全 文 ：淫羊藿总黄酮促进免疫功能低下小鼠 IL-2和 NK活性的实验研究
孙　奕 1 ,王景明 1 ,骆永珍 2
( 1. 武警医学院 ,天津　 300162; 2. 成都中医药大学 ,四川 成都　 610075)
摘　要: 目的　探讨淫羊藿总黄酮对免疫功能低下小鼠的免疫促进作用。 方法　分别采用淫羊藿总黄酮 325, 650
和 1 300 mg /( kg· d)与羟基脲 320 mg /( kg· d) , ig小鼠 ,同时以正常和模型小鼠作对照 ,实验第 11天用 3 H-Td R
掺入法和同位素释放法检测各组小鼠 IL-2和 NK细胞活性 ,并计算脾脏指数。结果　淫羊藿总黄酮有拮抗羟基脲
抑制模型小鼠 IL-2和 NK细胞活性的作用 ,尤以 650 mg /( kg· d)剂量组效果最为显著。模型组小鼠体重和脾脏
指数与正常组和治疗组相比显著减少。 结论　淫羊藿总黄酮对免疫功能低下小鼠有良好免疫促进作用。
关键词: 淫羊藿总黄酮 ;羟基脲 ;白细胞介素 -2; NK细胞活性
中图分类号: R286. 95　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 07 0635 03
Effects of total flavones fromEpimedium L. on IL-2 and NK activity in
immunodepressant mice
SUN Yi
1 , W ANG Jing-ming
1 , LUO Yong-zhen
2
( 1. Medical Co lleg e of Chinese People s A rmed Police For ces, Tianjin 300162, China;
2. Chengdu Univ ersity o f TCM , Chengdu 610075, China)
Key words: to tal f lav ones f rom Epimedium wushanese T. S. Ying ; hydro xyurea; IL-2; NK cel l ac-
tivi ty
　　淫羊藿又名仙灵脾 ,传统医学认为其具有补肾
壮阳、强筋骨、祛风湿等作用。淫羊藿总黄酮 ( TFE)
是从小檗科淫羊藿属植物巫山淫羊霍的茎叶中提取
的总黄酮类成分。 其中含有淫羊藿苷 ( icariine) ,去
氧甲基淫羊藿苷 ( desomethy licariine) ,β -去氢淫羊
藿素 (β -anhydroica ri tine) 等多种黄酮苷以及木脂
素 A、 B,生物碱 (木兰碱 )等。王天然 [1 ]等研究发现
淫羊藿黄酮是淫羊藿促进免疫功能的有效成分。为
探讨淫羊藿总黄酮拮抗羟基脲对小鼠的免疫抑制作
用 [2 ]的机制 ,本研究观察了不同剂量淫羊藿总黄酮
对服羟基脲小鼠的 IL-2和 NK细胞活性的影响。
1　材料
1. 1　实验动物:昆明种健康小鼠 (本校实验动物中
心提供 ) ,雌雄各半 ,体重 ( 20± 2) g ,在实验条件下
适应 1周后 ,随机分为 5组 ,进行试验。
1. 2　药品: 淫羊藿总黄酮 ( T FE) ,从巫山淫羊藿
Epimedium wushanense T. S. Ying中提取 ,用生理
盐水分别配成 13, 26和 52 g /L 3个浓度 , 4℃ 冰箱
保存备用。 N -羟基脲 ( N -hydroxy-urea) ,中国科学
院上海生物化学研究所提供。
1. 3　试剂: RPM I-1640 (美国 Gibco ) , 3 H-TdR (中
国科学院上海原子能研究所 ) , Com A ( Sigma 公
司 )。
2　方法
2. 1　造模及给药方法:参照刘福春 [ 3]造模方法 ,以
羟基脲 320 mg /( kg· d) ig小鼠 ,正常组每日 ig生
理盐水 0. 5 mL,治疗组参照成人每千克体重用量
(乘 10～ 20倍 ) ,分别以 TFE 325, 650和 1 300mg /
( kg· g ) ig小鼠 ,连续 10 d,实验第 11天称体重和
脾脏湿重、检测各组小鼠 IL-2和 NK细胞活性。
2. 2　脾细胞悬液制备: 无菌取出小鼠脾脏后 ,用
100目钢网研磨脾脏制备细胞悬液 ,吸入离心管后
静置 10 min,弃去沉淀的团块 , Hanks液洗 2遍 ,用
完全 RPM I-1640培养基调至所需浓度作为小鼠
NK活性的效应细胞及小鼠 IL-2的产生细胞。
2. 3　 IL-2活性测定方法:参照尹廷贵方法 [4 ] ,取前
述方法制备的实验小鼠脾细胞 ,加 Com A刺激 48
h,再用指示细胞 (小鼠胸腺细胞 ) 与此上清共育 ,
同时作指示细胞加 IL-2对照 ,培养 60 h,加 3 H-
TdR 12 h后收集测 cpm值 ,根据标准曲线求得标
·635·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 7期
收稿日期: 2001-10-26
作者简介:孙　奕 ( 1958-) ,女 ,蒙古族 ,辽宁法库县人 ,副教授 ,博士研究生 , 1982年毕业于黑龙江中医学院 , 1995年 7月获成都中医药
大学免疫学硕士学位 ,同年调入武警医学院免疫教研室工作 , 1996年晋升副教授 , 2000年 9月考入华中科技大学同济医学院
攻读博士学位 ,研究方向中药免疫学和移植免疫学。 　 Tel: ( 022) 60578096　 E-mai l: d rsunyi@ yahoo. com. cn
本 IL-2活性 ( U /mL)。
2. 4　 NK细胞活性测定方法: 制备小鼠 NK活性的
效应细胞 ,每孔 100μL标记靶细胞 1× 105 ( YAC-
1) 与标记同位素 37 kBq混匀 , 37℃ 培养 20～ 24
h,弃上清 ,加入 DNA酶和胰酶各 100μL (分别含
10μg DN A和 0. 6 mg 胰酶 ) ,充分混匀 ,放置 1 h
后收获每管上清 0. 5 m L置另外的试管中。 对照管
以 FCS-1640代替效应细胞。用 γ计数仪分别测每
管上清和细胞部分的 cpm值。
NK细胞活性 (% ) = 实验管 3H-TdR释放率 -对照管
3 H-Td R自然释放率
2. 5　统计学处理:采用 t检验。
3　结果
3. 1　实验小鼠一般状态:模型对照组第 6天起表
现活动迟缓、弓背蜷缩、毛枯不荣 ,肢尾冷等体征并
伴有体重减轻 ,显著低于对照组 ( P < 0. 05) , TFE
治疗组上述体征出现较迟 ( 6～ 8 d) ,程度较轻 ,且
无体重下降 (略有增加 ) ,与对照组相比 ,无显著性
差异 (P < 0. 05)。见表 1。
3. 2　 TFE对抗羟基脲鼠 IL-2、 NK细胞活性和脾
脏指数的影响: T FE治疗组与模型对照组相比 IL-
2、NK细胞活性、脾脏指数明显升高 ,有显著性差异
( P < 0. 05或 P < 0. 01) ,而与正常组相比则差异无
显著性 ,表明 TFE可拮抗羟基脲对小鼠的免疫抑
制作用 ,见表 1。
4　讨论
表 1　各实验组体重、 IL-2,NK细胞活性和脾脏指数的比较 ( x± s )
组　别 剂　量
( mg /k g· d) n
体重 ( g)
(第 11天 )
IL-2
( U /mL)
N K
(% )
脾脏指数
(脾重 mg /体重 g )
对照组 - 13 22. 1± 1. 96* * 24. 16± 9. 21* * * 80. 93± 6. 752* * 49. 8± 4. 22
模型组 - 11 19. 0± 2. 10 10. 87± 1. 89 69. 27± 13. 810 46. 9± 5. 34
TFE 325 12 21. 3± 2. 04* 14. 53± 3. 21* 81. 62± 6. 592* * 52. 6± 5. 81*
650 12 21. 9± 1. 98* * 26. 98± 15. 72* * 82. 34± 10. 662* * 53. 4± 6. 02*
1 300 12 21. 4± 2. 16* 18. 28± 16. 04* 82. 78± 12. 402* * 51. 3± 4. 74*
　　　　与模型组相比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001
4. 1　模型对照组小鼠 IL-2和 NK细胞活性明显
降低 ,与正常组相比有显著性差异 ,显示用羟基脲建
立免疫功能低下小鼠模型是成功的。 而且模型对照
组小鼠还出现了明显的类似中医“阳虚”的体征 ,淫
羊藿为临床常用的补阳药物 ,用其主要有效成分
T FE进行治疗 ,符合“因证论治”、“虚则补之”的中
医理论 ,本实验中 TFE治疗组小鼠“阳虚”体征均
明显减轻 ,正常组和治疗组体重略有增加 ,而模型对
照组小鼠体重反而减少 ,表明 TFE对改善羟基脲
所致小鼠整体机能状态有明显的作用。
4. 2　 IL-2主要由 CD+4和 CD+8 T细胞产生 ,此外
NK细胞、 LAK细胞亦可产生 , IL-2分布于 T细
胞、 B细胞、NK细胞及 MΥ表面。 IL-2通过与上述
细胞膜表面的 IL-2R结合 ,而引起广泛的生物学效
应 ,是参与免疫应答的重要细胞因子 [5 ]。 IL-2活性
在很大程度上决定 T细胞依赖性免疫应答的强
度 [6 ]。 NK细胞通过直接接触和 ADCC效应对多种
肿瘤细胞和病毒感染细胞有较强的杀伤作用。 此外
还有重要的免疫调节和对造血系统的调节作用 [6 ]。
而静止的 NK细胞必须经活化后才能发挥其杀伤
作用。 NK细胞膜表面表达中等亲和力的 IL-2R,
IL-2可正反馈上调 NK细胞活性。 TFE对模型小
鼠 IL-2和 NK细胞活性及升高脾脏指数的增强作
用 ,显示 TFE对免疫功能低下小鼠具有良好的免
疫促进作用。
4. 3　在 T FE 325和 650 mg / ( kg· d ) 实验组间
IL-2活性呈一定程度的剂量依赖关系 (见表 1) ,而
TFE 1 300 mg /( kg· d)剂量组未明显随剂量增加
的 IL-2和 NK细胞活性增加 ,提示在此基础上再
加大 TFE给药量 ,可能对治疗组小鼠 IL-2和 NK
细胞活性没有进一步促进作用 ,反而有可能出现
TFE的毒副作用。
4. 4　羟基脲的作用环节主要在于抑制核苷酸还原
酶的活性 ,从而抑制 DNA合成。淋巴细胞是分裂增
殖旺盛的细胞 ,对羟基脲抑制 DNA合成的影响 ,会
远较一般细胞敏感 ,故细胞活性也易受到抑制。TFE
很可能是通过拮抗羟基脲对核苷酸还原酶的抑制 ,
从而促进核酸合成而达到增强免疫功能的作用。 对
此机制刘福春等 [7 ]报道淫羊藿和肉苁蓉提取物可以
促进羟基脲模型小鼠的 DNA合成率 ,这一结果也
可作一佐证。
参考文献:
[ 1]　王天然 ,邢善田 ,周金黄 .淫羊藿总黄酮促进免疫功能的实验
[ J ]. 中成药研究 , 1987, ( 2): 27-28.
[2 ]　杨静玉 ,于庆海 ,李　爽 ,等 . 淫羊藿总黄酮免疫功能低下小鼠
的免疫增强作用 [ J] .沈阳药科大学学报 , 1998, 15( 2): 94-97.
[3 ]　刘福春 ,张家庆 ,李菊仙 ,等 . 羟基脲制造“阳虚”动物模型的研
究 [ J] . 吉林中医药 , 1984, ( 5): 31-33.
[4 ]　尹廷贵 ,吴　慧 ,苏祖兰 ,等 . 用小鼠胸腺细胞快速检测白细胞
·636· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 7期
介素 -2生物活性的探讨 [ J ]. 华西医科大学学报 , 1986, 7( 4 ):
273-275.
[5 ]　龚非力 . 医学免疫学 [M ] . 北京:科学出版社 , 2000.
[6 ]　杨贵贞 . 医学免疫学 [M ] . 长春:吉林科学技术出版社 , 1999.
[7 ]　刘福春 ,丁光霞 ,李菊仙 ,等 . 淫羊藿肉蓉对羟基脲所致“阳虚”
动物骨髓细胞 DN A合成率的影响 [ J ] .中国中药杂志 , 1991,
16( 10): 620-622.
严重烫伤大鼠组织 Na+ ,K+ -ATPase和 Ca2+ -ATPase
活性改变及三七保护作用探讨
袁新初 ,周乾毅 ,杨逢春 ,张　伟 ,程贵荣
(武汉科技大学医学院 组胚教研室 ,湖北 武汉　 430080)
摘　要: 目的　观察严重烫伤后大鼠组织 Na+ , K+ -ATPase和 Ca2+ -ATPase活性变化及三七对烫伤大鼠的保护
作用。方法　采用 Wistar大鼠制作 40% 体表面积 ( TBSA) Ⅲ 度烫伤模型 ,在伤后 4, 8, 24和 48 h分别取大鼠心、
肝和肾组织匀浆 ,用比色法测定 Na+ , K+ -ATPase和 Ca2+ -ATPase活性变化。结果　严重烫伤后大鼠各器官组织
内 ATPase活性均呈进行性下降 ,并在伤后 48 h达最低点 ,但不同组织的酶活性下降模式不尽相同 ;同时 ,三七治
疗组大鼠心、肝和肾组织 Na+ , K+ -ATPase和 Ca2+ -ATPase的活性均呈进行性增加 ,与单烫伤组大鼠比较各指标
均有显著性差异。 结论　三七对严重烫伤后大鼠重要生命器官有保护作用。
关键词: 大鼠 ;烫伤 ;三七 ;腺苷三磷酸酶 ;
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 07 0637 02
Activity changes of Na
+ , K
+ -ATPase and Ca2+ -ATPase in tissue
of seriously scalded rats and protect effect of Panax notoginseng
YUAN Xin-chu, ZHOU Qian-yi, Y ANG Feng-chun, ZHANG Wei, CHENG Gui-yong
( Depar tment of Histo lo g y and Embryo lo gy of M edical Colleg e, Wuhan Univ er sity
o f Science and Tech no lo gy , Wuhan 430080, China )
Key words: rat; scalded; Panax notoginseng ( Burk. ) F. H. Chen; AT Pase
　　严重烫伤常引起持续、剧烈的机体高代谢反应 ,
不仅造成局部损伤 ,而且还可引起远隔部位器官的
损伤。重要内脏器官的代谢功能紊乱 ,成为多种烧伤
并发症甚至多器官功能不全综合症 ( MODS)发生
发展的起点。AT P作为机体内各种生理活动最直接
的供能物质 ,它的产生依赖于 ATPase的活性 ,而
A TPase是普遍存在于细胞质及细胞膜上的一种蛋
白 ,在物质运送、能量转换及信息传递方面具有重要
的作用。本实验观察了严重烫伤后不同时相点心、肝
和肾组织 Na+ , K+ -A TPase和 Ca2+ -ATPase的活
性变化 ,并探讨三七对严重烫伤大鼠的保护作用。
1　材料和方法
1. 1　实验分组及动物模型 [1 ]制作: 选用健康 Wis-
tar大鼠 85只 ,体重 ( 250± 30) g,雌雄兼用 ,由湖
北省医学科学院实验动物中心提供。 随机分为正常
对照组 ( 5只 )、单烫伤组 ( 40只 )、治疗组 ( 40只 )。
单烫伤组和治疗组用 8% 硫化钡脱去大鼠背部约
40% 体表面积 ( TBSA) 的毛 ,洗净擦干 ,以 10%
水合氯醛 300 mg /kg ip麻醉大鼠后置于沸水中 16
s,造成 40% TBSAⅢ 度烫伤 (病理切片证实 )。治疗
组在大鼠烫伤后补给生理盐水抗休克的同时 , ip三
七注射液 150, 70, 35 mg /kg ,每 8小时给药 1次 ,
正常对照组及单烫伤组 ip等容生理盐水。
1. 2　观察指标及方法: 分别于伤后 4, 8, 24和 48 h
活杀大鼠 ,并立即取心、肝和肾组织置于 4℃ 冷生
理盐水中 ,洗去表面的残血 ,滤纸吸干 ,准确称取 1
g ,用生理盐水液制成 10% 组织匀浆备用 [2 ] ,采用
Low ary法 ,测定 ATPase酶活 [3 ]。
1. 3　统计学处理:数据用 x± s表示 ,采用 t检验。
2　结果
·637·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 7期
收稿日期: 2001-09-02
作者简介:袁新初 ( 1953-) ,男 ,湖南人 ,副教授 ,毕业于湖南医学院临床医学系 ,现在武汉科技大学医学院任教 ,主要从事中草药对人体
重要脏器保护作用的研究。 Tel: ( 027) 86864153