然药物质
量最有效的手段。为了有效地控制甘草药材及含甘
草的中药复方制剂的质量，为了对含甘草的中药方
剂的物质基础和配伍规律进行深入研究，笔者通过
考察甘肃产的甘草药材，建立了甘草药材的高效液
相色谱指纹图谱。
l仪器与试药
1．1仪器：美国惠普HP1100高效液相色谱仪：四
元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，二极管阵列
检测器(DAD)。
1．2试药：乙腈(色谱纯)、甲醇(分析纯)、冰醋酸
(分析纯)，水为超纯水。
甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物制品检定
所，测定用，批号0731—9704)，甘草药材(10批)：市
售，产地均为甘肃，经第一军医大学中医系刘传明老
师鉴定为豆科植物甘草G0cyrrhizauratensis
Fisch．的干燥根及根茎。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为ZorbaxSB—C，s柱(250
mm×4．6mm，5pm)；流动相：乙腈一1．2％醋酸溶
液(梯度洗脱：0～70min，乙腈体积由4％上升至
65％)，体积流量0．6mL／min；柱温：室温；检测波
长：254nm；分析时间：70min}进样体积20止。
2．2供试品溶液的制备：取甘草药材粉末(过60
目)约2．0g，精密称定，置于100mL的圆底烧瓶
中，加水50mI。，加热提取40min。待药液冷却后，移
取适量药液离心，精密移取上清液10．0mL置于25
mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，静置2h后离
心，取上清液用0．45p．m微孔滤膜滤过，即得。
2．3参照物溶液的制备：选择甘草酸单铵盐对照品
作为参照物。精密称取甘草酸单铵盐对照品适量，加
40％甲醇溶解，制备质量浓度为1．0mg／mL的对照
品贮备液。精密移取对照品贮备液适量，用40％甲
醇适当稀释，制备为101．0／-g／mL的对照品溶液，
即得参照物溶液。
2．4测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各20“L，注入高效液相色谱仪，记录70min色
谱图。供试品色谱中，以参照物甘草酸对应的色谱峰
(s)的相对保留时间和峰面积为1，计算各共有指纹
峰的相对保留时间及峰面积比值。
2。5方法学考察
2．5．1精密度试验：取同一供试品溶液，连续进样
5次，测得各共有峰相对保留时间和峰面积>10％
的共有峰的峰面积比值，结果RSD均小于3％，符
合指纹图谱技术要求。J。
2．5．2稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、
2、4、8、12、24h检测，测得各共有峰相对保留时间
和峰面积>lo％的共有峰的峰面积比值，结果RSD
均小于3％，说明供试品溶液在24h内稳定。
2．5．3重现性试验：取同一批号的样品5份，分别
按供试品溶液的制备方法制备供试品并测定，测得
各共有峰相对保留时问和峰面积>10％的共有峰的
峰面积比值，结果RSD均小于3％，符合指纹图谱
技术要求。
2．6指纹图谱及技术参数
2．6．1指纹图谱：按2．4项测定10批甘草药材。根
据10批供试品的检测结果，建立甘草药材的高效液
相色谱指纹图谱(图1)。铡定结果见表1、2。
2．6．2共有指纹峰的标定：采用相对保留时间标定
共有指纹峰。根据10批供试品HPLC谱给出的相
关参数，比较供试品谱图，其中38个峰是lo批供试
万方数据
中草药 chineseTr8dltionalandHerbaIDr“gs第36卷第12期2005年12月
0 10 20 30 40 50 60
}／mm
圈l甘草药材高效液相色谱指纹图谱
Fig·lHPLcfinge’printof露口d“G“掣rr^虹4P
品所共有的，因此确定这38个峰为共有指纹峰。
共有峰的峰号(相对保留时问)：1(0．0171)、2
(0．369)、3(O．397)、4(O．403)、5(O．432)、6
(0．479)、7(O．507)、8(0．513)、9(0．527)、10
(0．538)、】1(O．553)、12(0．567)，13(0．629)、】4
(0．650)、15(0．683)、16(0．688)、17(0．713)、18
(0．727)、19(0．753)、20(0．775)、21(O．786)、22
(O．795)、23(0．806)、24(0．824)、25(O．836)、26
(O．879)、27(O．892)、28(O．920)、29(0．945)、30
(O．954)、31(0．966)、32(0．978)、33(0．985)、34
(1．000)、35(1．021)、36(1．036)、37(1．044)、38
(1．079)。
裹l lo批甘草药材共有指纹峰的相对保留时间
T丑blel ReIativeretentioDHmeofcomm仰peaksfortenbatchesof置4刎jG挑y，r埘z埘
共有峰
峰号
药材批改
r————r————r————■————F————r————F————F————r———1了一平均值
】 O．171 0．170 0．171 0．17l O．17l O 17l O 17l 0．171 0．171 0 17l 0．171
2 O．370 O．368 O．369 O．368 O．369 0369 O．369 O．369 0．369 0．369 仉369
3 O397 O．396 O．397 0 397 O．397 O．397 O．397 0．397 O．397 0．397 0．397
4 0 404 0．402 0·403 0．403 O．403 0．403 0 403 O 403 O 403 0．403 O．403
5 O 432 0 431 O432 O．432 0．432 0．432 O．432 O．432 O 43Z O．432 O432
6 O．479 O478 O．479 O．478 O．479 O479 O．479 O．478 O478 O．479 O 479
7 0．507 0，507 0 507 O 507 0．507 O．507 0．507 O 507 0 507 O 507 0 507
8 O 513 O．512 0 513 O．513 O．514 0 514 0 513 O 513 0 513 O 513 0 513
9 O．527 0．526 0．527 0 527 0 527 O527 O．527 0 527 0．527 0 527 仉527
10 O539 O．538 O．538 O 538 O．538 O．538 O．539 0 538 0 539 0 539 O 538
11 0 554 O．553 0．553 0 553 0．553 O．553 O．554 0 553 O 553 O 553 O．553
12 0．568 O 567 0．567 O．567 0．567 O．567 O．567 0．567 O567 0．567 O．567
13 0-629O．629 O 629 O．629 0 629 O．629 O．629 O．629 0．629 仉629 0 629
】4 0．650 O．649 0．649 0．649 0 649 O．659 0．650 O．650 0 650 O．650 0．650
15 0．683 0．682 O 682 O．682 O．683 0．683 0．683 O 683 0 683 O．683 0．683
16 0．688 0．688 O 688 O 688 0．689 O 689 O．689 0．688 O．688 0．688 仉688
17 O 713 O．713 0 713 O．713 0．712 0712 O．714 O 714 0．714 0．713 0．713
18 O．727 O．727 0 727 O．727 0．727 0．727 0．727 0．727 O．727 0 727 O727
lg O 753 O．753 O．753 0．753 O．753 O．753 O 754 0．753 0．?54 0．754 0．753
20 0．775 O 774 0．775 0 775 0，775 0．775 0．775 O．775 0 775 O775 0 775
2l 0．786 0 786 O．786 O．786 0 786 O．736 0．786 O．786 O．786 0．786 0 786
22 0．795 0．795 O．795 0．795 O795 O．795 0．795 0．795 O．795 0．795 O．795
23 0．806 0．806 0．806 O．806 O．806 0 806 0 806 0．806 O 806 0 806 0．806
24 O．824 D．824 0 824 0824 O．824 O．824 o．824 0．824 0 824 0 824 0．824
25 0．836 0．836 0．836 O836 0．838 O 836 0．836 O．836 O．836 O．836 O．836
26 O879 0．879 O．879 0．879 O．879 0．879 0．879 0 879 O．879 仉879 0 879
27 O．892 O．89Z O．992 O．892 0．8e2 O．802 O，893 0．893 O．893 0．893 0 892
28 0．920 O 920 O．919 仉919 O 920 0．920 O．920 O．920 0 920 O．920 0．920
29 0 945 O．945 O 945 O．945 0．945 O．945 0．945 O 045 0．945 O．945 0．945
30 0．954 0 954 0．954 O．954 玑954 0．954 0．954 0．954 0．954 0 954 0 954
3l O．966 0．966 0．966 O．966 0．966 O．956 0．966 0．966 O 066 0．966 0．966
32 0．978 0．978 0 978 O．978 0 978 O978 0．978 0．978 O．978 0．978 0．978
33 O．985 0．985 O．985 0．985 O．985 O．985 O．985 0．985 O．985 O．085 O．985
34临) 1．000 1．000 】．000 】．OOO 1，000 】．OOO 】．000 1．000 1 OOO l，000 1，000
35 l·021 1．02l l—021 1．021 1．02l 1．021 1 021 1．021 1．021 1．021 1．021
36 1-0361．036 1．036 1．036 1．036 1．036 1 036 1．036 1．036 1 036 1．036
37 1 044 1．044 1．044 1．044 1．043 1．043 1．044 1．044 1．044 1．043 1．044
38 】．079 1．079 1一079 1 079 1．079 1．079 1．079 1．079 1．079 1．079 1 079
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月· 871·
表2 10批甘草药材共有指纹峰的峰面积比值
Table2 Relativeareasofcoiilliimlpeaksforten
batchesofRadixGlycyrrh赴oP
12号共有非共有峰面 12号共有非共有峰面
批次 峰峰面 积占总峰面 批次 峰峰面 积占总峰面
积比值 积的百分数 积比值 积的百分数
1 0．730 6 73 7 0．687 4．11
2 0 645 7 12 8 0．660 5．74
3 0．617 5．45 9 0．656 7．08
4 0 612 6．88 10 0．486 4．90
5 0．497 4．54 平均值0609 5 83
6 0504 5．78
2．6．3共有指纹峰峰面积的比值：在共有指纹峰
I?彩
，jj；jJ^《
200225250275300325350375
24号峰
。j?∥r
26号蜂
中，只有12、34(s)号峰的峰面积大于总峰面积的
10％，故只考虑12号峰的峰面积比值，其余各共有
峰均按其相对保留时间定性。共有峰的峰号(峰面积
比值)：12(0．609)。
2．6．4共有指纹峰的紫外吸收图谱：在甘草的38
个共有指纹峰中，单峰面积占总峰面积3％以上的
有ll、12、17、23、24、26、29、34号等8个峰，利用
DAD检测器考察了这8个峰的紫外吸收图谱，如图
2所示。
3讨论
／--
＼
17导峰
f＼ 7、、
}f 53}峰
200225250275300325350375 200225250275300325350375
∞号峰
270’0—225027”5300325350375五品菇互甚褊五；j品j菇’210”022525027—53003253”570—3’75—
34(s)导蛙
图2甘草药材部分共有嶂的紫外吸收图谱(DAD检测)
Fig．2UVspectraofsomecommonpeaksofRadixGlycyrrhizae(detectedbyDAD)．
3．1检测波长的选择：采用DAD对指纹图谱的检效果不好，改用乙腈一1．2％醋酸后，基线平直且分离
测波长280、254、210nln进行了选择，结果表明检 度良好。
测波长为254nm，色谱图所包含的信息量大，各色 3．3参照物的选择：甘草药材有效成分中甘草酸的
谱峰分离较好。 量较高且相对稳定，因此选其作为参照物。
3．2流动相的选择：考虑到甘草所含三萜类多为有 3．4甘草药材为多品种来源，各品种所含化学成分
机酸类物质，在流动相中加入了一定比例的冰醋酸， 及量有较大差别，故应针对不同品种建立相应的指
以抑制有机酸的解离，各峰分离较好且峰型对称。比 纹图谱。
较了等度洗脱与梯度洗脱对甘草指纹图谱的影响， 3．5指纹图谱指纹区域的划分：甘草指纹图谱的共
结果发现等度洗脱时，改变流动相的组成或比例只 有指纹峰有38个，峰数较多，为便于研究，可以将指
能得到较少的色谱峰。改用梯度洗脱，样品中不同极 纹图谱划分为A、B、c、D、E、F、G、H共8个指纹区：
性组分都获得了合适的保留，在70min内各组分全A区有1个指纹峰，只有1号峰；B区有5个指纹
部出峰，色谱峰数增加到40个以上。实验证明，梯度 峰，包括2、3、4、5、6号峰iC区有6个指纹峰，包括
洗脱条件容易控制，溶剂对甘草指纹图谱中共有峰 7、8、9、10、11、12号峰；D区有7个指纹峰，包括13、
检出无干扰，样品保留时间重现性好，分离度和柱效 14、15、16、17、18、19号峰；E区有6个指纹峰，包括
都令人满意。曾试用甲醇一1．2％醋酸梯度洗脱，分离 20、2l、22、23、24、25号峰；F区有3个指纹峰，包括
万方数据
·1872· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第12期2005年12月
26、27、z8号峰；G区有6个指纹峰，包括29、30、31、
32、33、34号峰；H区有4个指纹峰，包括35、36、37、
38号峰。若要比较不同品种来源的甘草指纹图谱的
差异，可以在8个指纹区分别考察。
3．6本方法稳定、可靠、重现性好，可为甘草药材及
其它含甘草的中药复方制剂制定质量标准提供参
考，也为含甘草的中药方剂的物质基础研究与配伍
规律研究提供分析方法。
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唐莉，吴锡明，马 曲，马 勇
(雅安三九中药材科技产业化有限公司，四川雅安625000)
摘要：目的通过对鱼腥草白绢病的发生发展规律和防治方法的研究，为该病的练合防治提供一定的依据。方法
采用田间调查、田间试验和室内实验相结合的方式。结果种茎处理以多菌灵的效果最好，发病率最低，产量最高}
PDA平板测定表明木霉对鱼腥草白绢病拮抗作用极强，优于常用农药处理；在3个木霉菌剂质量浓度中，20g／m
2
的防治效果最好，其防治效果达到了60．28％。结论采用多菌灵处理鱼腥草种茎和20g／m2木霉制剂处理土壤能
较好地防治鱼腥草白绢病。
关键词：鱼腥草}白绢病；防治方法
中图分类号：R282．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)12—1872—04
Occurrenceandspreadingy amicsandcontrolmethods
ofSouthernblightinHouttuyniacord ta
TANGLi，WUXiming，MAQU，MAYong
(Ya’anSanjiuChineseMedicinalMaterialsScienceandTechnologyIndustrializationCo．，Ltd．，Ya’an625000，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheoccurrenceandspreadingy amicsofSouthernblightHouttuynia
cordataandsearchforthecontr01methodSOastoprovidescientificbasisforitsintegratedpets
management(IPM)．MethodsThefieldinvestigationandthecombinedmethodsinbothfieldtrialnd
laboratorvtestwerecarriedOutfortheresearch．ResultsAftert eatedbyCarbendaxim，themorbidityof
Southernblightin日．cordatuw sthelowestandtheyieldofH．cordatareachedtothehighestlevel
amonga11treatmentgroups．ThePDAt strevealedthatTHchodermahuzirumhadstrongerantagonismto
Southernblightin日．cordatathancommonfu gicides．ThebestconcentrationofT．huzirumusedinthe
soiltreatmentwas20g／m2．whichhada preventiveeffectagainstSouthernblightupto60．28％·
ConclusionTheSouthernblightofH．cordatacouldbewellsuppressedwhilebothCarbendaximandT·
huzirumareusedtOtreattheseedsandsoll．respectively．
Keywords：HouttuyniacordataHerb；Southernblight；controlmethods
鱼腥草药、蔬兼用，原植物为三白草科蕺菜属蕺
菜Houttuyniacord taThunb．。具清热解毒、消肿
排脓、利尿通淋等功能，还可增强机体免疫力o’2]。随
着鱼腥草需求量不断地增大，其人工栽培的规模不
断扩大，造成了一些病害的发生。目前危害鱼腥草的
病害主要是白绢病，对其产量和质量造成了严重的
影响。
木霉防治白绢病已有大量的报道口“]，其效果
显著，但有关鱼腥草栽培管理的报道中尚未见有关
白绢病发生发展规律及木霉防治鱼腥草白绢病的报
道，本研究试图对该病的发生发展规律和防治方法
作初步探讨，为鱼腥草白绢病的综合防治提供一定
的依据。
1材料与方法
收稿日期：8005—03—15
作者简介1霎中蒡嚣墅笋；窘籍罡群藿菱粢薪；；5磊磬中Te药l：材(科08技35产)8业87化80有56限公Fa司x慧镕嚣学嚣；器责研耋慧芦罂藿震蓦嘉嚣‰恚要负
万方数据
甘草药材HPLC指纹图谱研究
作者： 吴昭晖， 罗佳波， 游文玮， WU Zhao-hui， LUO Jia-bo， YOU Wen-wei
作者单位： 吴昭晖,罗佳波,WU Zhao-hui,LUO Jia-bo(南方医科大学,中药新药研究重点实验室,广东,广
州,510515)， 游文玮,YOU Wen-wei(南方医科大学,化学系,广东,广州,510515)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(12)
被引用次数： 7次
参考文献(2条)
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1999(04)
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