全 文 ：地黄中地黄苷 A的含量测定
刘长河 ,张留记 ,李更生
(河南省中医药研究院 ,河南 郑州　 450004)
　　地黄为玄参科植物地黄 Rehmannia glutinosa
Libosch.的干燥块茎 ,具清热凉血、养阴、生津之功
效。地黄苷 A为环烯醚萜双糖苷 ,实际研究中发现
其较梓醇 (环烯醚萜单糖苷 )稳定 ,且地黄苷 A的量
亦不低于梓醇。本实验采用薄层扫描法测定了地黄
中地黄苷 A含量 ,为控制地黄质量提供了另一可行
测定方式。
1　仪器与试药
　　 CAM AGⅡ薄层扫描仪 (瑞士 ) ,定量毛细管 (美
国 ) , RE-52A旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 ) ,
地黄苷 A对照品 (自制 ,归一化法检测其纯度>
98% ) ,所用试剂为分析纯。 干燥地黄样品 1999年、
2000年、 2001年采集于河南武陟 ,经我院都恒青研
究员鉴定为玄参科植物地黄 R. glutinosa Libosch.
的干燥块茎。
2　实验方法
2. 1　供试品溶液的制备: 取同一批地黄 (另取 1份
干燥失重法测水分 ) ,切碎 ,精密称取 10 g ,加硅藻土
适量研细 ,置索氏提取器中 ,加甲醇 50 mL,加热回
流提取 3 h,滤过 ,回收甲醇 ,残渣用水溶解并定容
于 50 mL量瓶中 ,摇匀 ,精密吸取 10 mL,用水饱和
的正丁醇提取 8次 ,每次 10 mL,合并正丁醇提取
液 ,减压回收正丁醇 ,残渣加甲醇溶解 ,并定容于 10
m L量瓶中 ,作为供试品溶液。
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取地黄苷 A对照
品适量 ,加甲醇制成 0. 5 mg /mL的溶液 ,作为对照
品溶液。
2. 3　薄层及色谱条件: 取硅胶 G,加入适量 0. 1%
CMC-Na,制成厚 0. 5 mm的薄层板 ,自然干燥 ,备
用。展开剂: 氯仿 -甲醇 -水 ( 7∶ 4∶ 0. 5) ;显色剂:
10%硫酸 -乙醇溶液 , 90℃烘 10 min,显色 ;扫描波
长: 407 nm;扫描方式:单波长线性扫描。
2. 4　线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 1, 2, 3,
4, 5μL点于同一硅胶 G薄层板上 ,按上述薄层色谱
条件展开 ,取出 ,晾干 ,显色 ,扫描测定。 以点样量为
横坐标 X ,峰面积为纵坐标 Y ,计算得线性方程
为 Y= 164. 36X+ 44. 4, r = 0. 997, 线 性 范 围:
0. 5～ 2. 5μg。
2. 5　稳定性考察:精密吸取地黄苷 A对照品溶液 3
μL,点于硅胶 G薄层板上 ,依法展开 ,取出 ,晾干 ,显
色 ,每隔 20 min扫描测定 1次。结果峰面积 RSD为
1. 14% (n= 7)。 结果表明:地黄苷 A在 120 min内
稳定。
2. 6　精密度考察
2. 6. 1　同板精密度考察: 精密吸取供试品溶液 4
μL,对照品溶液 2, 4μL分别点于同一硅胶 G薄层
板上 ,按上述薄层色谱条件展开 ,显色 ,扫描 ,计算。
结果地黄苷 A质量的 RSD= 1. 59% (n= 5)。
2. 6. 2　异板精密度试验: 精密吸取供试品溶液 4
μL,对照品溶液 2, 4μL分别点于 5块硅胶 G薄层
板上 ,按上述薄层色谱条件 ,展开 ,显色 ,扫描 ,计算 ,
结果地黄苷 A量的 RSD= 1. 62% (n= 5)。以上结果
表明 ,地黄苷 A同板、异板精密度良好。
2. 7　重现性试验:精密称取同一批干燥药材 5份 ,
每份 10 g ,按上述供试品溶液处理方法处理 ,得供试
品溶液。分别吸取上述溶液 4μL,对照品溶液 2, 4
μL,点于同一硅胶 G薄层板上 ,按上述薄层色谱条
件展开 ,显色 ,扫描 ,计算。 结果地黄苷 A质量的
RSD= 2. 14% (n= 5)。
2. 8　加样回收率试验:精密称取同一批干燥药材样
品 5份 ,每份 5 g ,加入地黄苷 A对照品适量 ,按上
述供试品溶液提取方法提取 ,定容于 10 mL量瓶
中。精密吸取上述溶液各 4μL,对照品溶液 2, 4μL,
点于同一硅胶 G薄层板上 ,按上述薄层色谱条件展
开 ,显色 ,扫描 ,计算。结果平均回收率为 99. 23% ,
RSD= 2. 53% (n= 5)。
2. 9　地黄中地黄苷 A含量测定:精密称取上述不
同采集期地黄样品 (另取 1份干燥失重法测水分 ) ,
·706· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 8期
收稿日期: 2001-11-15基金项目:国家“九五”攻关项目 ( 96-903-02-04)作者简介:刘长河 ,男 ,助理研究员 ,执行药师 , 1994年毕业于沈阳药科大学 ,现在工作于河南省中医药研究院中药研究室 ,从事天然药物的提取与分离及中药新药的开发与研究。
依法制备供试品溶液 ;精密吸取供试品溶液 4μL,
对照品溶液 2, 4μL,分别点于同一硅胶 G薄层板
上。以氯仿 -甲醇 -水 ( 7∶ 4∶ 0. 5)为展开剂 ,展开 ,取
出 ,晾干 ,喷以 10%硫酸-乙醇溶液 , 90℃烘 10 min
显色 ,扫描 ,测定 ,计算。结果见表 1。
表 1　不同采集时间地黄药材中地黄苷 A的含量
采集时间 地黄苷 A含量 (mg /g )
1999年 8月 1. 425
2000年 8月 1. 575
2001年 4月 1. 563
　　以上结果可见 ,地黄中地黄苷 A含量以干燥品
计 ,应不低于 1. 0 mg /g。
3　讨论
3. 1　 地黄苷 A对照 品经 UV、 IR、 1HNM R、
13
CNM R光谱鉴定为环烯醚萜 -2-葡萄糖苷 , HPLC
归一化法测其含量> 98% 。
3. 2　显色剂曾选择碘蒸汽 ,但碘显色需较长时间
( 30 min)且斑点荧光易消褪。选用 10%硫酸 -乙醇溶
液 90℃烘 10 min显色 ,斑点荧光于 407 nm处有最
大吸收且扫描无干扰。
3. 3　对于干燥地黄样品中地黄苷 A含量应不低于
1. 0 mg /g ,对鲜地黄及熟地黄中地黄苷 A含量变化
有待进一步研究。
清肝颗粒制备工艺研究
刘　力 ,罗月琴 ,徐德生
(上海中医药大学附属曙光医院 ,上海　 200021)
　　根据我院院长王灵台教授的经验方 ,由猫人参、
黄芩、柴胡、白术等中药制成的清肝颗粒 ,既保持了
传统汤剂作用迅速的特点 ,又克服了汤剂临用时煎
煮不便的缺点 ,体积小 ,服用、贮藏、携带方便 ,具有
改善肝功能 ,抑制丙肝病毒复制的作用 ,是临床治疗
急慢性丙肝的纯中药制剂。
1　仪器与试药
AEL-160电子分析天平 (日本岛津 ) ; CS-930
型双波长薄层扫描仪 (日本岛津 ) ; CQ-250超声清
洗器 (上海必能信超声波仪器公司 )。黄芩等饮片 (上
海徐重道饮片厂 ) ;黄芩苷 (中国药品生物制品检定
所 ) ;其他试剂均为分析纯; GF254高效板 ( E. Merck)。
2　提取方法的选择
以方中黄芩的有效成分黄芩苷的含量为指标 ,
加上白术中的挥发油 ,柴胡中的柴胡皂苷薄层色谱
鉴别 ,以及清肝浸膏的干膏得率来分析清肝颗粒的
提取工艺。经试验 ,结果表明全方以乙醇热提法 ,干
膏得率较高 ,黄芩苷含量最高 ,并且能在薄层色谱中
显示柴胡皂苷、白术挥发油的斑点。 结果见表 1。
3　正交表的设计 [1 ]
　　采用正交试验 ,以乙醇浓度、乙醇用量、热提次数
以及热提时间为因素 ,分别设定 3个水平 ,见表 2。
表 1　不同提取工艺比较
提取方法 面积积分值 干膏得率 (% ) 柴胡 TLC 白术 TLC
水提法　　 33 799. 16 20. 67 - -
水提醇沉法 29 157. 84 13. 56 - -
乙醇冷浸法 30 668. 64 17. 82 + +
乙醇热提法 44 458. 28 19. 99 + +
表 2　因素水平表
水平 因素
A醇浓度 (% ) B时间 (min) C次数 (次 ) D加醇量 (倍 )
1 50 30 1 6
2 60 45 2 8
3 70 60 3 10
4　样品的制备
　　准确称取处方中各药味 ,加乙醇浸泡 0. 5 h后 ,
按上述正交设计的条件 ,回流提取 ,滤过 ,滤液减压
回收乙醇至无醇味 ,再浓缩至 100 mL,作为样品液 ,
制得 9份样品。
5　考察指标的测定
5. 1　干膏得率的测定: 精密吸取各样品液 10 mL,
置已恒重的蒸发皿中 ,于水浴上蒸干后 ,在 105℃干
燥 3 h至恒重 ,移置干燥器中冷却 30 min,称取质
量 ,计算干膏得率 (表 3)。
5. 2　黄芩苷的含量测定
5. 2. 1　供试液制备: 精密吸取各样品液 25 mL,真
·707·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 8期
收稿日期: 2001-11-26基金项目:国家“九五”科技攻关课题 ( 96-906-08-04)作者简介:刘　力 ,女 ,主任药师 ,硕士导师 ,执业药师 , 1984年毕业于上海中医药大学 ,现在曙光医院中药研究室工作 ,从事中药新药的开发与研究。 Tel: 021-53825761