全 文 ：抑白升血糖浆对化疗小鼠造血功能和免疫功能的影响
唐　渊 1 ,李晓辉 1 ,张海港 1 ,熊德上 2 ,蔡　锷 2 ,周见至 1 ,林　海 1 ,王晓芹 1 ,曾　健 1
( 1. 第三军医大学 基础部 ,重庆　 400038; 2. 重庆将军血液病研究所 ,重庆　 400041)
摘　要: 目的　观察抑白升血糖浆 ( YBSX )对环磷酰胺 ( CTX ) 处理的小鼠造血功能和免疫功能的影响并确定其
最佳给药方式。 方法　将 YBSX按照单纯预防、单纯治疗和预防+ 治疗 3种给药方式 ig给药 ,常规方法计数小鼠
白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数 ,测定脾脂数 ;鸡红细胞吞噬实验测定巨噬细胞 ( MΥ) 吞噬率和吞噬指数 ;
ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子 ( TN F-α) 含量。 结果　 YBSX对白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数、脾指
数、巨噬细胞吞噬指数和 TN F-α含量都有不同程度的改善。 结论　 YBSX可改善受 CTX抑制小鼠的造血功能和
免疫功能 ,且预防加治疗给药效果最佳。
关键词: 抑白升血糖浆 ;癌症 ;化疗 ;造血功能 ;免疫功能 ;环磷酰胺
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 06 0654 04
Effects of YBSX Syrup on hematopoietic and immunologic functions
in mice treated by chemotherapy
T ANG Yuan1 , LI Xiao-hui1 , ZHANG Hai-gang1 , XION G De-shang2 , CAI E2 , ZHOU Jian-zhi1 ,
L IN Hai
1 , WANG Xiao-qin
1 , ZENG Jian
1
( 1. Basic M edical Faculty o f Third Milita ry Medical Univ ersity, Chongqing 400038, China;
2. Chongqing Jiang jun Hematopa thy Institute, Chongqing 400041, China )
Abstract: Object　 To explo re the ef fects of Yibaishengxue ( YBSX) Sy rup on hematopoietic and im-
munologic functions of mice pretreated by cyclophosphamide ( CTX) and the most proper regime of the ad-
ministration of YBSX Syrup. Methods　 YBSX Sy rup w as ig administered to the prevention group, the
t reatment g roup, and the group which combined the prevention and treatment tog ether. The number of
blood leucocyte, platelet and bone marrow cell w ere counted by conventional methods; spleen index w as
measured by w eighing method. Phagocy tic rate and index w ere evalua ted by phagocytic ef fect of peri toneal
macrophage ( MΥ) on chick erythrocy te, and the content of serum tumor necrosis factor alpha ( TN F-α)
w as assayed by ELISA. Results　 YBSX Syrup enhanced the count of leucocy tes, platelets, and bone ma r-
row cells, improved the lev el o f spleen index and macrophage phagocy tic index, and increased the content
o f TN F-α in serum dose-dependent. Conclusion　 YBSX Sy rup is able to ameliorate the diso rders of
hematopoietic and immunolo gic functions induced by CTX, and show the combina tion of prevention and
treatment regime is the best one.
Key words: Yibaishengxue ( YBSX) Sy rup; cancer, chemo therapy; hema togenetic function; immune
function; CTX
　　抑白升血糖浆 ( YBSX)由补骨脂、蚤休、羊蹄
等 6位中药组成 ,临床上用于治疗急性粒细胞白血
病和淋巴细胞白血病 ,疗效显著。多数患者使用
YBSX治疗后 ,白血病症状都有不同程度的缓解。
YBSX尤其能改善化疗药物所致的血象异常 ,增强
患者的免疫功能 ,但其具体机制尚不清楚。 为此 ,本
实验观察 YBSX对环磷酰胺 ( C TX)化疗小鼠的造
血和免疫功能的影响 ,分别采用单纯预防、单纯治疗
和预防+ 治疗 3种方式给予 YBSX,探讨其最佳给
药方式 ,为临床合理用药提供实验依据。
1　材料与方法
1. 1　动物: 300只昆明种小鼠 ,体重 18～ 22 g ,雌雄
各半 ,由第三军医大学实验动物中心提供 ,动物合格
证号:渝动字第 310203002号。
1. 2　药品: YBSX由重庆市将军血液病研究所提
供 ,经水煎提取、浓缩至含生药 0. 75 g /mL药液 ,各
·654· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 6期 2004年 6月
收稿日期: 2003-10-15基金项目:重庆市卫生局重点科研课题 ( 01004)作者简介:唐　渊 ( 1974— ) ,男 ,重庆人 ,助教 ,药理学硕士 ,研究方向为抗炎免疫药理学。
Tel: ( 023) 68753397　 E-mail: t ang yuan ty 99@ sina. com. cn
* 通讯作者
主要成分含量为: 补骨脂素≥ 0. 45 g /L、甾体皂苷≥
2. 0 g /L、大黄酚≥ 0. 045 g /L。 复方阿胶浆由山东东
阿阿胶股份有限公司生产 ,批号 i010822-2。CTX由上
海华联制药有限公司生产 ,批号 010304。 TN F-α的
ELISA试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。
1. 3　分组及给药: YBSX大、小剂量组分别含生药
2. 0, 0. 667 g /mL。按单纯预防、单纯治疗和预防+
治疗 3种给药方案。每种给药方案依据完全随机设
计分为 5组: 正常对照组、 CTX模型组、阿胶 ( 8
m L /kg )对照组、 YBSX ( 13, 40 g /kg )组 ,每组 20
只。 CTX对照组 ig等体积的生理盐水 ,同时每天 ip
CTX 100 mg /kg ,连续 3 d,间隔 2 d后处死动物检
测相关指标。单纯预防组先 ig YBSX 7 d,再每天 ip
CTX 100 mg /kg ,连续 3 d,间隔 2 d后处死动物检
测相关指标。单纯治疗组每天 ip CTX 100 mg /kg ,
给药 3 d,再 ig YBSX 7 d,末次 ig 3 h后处死动物
检测相关指标。预防+ 治疗组先 ig YBSX 3 d,接下
来 3 d每天 ip CTX 100 mg /kg ,再每天 ig YBSX
7 d,末次给药 3 h后处死动物检测相关指标。在 3
种给药方案中 ,阿胶对照组的给药次数和天数与同
组中 YBSX的给药方式相同。 正常对照组仅 ig等
体积生理盐水。给药体积均为每只 0. 4 mL。
1. 4　指标检测
1. 4. 1　白细胞和血小板计数:参照常规方法剪尾取
血进行白细胞和血小板计数。
1. 4. 2　巨噬细胞吞噬率和吞噬指数测定: 小鼠末次
给药 30 min后 ,每鼠 ip 0. 5 mL 5% 鸡红细胞生理
盐水悬液。 3 h后 ,脱颈椎处死小鼠 , ip生理盐水 2
mL,轻揉小鼠腹部后 ,剖腹吸取腹腔液 0. 5 mL涂
片 ,自然干燥后 , Geimsa-w right染色 ,油镜观察 200
个巨噬细胞 ,计算巨噬细胞吞噬率和吞噬指数 [1 ]。
1. 4. 3　骨髓有核细胞计数: 小鼠处死后取一侧股
骨 ,剪去两端 ,用 3% 醋酸 10 mL冲洗出骨髓细胞 ,
进行骨髓有核细胞计数 [2 ]。
1. 4. 4　脾指数:小鼠处死后 ,称体重 ,取脾脏称其质
量 ,以脾脏质量 /体重表示脾指数 ( mg /10 g ) [3 ]。
1. 4. 5　 TNF-α含量测定: 按照试剂盒说明书用
ELISA法测定小鼠血清 TN F-α含量。
1. 5　统计方法: 数据用 x± s表示 ,用 SPSS8. 0统
计软件进行单因素方差分析。
2　结果
2. 1　单纯预防给药对造血功能的影响: 结果见表
1。与 CTX模型组相比 , YBSX单纯预防大剂量组
能显著升高白细胞数、血小板数和脾指数 ( P <
0. 05) ,对骨髓有核细胞数有所升高 ,但无统计学意
义 ;小剂量组对白细胞数、血小板数和脾指数也有一
定的升高作用 ,但无统计学意义。阿胶单纯预防组的
作用与 YBSX单纯预防大剂量组的作用相当。
2. 2　单纯治疗给药对造血功能的影响: 见表 2。 与
CTX模型组相比 , YBSX单纯治疗大剂量组能十分
显著地升高白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数和
脾指数 ,小剂量组能显著地升高白细胞数 ( P <
0. 05) ,也能升高血小板数和脾指数 ,但无统计学意
义。阿胶单纯治疗组的作用与 YBSX单纯治疗大剂
表 1　 YBSX单纯预防给药对造血功能的影响 (x± s , n= 20)
Table 1　 Effects of YBSX Syrup by only preventive administrat ion on hematopoiet ic function (x± s , n= 20)
　组　别 　剂　量 白细胞数 / (个· μL- 1) 血小板数 /( 104个· μL- 1 ) 骨髓有核细胞数 /( 104个·股骨 - 1) 脾指数 / ( mg· 10 g- 1)
正常对照 　　　 - 8 040± 1 169 　　　 36. 4± 18. 0 1 765± 457 　　　 5. 45± 2. 04
C TX模型 　 100 mg· kg- 1 1 850± 1 766* * 17. 1± 1. 60* * 554± 247* * 2. 06± 0. 88* *
阿胶对照 8 mL· kg- 1 4 630± 1 819▲ 34. 4± 14. 8▲ 611± 210 3. 26± 0. 17▲
YBSX 40　 g· kg- 1 4 825± 3 031▲ 27. 1± 1. 6▲ 677± 280 4. 45± 1. 30▲
13　 g· kg- 1 3 375± 1 198 20. 0± 10. 2 494± 200 2. 50± 0. 90
　　　与正常对照组比较: * * P < 0. 01;　与 CTX模型组比较: ▲ P < 0. 05
　　　* * P < 0. 01 vs normal cont rol group;　▲ P < 0. 05 vs CTX model g roup
表 2　 YBSX单纯治疗给药对造血功能的影响 (x± s , n= 20)
Table 2　 Effects of YBSX Syrup by only treatment administration on hematopoietic function (x± s, n= 20)
　组　别 　剂　量 白细胞数 / (个· μL- 1) 血小板数 /( 104个· μL- 1 ) 骨髓有核细胞数 /( 104个·股骨 - 1) 脾指数 / ( mg· 10 g- 1)
正常对照 　　　 - 8 720± 2 327 　　　 36. 7± 8. 9 1 701± 426 　　　 5. 15± 1. 86
C TX模型 　 100 mg· kg- 1 2 075± 1 759* * 14. 3± 2. 3* * 566± 85* * 2. 17± 1. 04* *
阿胶对照 8 mL· kg- 1 6 600± 1 202▲▲ 42. 0± 26. 9▲▲ 1 207± 321▲▲ 6. 50± 3. 51▲▲
YBSX 40　 g· kg- 1 7 019± 1 718▲▲ 43. 7± 18. 5▲▲ 1 098± 220▲▲ 6. 44± 3. 44▲▲
13　 g· kg- 1 4 733± 1 208▲ 24. 2± 12. 0 713± 78 2. 43± 0. 37
　　　与正常对照组比较: * * P < 0. 01;　与 CTX模型组比较: ▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01
　　　* * P < 0. 01 vs normal cont rol group;　▲ P < 0. 05　▲▲ P < 0. 01 vs CTX model group
·655·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 6期 2004年 6月
量组的作用相当。
2. 3　预防+ 治疗给药对造血功能的影响: 见表 3。
与 CTX模型组相比 , YBSX预防+ 治疗大剂量组
能十分显著地升高白细胞数、血小板数、骨髓有核细
胞数和脾指数 ( P < 0. 01) ,小剂量组也能显著地升
高白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数和脾指数
(P < 0. 05)。阿胶预防+ 治疗组的作用与 YBSX预
防+ 治疗大剂量组的作用相当。
2. 4　预防+ 治疗给药对免疫功能的影响: 见表 4。
与 CTX模型组相比 , YBSX预防+ 治疗大剂量组
可显著地升高巨噬细胞吞噬指数和 TN F-α含量
( P < 0. 05) ,小剂量组也可升高巨噬细胞吞噬指数
和 TN F-α含量 ,但无统计学意义。阿胶预防+ 治疗
组的作用与 YBSX预防+ 治疗大剂量组的作用
相当 ,且升高 TN F-α的作用十分显著 (P < 0. 01)。
3　讨论
表 3　 YBSX预防+ 治疗给药对造血功能的影响 ( x± s , n= 20)
Table 3　 Ef fects of YBSX Syrup by combined prevention and treatment
administration on hematopoietic function ( x± s , n= 20)
　组　别 　剂　量 白细胞数 / (个· μL- 1) 血小板数 /( 104个· μL- 1 ) 骨髓有核细胞数 /( 104个·股骨 - 1) 脾指数 / ( mg· 10 g- 1)
正常对照 　　　 - 8 040± 1 168 　　　 35. 1± 11. 2 1 681± 437 　　　 5. 56± 0. 70
C TX模型 　 100 mg· kg- 1 2 081± 766* * 18. 9± 7. 1* * 592± 166* * 2. 00± 0. 76* *
阿胶对照 8 mL· kg- 1 4 400± 1 413▲ 43. 3± 19. 4▲▲ 1 048± 168▲▲ 4. 15± 1. 02▲
YBSX 40　 g· kg- 1 7 550± 1 587▲▲ 41. 1± 15. 4▲▲ 941± 281▲▲ 5. 29± 1. 08▲▲
13　 g· kg- 1 4 733± 1 208▲ 27. 8± 10. 6▲ 862± 210▲ 3. 30± 0. 65▲
　　　表注同表 2
　　　 Notes are same to Table 2
表 4　 YBSX预防+ 治疗给药对免疫功能的影响 (x± s , n= 20)
Table 4　 Effects of YBSX Syrup by combined prevention
and treatment administration on immunologic
function (x± s, n= 20)
组　别 剂　量 MΥ吞噬率
/%
MΥ吞噬指数
/%
TN F-α
/ ( pg· mL- 1)
正常对照 　　- 29. 82±2. 04 0. 366± 0. 074 1 197± 155
CTX模型 100 mg· kg- 1 22. 76±7. 24 0. 207± 0. 093* 353±106* *
阿胶对照 8 mL· kg- 1 26. 81±4. 67 0. 335± 0. 048▲ 1 121± 268▲▲
YBSX 40　 g· kg- 1 27. 95±6. 74 0. 327± 0. 075▲ 558±166▲
13　 g· kg- 1 22. 16±2. 89 0. 231± 0. 039 492±150
　　表注同表 2
　　 Not es are same to Tabl e 2
　　 YBSX是一个在临床应用中取得了明显疗效的
方剂。 其中 ,补骨脂具有补肾助阳 ,升达脾胃之功
效 [4 ] ;蚤休具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊之作
用 [5 ] ;羊蹄具有清热解毒、止血凉血之功效 [6 ]。
在本实验中 , C TX模型组与正常对照组相比 ,
白细胞数、脾指数、骨髓有核细胞数和血小板数显著
降低 ,说明常用的化疗药物 CTX能使小鼠免疫功
能处于明显的抑制状态 ,且造血功能低下 [7 ]。 与
CTX模型组相比 , YBSX单纯预防的大剂量组能显
著地升高白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数和脾
指数 ,升高率分别达 161% , 58% , 22% , 116% ;
YBSX单纯治疗的大剂量组能显著地升高白细胞
数、血小板数、骨髓有核细胞数和脾指数 ,升高率分
别达 238% , 206% , 94% , 197% ,单纯治疗小剂量组
也能显著地升高白细胞数 ,升高率达 128% ,说明单
纯治疗组效果要好于单纯预防组。而 YBSX预防+
治疗的大剂量组十分显著地升高白细胞数、血小板
数、骨髓有核细胞数和脾指数 ,升高率分别达
263% , 117% , 59% , 165% ;其小剂量组也显著升高
白细胞数、血小板数、骨髓有核细胞数和脾指数 ,升
高率分别达 127% , 47% , 46% , 65% 。说明在 3组
中 ,预防+ 治疗组对于被 CTX抑制的造血系统的
疗效最佳 ,这对于减轻化疗的损害 ,提高近期疗效有
益 [8 ]。为了评价 YBSX对 CTX所致免疫功能的抑
制是否有预防作用 ,在预防+ 治疗组中又观察了两
个重要的免疫学指标 ,发现大剂量组的巨噬细胞吞
噬指数和 TN F-α含量显著升高。 巨噬细胞具有杀
菌 ,吞噬肿瘤细胞、突变细胞 ,提呈抗原诱发特异性
免疫应答 ,并参与免疫调节等多种免疫作用 ; TN F-α
主要是由被激活的巨噬细胞所产生的 ,参与机体炎
症与免疫应答调节 ,导致肿瘤细胞凋亡 ,具有抗肿瘤
作用 [9 ] ,因而巨噬细胞功能的改善和 TN F-α含量的
升高对肿瘤的治疗有利。 以上结果说明 , YBSX对
CTX化疗所致造血系统和免疫系统的抑制有明显
的改善作用 ; 3种给药方法中 ,预防+ 治疗的疗效最
好。本研究为临床合理使用 YBSX治疗急性粒细胞
白血病和淋巴细胞白血病提供了实验依据。
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西红花酸对羟自由基损伤的原代心肌细胞的保护作用
沈祥春 ,钱之玉
(中国药科大学 药理教研室 ,江苏 南京　 210009)
摘　要: 目的　研究西红花酸 ( cr ocetin) 对羟自由基 ( O H· )损伤的原代培养心肌细胞的保护作用。 方法　培养
的原代心肌细胞加入不同浓度的西红花酸后 ,用 0. 5 mmo l / L OH· 损伤原代培养的心肌细胞 ,检测细胞培养上清
液中的乳酸脱氢酶 ( LDH)、心肌细胞线粒体琥珀酸脱氢酶 ( M SD )的活性 ,心肌细胞线粒体膜电位 ( MM P)的变
化 ,并用流式细胞仪及 DN A梯度电泳检测细胞凋亡。结果　 0. 5 mmol /L OH· 使细胞培养上清液中 LDH活性增
加、 M SD的活性降低、 MM P降低、心肌细胞凋亡率增加。 西红花酸 1. 0, 0. 1μmo l /L明显降低培养上清液中 LDH
活性、提高 M SD的活性及 M MP、降低心肌细胞凋亡率 ,与模型组比较差异显著 (P < 0. 05)。 结论　西红花酸对
OH· 所致的心肌细胞损伤 (凋亡 )具有保护作用。
关键词: 西红花酸 ;羟自由基 ;心肌细胞
中图分类号: R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2004) 06 0657 04
Protection of crocetin on primary culture cardiac myocyte injured by hydroxyl free radicals
SHEN Xiang-chun, QIAN Zhi-yu
( Depa r tment o f Pha rmacolog y , China Pharmaceutical Univ er sity , Nanjing 210009 China )
Abstract: Object　 To study the cardio-pro tectiv e ef fect of crocetin on primary cul ture cardiac myocyte
injured by hydroxyl f ree radicals. Methods　 After adding crocetin, prima ry culture ca rdiac myocyte w as
injured by 0. 5 mmol /L hydroxyl f ree radicals which w ere generated by Fenton systems. The activi ty of
lactic dehydrogenase ( LDH) and mitochondrion succinic dehydrogenase ( M SD) was observ ed. Mi tochon-
drion membrane po tential ( MMP) was detected by Rh123. The ra tio o f cardiac myocy te apopto sis was in-
vestiga ted by f low cy tometry and DN A ladder elect ropho resis. Results　 Compa red wi th the model g roup,
crocetin significant ly decreased the activity of LDH in culture supernatant and the ratio of ca rdiac myocyte
apopto sis, ma rkedly increased the activity o f M SD and MMP. Conclusion　 Crocetin has the pro tective ef-
fect on the apoptosis of ca rdiac myocy te injured by hydroxyl f ree radical.
Key words: crocetin; hydroxyl f ree radicals; cardiac myocy te
　　近期的研究结果表明心肌受损的主要途径之一
是氧自由基及其引起的脂质过氧化反应而导致的心
肌细胞凋亡 [1, 2 ]。羟自由基 ( O H· )是人体内反应性
最强的氧自由基 ,尽管它的半衰期短 ,扩散范围小 ,
但极其活泼 ,易溶于脂质 ,因此 OH· 的危害性更
大 ,它及其介导的脂质过氧化反应与体内许多重要
生理和病理过程密切相关 [3 ]。 西红花苷及其苷元西
红花酸是西红花的主要有效成分 [ 4] ,具有不饱和共
轭烯酸结构 ,属类胡萝卜素类 ,具有极强的抗氧化作
用 [5 ]。国外研究资料提示西红花酸可抑制蛋白激酶
·657·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 6期 2004年 6月
收稿日期: 2003-11-13作者简介:沈祥春 ,男 ,山东郯城人 ,中国药科大学博士研究生 ,主要研究方向为生化药理学和心血管药理学。
* 通讯作者　 Tel: ( 025) 83271322