全 文 ：地榆中皂苷类化合物分离、鉴定及其含量测定
曹爱民1,张东方1,沙 明1,刘桂芳1, 吴 琳2 X
( 11 辽宁中医学院 中药系,辽宁 沈阳 110032; 21 大连美罗制药厂, 辽宁 大连 116025)
地榆为我国常用中药,始载于5神农本草经6, 列
为中品。/味苦,微寒,主妇人乳痉痛,七伤,带下病,
除恶肉,止汗,疗金疮0。具有凉血止血,解毒敛疮之
功效,常用于治疗便血,痔血, 血痢,崩漏,水火烫伤,
痈肿疮毒等。本文对地榆进行了提取分离工作, 在
氯仿层、乙酸乙酯层先后分离得到 5 个单体化合物
(Ñ~ Õ) , 经理化和光谱鉴定, 化合物Ñ为地榆苷-Ò即
3B- O-阿拉伯糖基-19A-羟基-乌索-12烯-28羧酸, 化
合物Ò为 B-胡萝卜苷(B-daucosterol) ,化合物Ó为 3B-
O-阿拉伯糖基-乌索-12, 19-二烯-28-B- D-葡萄糖基
酯,化合物Ô为地榆苷-Ñ即 3B- O-阿拉伯糖基-19A-羟
基-乌索-12烯-28-B- D-葡萄糖基酯,化合物Õ为没食
子酸( gallic acid)。我们以地榆苷-Ñ为指标性成分用
薄层扫描法对地榆进行了含量测定,并做了方法学
考察,实验结果表明:其回收率、精密度、稳定性等参
数均良好,可作为地榆药材的定量方法。
1 指标成分的分离
111 材料、仪器及试剂:药材:地榆采自千山,经辽宁
中医学院植物教研室王冰教授鉴定为地榆属地榆
Sanguisor ba of f icinalis L1。仪器:旋转蒸发仪(上海申
生科技有限公司) , UV-265FW 紫外分光光度计,
Bruke-r AM-500核磁共振仪, MS质谱谱仪。试剂:柱
色谱硅胶,薄层色谱硅胶(均为青岛海洋化工厂, 化学
纯) ,吡啶为光谱纯,其他各种试剂均为分析纯。
112 提取与分离: 取地榆根, 切片, 阴干, 粉碎, 过
20 目筛,称取 415 kg, 用 95%乙醇浸泡 24 h时, 用
20倍量乙醇渗漉, 回收乙醇, 浓缩, 得浸膏1 200 g,
质量体积比为 1123。用水混悬, 分别用氯仿、乙酸
乙酯萃取, 分别得到浸膏 82, 193 g。将乙酸乙酯部
分用硅胶拌匀,上硅胶柱, 以氯仿-甲醇梯度洗脱, 收
集各流份,以薄层色谱检定,合并相同组份, 反复用
甲醇、乙酸乙酯重结晶分别得到结晶Ñ~ Õ。
113 结构鉴定:化合物Ñ为白色粉末, L iebermanm-
Barchard反应为紫红色, Molish 反应阳性, U V 在
202 nm 有末端吸收 FAB-MS ( m/ z ) : 62214 ( M +
NH3) + , 58619, 45419, 43712, 39113, 19112, 用 5%
H2SO4水解后,用 PC层析检出阿拉伯糖。13CNMR
( py ridine-D5, D) : 107154( C-1c) , 72174( C-2c) , 74167
( C-3c) , 69155( C-4c) , 63175( C-5c) ,表明该化合物中
含有阿拉伯糖基。除此之外, 还有 30个碳信号,结
合理化性质及光谱数据, 分子式为 C35H 56O8, 计算
不饱和度为 8。根据13CNMR数据和化合物Ô比较,
该化合物为化合物Ô的次生苷, 综上, 化合物 Ñ为
3B- O-阿拉伯糖基-19A-羟基-乌索-12烯-28羧酸。
化合物 Ò为白色粉末, L iebermanm-Barchard反
应为紫红色, Molish反应阳性, 与胡萝卜苷对照品共
薄层, Rf值相同, 酸水解, 所得的苷元 Rf值与 B-谷
甾醇的 Rf值相同,水解母液用 PC 能检出葡萄糖,
故确定化合物Ò为 B-胡萝卜苷。
化合物Ó为白色粉末, L iebermanm-Barchard反
应为紫红色, Molish 反应阳性, U V 光谱在 223 nm
有吸收,说明该化合物也无共轭体系存在,但此化合
物Ô有红移。FAB-M S ( m/ z ) : 766 ( M+ + NH 3) ,
587, 437, 243, 20014,经水解,母液中可检出葡萄糖
和阿拉伯糖。13CNMR( py ridine-D5, D) : 107157( C-
1c0, 72173( C-2c) , 74170( C-3c) , 69160( C-4c) , 66180
( C-5c) , 表明该化合物中含有阿拉伯糖基; 13CNMR
( py ridine-D5, D) : 95189 ( C-1d) , 74111( C-2d) , 79130
( C-3d) , 71129( C-4d) , 78197( C-5d) , 62140( C-6d) , 表
明该糖为 B- D-葡萄糖。除糖信号外, 还有 30 个碳
信号,结合 MS谱数据,推测分子式为 C41H64O12,计
算不饱和度为 10。根据13CNMR数据和化合物Ô比
较,二者非常相近,二者主要差异是化合物Ó多 2 个
烯碳信号 134183, 137181,结合化合物Ô有 19 位羟
基存在,只能在 19, 20位脱水形成双键,根据理化反
应及光谱数据,分析该化合物为 3B- O-阿拉伯糖基-
乌苏-12, 19-二烯-28- O-葡萄糖基酯。
化合物Ô为无色针晶, L iebermanm-Barchard反
#397#中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
X 收稿日期: 2002-08- 11基金项目:辽宁省教委资助课题( 9807211071)作者简介:曹爱民, 女,高级实验师, 现在辽宁中医学院中药系测试中心工作, 主要研究方向为中药质量评价研究。 T el: ( 024 )
86241606
应为红色, Molish 反应阳性, UV 有 202 nm 有末端
吸收,没有明显的紫外吸收,可以推测该化合物无共
轭体系, FAB-M S ( m/ z ) : 78414 ( M + NH 3 ) + ,
60418, 45419, 43710。用酸水解,母液通过 PC 检出
葡萄糖和阿拉伯糖。13CNMR ( pyridine-D5, D)。
107135( C- 1c) , 72197( C-2c) , 74167 ( C-3c) , 69156
( C-4c) , 66177( C-5c) , 表明该化合物中含有阿拉伯
糖基 13CNMR( py ridine-D5, D) : 95186( C-1d) , 74119
( C-2d) , 79116 ( C-3d) , 71123 ( C-4d) , 78196 ( C-5d) ,
62160( C-6d) ,表明该糖为 B- D-葡萄糖, 可以看出该
化合物为双糖苷,一为 6碳糖,一为 5碳糖。除此之
外,还有 30个碳信号,结合前文Liebermamn反应阳
性,可推测该化合物为三萜皂苷类化合物, 结合质
谱,推测该化合物分子式为 C41H66O13,为三萜双糖
苷。不饱合度为 9,根据 C谱数据,推测该化合物为
五环三萜双糖皂苷, 且苷元中有两个烯碳原子
( 134184, 138177) ,比较碳谱数据,与报道中的地榆
苷- Ñ非常相近[ 1] ,故确定该化合物为地榆苷- Ñ ,即
3B- O-阿拉伯糖基-19A-羟基乌索-12-二烯-28-B-D-葡
萄糖基酯。13CNMR光谱数据见表 1。
化合物Õ为无色针晶, UV, 1HNMR, 13CNMR
数据与文献对照[ 2] , 确定该化合物为没食子酸。
表 1 化合物Ñ , Ó , Ô的13CNMR信号归属
Table 1 Signal ownership of compounds Ñ , Ó , Ô
碳号 Ô Ñ Ó 碳号 Ô Ñ Ó
1 39164 39159 39160 23 28133 28127 28132
2 26177 28127 26180 24 15173 15156 16133
3 88187 88181 88171 25 16198 16193 17105
4 40162 40139 39180 26 17148 17122 18118
5 56101 55191 56110 27 24167 24173 23190
6 18177 16168 18194 28 177110 180168 174174
7 33157 33156 34165 29 26119 26170 26170
8 40162 40140 39150 30 16179 16181 16181
9 47182 47175 47138 Ara
10 37107 37104 36194 1c 107157 107154 107155
11 24114 24173 22116 2c 72173 72174 72197
12 128151 128106 134184 3c 74170 74167 74167
13 139154 139197 138177 4c 69160 69155 69156
14 42120 42140 44197 5c 66180 66175 66177
15 29132 29135 29111 Glc
16 26119 26198 26180 1d 95189 95186
17 48171 48133 48132 2d 74111 74119
18 54150 54164 56110 3d 79130 79116
19 72173 72173 137181 4d 71129 71123
20 42116 42114 134183 5d 78197 78196
21 27113 27119 36187 6d 62140 62134
22 37181 38154 39180
2 含量测定
211 仪器与试剂: CS-930薄层扫描仪(日本岛津) ,
上海必能信超声波清洗机; 无水甲醇、氯仿、乙酸乙
酯均为分析纯。
212 色谱条件:薄层板:硅胶G;展开剂:氯仿-乙酸乙
酯-甲醇-水( 15B40B22B10下层)展开,展距 9 cm;显色
剂: 10%硫酸-无水乙醇, 105 e 下烘至斑点清晰。
测定条件: Ks= 525 nm KR= 680 nm S x= 3
[ X] = 14 反射式锯齿扫描。
213 线性范围考察:对照品溶液的制备,精密称取地
榆苷-Ñ5175 mg,于 5 mL 的量瓶中,用甲醇溶解,并加
甲醇至刻度, 摇匀,作为对照品溶液。分别精密吸取
对照品溶液 2, 4, 6, 8, 10 LL, 点与同一硅胶 G薄层板
上,按前述色谱条件, 展开,显色定位, 测定以对照品
点样量为纵坐标,以吸收度积分值为横坐标,绘制标
准曲线,经线性回归, 回归方程为: Y= 6122 @ 10- 8X
- 1197 @ 10- 3, r= 01996 9。对照品地榆苷-Ñ点样量在
2134~ 11170 Lg 线性关系良好。
214 同板精密度考察:取地榆供试品溶液各5 LL 点样
5次于同一薄层板上,以色谱条件项下处理,用薄层扫
描仪扫描,计算峰面积积分值的 RSD值,为01847%。
215 稳定性试验考察: 取本品细粉 015 g, 精密称
定,置 50 mL 具塞锥形瓶中,加无水甲醇 10 mL,置
超声波震荡器中提取 30 min, 放冷,滤过, 滤液置 10
mL 量瓶中,残渣用无水甲醇洗涤, 洗液并入同一量
瓶中,加无水甲醇稀释至刻度,摇匀, 作为供试液,精
密吸取供试液, 按 0, 1, 2, 3, 4 h 时间间隔, 分别定
样、展开、测定峰面临, 计算 RSD 值为 01397%。
#398# 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
216 重现性考察试验:取 3 份同一产地样品, 分别
按正文[含量测定]项下方法操作,测定结果平均含
量为 1126% , RSD= 211%。
217 样品制备方法及数据:采用前文含量测定方法
制备供试品溶液, 对 29 批地榆药材饮片加以测定,
含量测定结果见表 2。
3 结果与讨论
5中华人民共和国药典6中对地榆总鞣质含量进
行了控制,但对单一的化学成分却没做要求, 我们用
薄层扫描法对地榆皂苷类化合物进行了定量研究。
曾用 HPLC法对地榆药材进行含量测定, 但由于该
类化合物的紫外吸收为末端吸收, 稳定性较差,所以
选择了薄层扫描法, 结果表明, 该方法各种参数稳
定,具有可行性。
References:
[ 1] Qin W G1 Study on chemical composition of tradit ional Chin ese
drug [ J]1 Chin Tr ad it Herb Drugs (中草药) , 1991, 22( 11) :
483-4841
[ 2] Chen D C1 Manual of Chemical Contr ol of T radi tional Chi-
表 2 含量测定结果
Table 2 Results of content determination
品种 来 源 地榆苷- Ñ
/ %
品种 来 源 地榆苷- Ñ
/ %
地榆 千山 0168 长叶 南昌 1149
哈尔滨人民 1142 地榆 上海 2188
辽源 1133 杭州丽水 1197
沈阳天益堂 1141 本溪 1111
哈尔滨 1142 河南 )
沈阳 1105 南京 )
北京中医药 1168 粉花 凌源 0186
沈阳宁山药房 1169 地榆 朝阳 0179
翻白 北京同仁堂 1139 沈阳友谊药房 2104
叶 北京百草药业 1176 秦皇岛 0181
沈阳人民药房 2185 延吉 2145
北京金松鹤 2197 延吉和龙 0138
白花 上海雷允上 1153 锦州 0187
地榆 广州 2154 承德 0188
陕西 1137 均值 1154
注: / ) 0表示无此斑点 Note: / ) 0 in dicates no such spot
nese Drug (中药化学对照品工作手册) [ M ]1 Beijing: Chinese
Medicinal Science and T echnology Publishing House, 20001
瑞香狼毒中的双黄酮类化合物
刘 欣1,叶文才1,车镇涛2,赵守训1X
( 11 中国药科大学 天然药物化学教研室, 江苏 南京 210009; 21 香港中文大学中医学院,香港)
瑞香狼毒 Stel lera chamaej asme L1 又名断肠
草,为瑞香科狼毒属植物。广泛分布于我国西北、华
北等地。该植物的根部应用历史悠久, 为中药/ 狼
毒0的正品。始载5神农本草经6,列为下品。其性味
苦、平,有大毒, 具逐水祛痰、破积杀虫之功效[ 1]。
谓/治咳逆上气,破积聚、饮食寒热水气、恶疮鼠瘘疽
蚀、鬼精蛊毒,杀飞鸟走兽0。有报道证实其有抗肿
瘤作用,以及抗菌、抗结核的作用[ 2, 3]。近年来国内
外对其化学成分的研究报道较多,该植物主要含有
双黄酮、木脂素、香豆素、二萜等成分,其中狼毒属特
有的 C-3/ 3d双二氢黄酮和瑞香烷型二萜具有较强的
抗肿瘤作用[ 4~ 7]。为了寻找瑞香狼毒的抗肿瘤有
效成分,我们对产于我国青海省的瑞香狼毒药材进
行了系统的分离工作。
从瑞香狼毒的根中分离得到多个双黄酮类化合
物,经理化和光谱分析方法分别鉴定为芫花素乙
( w ikst rol B, Ñ )、二氢瑞香素乙( dihydrodaphnodorin
B, Ò)、瑞香素乙( daphnodorin B, Ó)、新狼毒素甲
( neochamaejasmin A, Ô)、异狼毒素 ( isochamae- jas-
min, Õ)、新狼毒素乙( neochamaejasm in B, Ö )。化
合物 Ñ~ Ó曾从同科的荛花属、瑞香属植物中分离
得到,从狼毒属植物中发现其存在,具有化学分类学
意义。化合物Ò和 Ó为首次从该属植物中分得。
1 仪器与材料
NMR用 JEOL JNM-EX 400测定;柱层析使用
ODS( 10~ 40 Lm, M erck) , Sephadex LH-20, D101大
孔吸附树脂(天津农药厂)和硅胶( 200~ 300 目) ;薄
层色谱用硅胶60 F254和RP-18 F254( M erck) ;化学试
剂均为分析纯。
所用瑞香狼毒 S 1 chamaej asme L1药材根采自
青海省, 经青海省药检所中药室宗玉英主任药师鉴
定,模式标本存放在中国药科大学标本馆。
#399#中草药 Chinese T raditional and Herbal Drugs 第 34 卷第 5 期 2003年 5月
X 收稿日期: 2002-08- 26作者简介:刘 欣,男, 2002年于中国药科大学天然药化专业毕业,获博士学位,现在中国科学院上海有机化学研究所进行博士后研究。
* 通讯作者