全 文 ：粗吻海龙中总甾体的含量测定
吴筱丹,李士敏, 王思平
(浙江大学药学院, 浙江 杭州 310031)
摘 要: 目的 测定粗吻海龙非皂化物中总甾体类化合物含量。方法 经 L iebermann-Burchard 试剂显色后 ,采用
可见-分光光度法进行定量分析。结果 线性范围 0. 2～2. 5 mg , r= 0. 999 8, 高中低浓度日内精密度分别为
0. 44%、0. 47%、0. 96% ,日间精密度分别为 1. 30%、0. 33%、0. 75% , 高中低浓度回收率分别为 97. 69%、98. 91%、
96. 67%。结论 本法简单方便,结果准确, 适合海龙中总甾体类化合物定量分析。
关键词: 粗吻海龙;甾体; 比色法
中图分类号: R286. 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2002) 07 0613 02
Determination of toal steroid in Trachyrhamphus serratus
WU Xiao-dan, LI Shi-m in, WANG Si-ping
( School of Pharmacy , Zhejiang U niver sity , Hangzhou Zhejiang 310031, China)
Key words : T rachy rhamphus serr atus ( T emminck et . Schleg el ) ; ster oid; co lorimetry
粗吻海龙 T rachy rhamphus serratus ( Tem-
minck et Schleg el )属海龙科动物,具温肾壮阳、散结
消肿之功效。药理研究表明粗吻海龙脂溶性的非皂
化物部分具有抗肿瘤活性[ 1]、激素样作用[ 2]和抗衰
老改善心血管功效 [ 3]。化学成分研究表明甾体类化
合物是其重要的组成部分。本实验对粗吻海龙中甾
体类成分的含量测定方法进行研究。
1 实验材料
1. 1 仪器与试剂: U V-2000 紫外可见分光光度计,
-谷甾醇为 E. M. K . 进口分装, 其余试剂均为分
析纯。
1. 2 药材来源: 海龙购自安国药材市场, 经浙江大
学药学院郭汉生教授鉴定为粗吻海龙。
2 方法与结果
2. 1 显色剂的配制:显色剂采用改良 Liebermann-
Burchard 试剂。量取 20体积乙酸酐, 塞紧, 冷却至
10 ℃以下。加入 1体积浓硫酸,摇匀后置于冰箱中
冷却,加入10体积冰醋酸后放至室温,即得。显色剂
临用配制。
2. 2 对照品溶液的配制:精密称取 -谷甾醇 10 mg
于 100 mL 容量瓶中,加无水乙醇溶解,定容,即得。
2. 3 供试品溶液配制:取粗吻海龙粗粉, 加石油醚
回流提取,回收溶剂得石油醚提取物。石油醚提取物
中加入 10% KOH 醇溶液皂化, 皂化完全后,石油醚
萃取,合并石油醚萃取液, 回收溶剂, 即得粗吻海龙
非皂化物。精密称取粗吻海龙非皂化物 300 mg 于
50 mL 容量瓶中, 加无水乙醇溶解,定容,即得。
2. 4 标准曲线的制备: 精密吸取上述对照品溶液
2, 4, 8, 12, 15, 25 mL 于茄形瓶中,在旋转蒸发仪中
蒸干。吸取 10 mL 新鲜配制的改良 Liebermann-
Burchard 试剂沿壁加入对照品溶液中, 塞紧摇匀,
水浴 30 m in, 取出,在 625 nm 处测定吸光度。计算
得标准曲线方程: A = 0. 285 8X + 0. 000 14, r =
0. 999 8,线性范围为 0. 2～2. 5 mg。
2. 5 精密度试验
2. 5. 1 日内精密度:取高、中、低 3个浓度供试品重
复测定5次,计算其相应含量, RSD 分别为0. 96% ,
0. 47%, 0. 44%。
2. 5. 2 日间精密度:取高、中、低 3个浓度的供试品
在不同天测定, 计算其相应含量, RSD 分别为
0. 74%, 0. 33% , 1. 30%( n= 5)。
2. 6 回收率试验:在粗吻海龙非皂化物中加入一定
量对照品,配制成高、中、低浓底,按 2. 3方法测定并
计算回收率, 其回收率分别为 97. 69% , 98. 91% ,
96. 67%. ( n= 3)。
2. 7 含量测定: 按 2. 3项下方法配制供试品溶液,
取供试品溶液 1 mL,按 2. 4项下方法进行测定, 测
得其含量为 13. 89%。
·613·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2002 年第 33卷第 7期
收稿日期: 2001-10-31
基金项目:浙江省分析测试基金资助( 00119) ;浙江省自然基金课题( 395131)
* 本院 2001届本科实习生
3 讨论
海龙是一种名贵的海洋药物, 甾体类化合物是
其主要的活性成分。但由于甾体类化合物缺少特殊
官能团,给其含量测定带来难度。研究根据甾体类化
合物的特征显色反应 Liebermann-Bur chard 试验,
采用分光光度法对总甾体化合物含量进行测定。结
果线性、精密度试验、回收率试验均较满意, 方法操
作简单,从而为将海龙开发成新药、制定质量标准提
供了参考依据。
参考文献:
[ 1] 吴筱丹, 李士敏,曾 苏,等 . 海龙体外抗肿瘤活性研究[ J ] .
中国中药杂志, 2001, 26( 3) : 198-200.
[ 2] 张朝晖,徐国均,徐珞珊, 等 . 海龙乙醇提取物的激素样作用
[ J ] . 中药材, 1995, 18( 4) : 197-199.
[3] 佘 敏,吴兰如,等 . 海洋生物抗衰老作用简报[ J ] . 现代应用
药学, 1988, 5( 4) : 9-11.
和胃止痛颗粒的质量控制
刘效栓1 ,李鸿彬1 ,张玉叶1 ,纪向阳1,郑旭东1,罗兴平2,王兰霞2
( 1. 甘肃省嘉峪关市酒钢医院, 甘肃 嘉峪关 735100; 2. 甘肃省药品检验所, 甘肃 兰州 730000)
和胃止痛颗粒是我院研制的治疗急慢性胃肠
炎、消化性溃疡的中药制剂,由延胡索、肉桂、当归、
白芍、陈皮等 10味中药组成,经多年临床观察, 疗效
显著。本实验采用薄层色谱法对延胡索、肉桂、当归、
白芍、陈皮、香附进行定性鉴别, 采用薄层扫描法对
延胡索乙素进行了定量分析。
1 仪器与试药
CS-930型薄层扫描仪(日本岛津) , 定量毛细管
(美国 Drummond公司) ,硅胶 G 薄层板(青岛海洋
化工厂) , 各对照品均购自中国药品生物制品检定
所, 和胃止痛颗粒 ( 批号: 20000721, 20000723,
20000804,酒钢医院提供) , 所用试剂均为分析纯。
2 处方与制备
2. 1 处方:延胡索170 g, 肉桂 140 g ,木香 115 g ,白
芍 115 g, 高良姜 115 g , 陈皮 90 g , 当归 70 g ,川芎
25 g ,砂仁 45 g ,香附 115 g。
2. 2 制备:处方中的 10味中药,除延胡索、白芍处,
其余 8味中药均以水蒸汽蒸馏法提取挥发油,蒸馏
后的水溶液及药渣与延胡索、白芍加水煎煮 3次,合
并煎液,静置,滤过,滤液浓缩至质量体积比为 1. 14
的浸膏,取浸膏 1份,糊精 1份, 蔗糖 2份, 混和制成
颗粒,干燥,喷加挥发油,混匀,密封 24 h即得。
3 定性鉴别
3. 1 延胡索的鉴别: 取颗粒 10 g ,加水 10 mL 使溶
解,加浓氨试液调至碱性, 乙醚提取 3 次, 每次 20
mL, 合并乙醚液, 蒸干, 残渣加甲醇 1 mL 溶解, 作
为供试品溶液。取延胡索对照药材 1 g, 加甲醇 30
mL, 超声处理 30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水溶
解,照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。取延
胡索乙素对照品,加甲醇制成 1 mg/ mL 的溶液,作
为对照品溶液。吸取上述 3种溶液各 5 L,分别点
于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚( 60 ℃～90℃) -
乙酸乙酯( 2∶1. 7)为展开剂, 置一浓氨试液饱和的
层析缸内,展开,取出,晾干,以碘蒸气熏至斑点显色
清晰,日光下检视。结果见图 1。
3. 2 肉桂的鉴定: 取颗粒 10 g, 加水 20 mL 使溶
解, 加盐酸调 pH 至 2, 用乙醚提取 3 次, 每次 20
mL,合并乙醚液。蒸干, 残渣加无水乙醇 1 mL 溶
解,作为供试品溶液。取肉桂对照药材1 g ,加无水乙
醇20 mL,超声处理 30 min,滤过, 滤液蒸干, 残渣加
无水乙醇 1 mL 溶解,作为对照药材溶液。取肉桂酸
对照品, 加无水乙醇制成 1 mg/ mL 的溶液,作为对
照品溶液。吸取上述 3种溶液各 5 L,分别点于同
一硅胶GF 254薄层板上,以石油醚( 60℃～90 ℃) -甲
酸乙酯-甲酸( 15∶5∶1)上层溶液为展开剂, 展开,
取出,晾干,于紫外灯下检视。结果见图 2。
3. 3 当归的鉴定: 取当归对照药材 1 g ,加无水乙醇
制成 1 mg / mL 的溶液,作为对照药材溶液。取阿魏
酸对照品, 加无水乙醇制成 1 mg / mL 的溶液, 作为
对照品溶液。吸取上述 2种溶液与 3. 2中供试品溶
液各 5 L,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上,以正
己烷-乙醚-冰乙酸( 5∶5∶0. 1)为展开剂, 展开, 取
出,晾干, 于紫外灯( 365 nm )下检视。结果见图 3。
3. 4 白芍的鉴定: 取颗粒 15 g, 加水 20 mL 使溶
解, 用水饱和的正丁醇提取 3次, 每次 20 mL, 合并
提取液。蒸干,残渣加乙醇 1 mL 使溶解, 作为供试
品溶液。取白芍对照药材 0. 5 g ,加乙醇20 mL,振摇
提取 5 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 1 mL 使溶
解,作为对照药材溶液。取芍药苷对照品适量,加乙
醇制成 1 mg / mL 的溶液,作为对照品溶液。吸取上
·614· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 2002 年第 33卷第 7期
收稿日期: 2001-11-05