全 文 ：六味地黄汤中马钱子素小鼠体内药代动力学研究
谢跃生 ,张振清 ,阮金秀
(军事医学科学院毒物药物研究所 ,北京　 100850)
摘　要: 目的　研究六味地黄汤中马钱子素小鼠体内药代动力学。 方法　高效液相色谱 -紫外检测法。结果　六味
地黄汤小鼠 ig给药后 ,马钱子素的药代动力学模型为单室模型一级吸收 ,其药代动力学参数为 K a= 0. 04 min- 1 ,
K e= 0. 019 min- 1 , T( pe ak) = 42. 4 min, t1/2ka= 17. 4 min, t1 /2ke= 35. 75 min。结论　此药代动力学参数可能是六味地黄
汤中马钱子素受其他成分影响所致。
关键词: 六味地黄汤 ;马钱子素 ;药代动力学 ;高效液相色谱
中图分类号: R285. 61　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0817 03
Pharmacokinetic study of loganin in LIUWEI DIHUANG DECOCTION* in mice
XIE Yue-sheng , ZHANG Zhen-qing , RU AN Jin-xiu
( Beijing Institute o f Pharmacolog y and Tox ico lo g y, Academy o f Milita ry Medica l Science, Beijing 100850, China)
Abstract: Object　 To study the pha rmacokinetics of log anin in LIUWEI DIHU ANG DECOCT ION
( LWDHD) in mice. Methods　 HPLC-UV detection w as used to determine the loganin lev els in biolo gical
samples. Results　 After ig LWDHD in mice, the plasma concentration-time course fi tted w ell to one-com-
partment model with the 1st o rder absorption and wi th the following pha rmacokinetic parameters; Ka=
0. 04 min
- 1
, K e= 0. 019 min
- 1
, T( peak) = 42. 4 min, t1 /2ka= 17. 4 min, t 1 /2k e= 35. 75 min. Conclusion　 The
pha rmacokinetic parameters o f loganin obtained in the study may be at t ributed to the ef fect of other
consti tuents in the DECOCTION.
Key words: L IUWEI DIHUANG DECOCT ION ( LWDHD); log anin; pha rmacokinetics; HPLC
* LIUWEI DIHU ANG DECOCTION is a Chinese decoction based on a classic recipe wi th the function
o f nourishing yin and tonifying the kidney.
　　六味地黄汤是滋阴补肾的经典名方 ,对人和动
物的免疫功能有显著的调节作用 [1, 2 ]。马钱子素是山
茱萸的有效成分 ,具有明显的抗炎、调节免疫的功
能 [3, 4 ] ,单体马钱子素在小鼠体内的药动学研究已经
报道 [ 5]。本文对小鼠 ig六味地黄汤后马钱子素的药
代动力学进行了研究 ,为探讨中药复方药动学一般
规律提供实验依据。
1　材料
1. 1　药品: 熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、茯苓、丹皮
均购于北京同仁堂药店 ,并由本所植化室鉴定。马钱
子素由本所植化室提供 ,白色粉末 ,纯度 99%。六味
地黄汤由本所中药药理室制备 ,相当于生药 1 g /
m L溶液。
1. 2　仪器及试剂: HP1100高效液相色谱仪 ,包括
HP1100泵 , HP1100紫外检测器 ;美国光谱物理公
司 SP4600积分仪 ;固相萃取 ( SPE) 小柱 ( 1 mL /
100 mg, St rate C18 -E, Phenomenex U SA) ;震荡器
( T1670 Mixer, Thermo lyne) ; LD5-2A型医用离心
机 (北京医用离心机厂 ) ;甲醇 ( HPLC级 ,邯郸四
友生物医学技术有限公司 ) ;双蒸水 ;氯仿、高氯酸、
氢氧化钾均为分析纯。
1. 3　实验动物:昆明种小鼠 ,雄性 , ( 20± 2) g ,由军
事医学科学院实验动物中心提供。
2　实验方法
2. 1　色谱条件: Phenomenex sphereclon ODS-2色
谱柱 ( 150 mm× 4. 6 mm, 5μm, Phenomenex
USA) ; YWG-C18预柱 ;流动相: 甲醇-水 ( 27∶ 73) ;
流速: 0. 8 mL /min;检测波长: 240 nm。
2. 2　血浆样品的制备:取小鼠血浆 0. 2 mL,加入高
氯酸 0. 08 mL ( 1 mo l /L) ,震荡混匀 ,离心 ( 3 000
·817·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2002-03-07基金项目:国家重点基础研究发展规划项目 ( No. G1999054401)作者简介:谢跃生 ( 1971-) ,男 ,江西省兴国县人 ,讲师 ,硕士 , 1994年毕业于华北煤炭医学院临床医学专业 , 1994～ 1999年在华北煤炭医学院生化教研室任教 , 1999～ 2002年在军事医学科学院攻读药理专业研究生 ,研究方向为中药复方药动学。
Tel: ( 010) 66874610　 E-mai: xieysh@ sohu. com
r /min) 10 min,取上清用适量 KOH ( 1 mol /L )调
至中性 ,加入氯仿 2 mL,双蒸水 1 mL,震荡混匀 ,离
心 ( 3 000 r /min) 10 min,取出水相层并全部过
SPE小柱 ,用水 1 mL洗涤 ,甲醇 1 mL洗脱 ,收集
甲醇 ,于油浴 ( 70℃ )挥干 ,残渣用流动相 50μL溶
解 ,进样 20μL分析。
2. 3　给药及采血方法:小鼠禁食过夜 ,随机分组 ,使
每个时间点有 7只动物。按生药 10 g /kg ig,分别于
给药后 0, 0. 083, 0. 167, 0. 25, 0. 5, 1, 1. 5, 2, 3, 4, 5
h 采血 ,置于肝素化的离心管内 ,离心 ( 3 000 r /
min) 10 min,分离出血浆并于 - 20℃ 冻存待测。
3　结果
3. 1　色谱行为及专一性:马钱子素与血浆内源性物
质、六味地黄汤吸收入血的其他成分或代谢产物色
谱峰均达到基线分离 ,马钱子素的保留时间为 9. 32
min,其结果见图 1。
A-空白血浆　 B-马钱子素+ 空白血浆　 C-血样品
图 1　 HPLC图谱
3. 2　血浆样品标准曲线:取空白血浆 0. 2 mL,加入
不同浓度马钱子素溶液 ,使血浆终浓度为 10, 20,
40, 200, 1 000, 2 500, 5 000 ng /mL,按血浆样品处
理方法操作 ,以马钱素子峰面积 (Y )对马钱子素血
浆浓度 (C ) 作图 ,得回归方程: Y = 2 732. 7+
164. 3C , r= 0. 999 5。
3. 3　提取回收率和精密度试验: 配置 200, 1 000,
2 500 ng /mL 3个浓度的马钱子素血浆样品 ,按血
浆样品处理方法操作 ,计算提取回收率、日内及日间
RSD,结果表明上述 3个浓度下提取回收率为
69. 8% ～ 71. 3% ,日内及日间精密度 RSD 均小于
10% ,结果见表 1。
3. 4　小鼠给药后马钱子素的药代动力学结果: 血药
浓度-时间曲线见图 2。用 3P87药代动力学计算机
程序进行处理 ,六味地黄汤中马钱子素在小鼠体内
过程符合单室模型一级吸收 ,药动学参数见表 2。
表 1　马钱子素在血浆测定的回收率、
日内及日间精密度 (n= 5)
加入量
( ng /m L)
回收率
(% )
RSD (% )
日内 日间
　 200 69. 8 5. 3 9. 0
1 000 71. 2 3. 1 7. 9
2 500 71. 3 2. 2 9. 2
图 2　小鼠一次给药后血浆中马钱子素的平均
血药浓度-时间曲线 (n= 7,x± s )
表 2　小鼠 ig六味地黄汤后马钱子素的药代动力学参数
参　数　　 单　位 数　值
AUC (μg /mL)× min 165. 20
T (peak) min 42. 40
Cmax μg /mL 　 1. 60
t 1/2ka min 17. 40
t 1/2ke min 35. 75
K a min- 1 　 0. 04
K e min- 1 　 0. 19
4　讨论
我们采用马钱子素单体血浆样品处理方法 [5 ] ,
能够分离六味地黄汤 ig后小鼠血浆中的马钱子素 ,
但由于复方制剂吸收入血的成分较复杂 ,给药后不
同时间点血中经时成分谱有变化 ,色谱峰较多 ,内标
没有合适的保留时间。采用外标法严格操作 ,其回收
率及准确性能满足实验要求 ,故本实验采用外标法
定量分析。
六味地黄汤中马钱子素小鼠体内过程符合单室
模型一级吸收 ,而单体马钱子素为二室模型一级吸
收 [5 ] ;小鼠 ig六味地黄汤和单体马钱子素后马钱子
素的消除半衰期为 35. 8 min和 29. 0 min,表明六
味地黄汤中马钱子素的消除速度变慢 ;根据文献 [6 ]
Cmax /AUC作为吸收速度指标 ,本实验中六味地黄
汤的 Cmax /AUC 是单体马钱子素的 0. 59倍 ,另
T ( peak)分别为 42. 4 min和 30 min,表明六味地
黄汤中马钱子素的吸收速度也变慢 ;这些结果表明
复方对马钱子素的动力学有影响。 中药复方药动学
的研究应建立在有效成分药动学研究的基础上 ,复
方中药的君臣佐使可明显影响彼此在体内化学成分
的药动学参数 [7 ] ,本文证明复方中马钱子素与单体
·818· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
马钱子素 [5 ]的药动学有差异 ,至于六味地黄汤的配
伍组合对马钱子素的影响 ,我们正在研究中。
参考文献:
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[ J ]. Bioorg Med Ch em , 1998, 6( 5): 605-611.
[ 5]　谢跃生 ,张振清 ,阮金秀 .小鼠血浆中马钱素的高效液相色谱
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[ 6 ]　 Endreyi L, Fri t sch S, Yan W . Cmax /AUC is A clearer mea-
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青蒿酯钠诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的探讨
杨小平 ,张　星
(中山医科大学肿瘤研究所 ,广东 广州　 510016)
摘　要: 目的　研究青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡作用及探讨青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制。 方法　
肝癌细胞 ( BEL-7402) 经药物处理后 ,用荧光显微镜、透射电镜和流式细胞仪分析诱导凋亡作用 ,采用 Western
blo t检测 p53、 p21和 bc1-2。结果　与对照组相比 ,经青蒿酯钠处理后 ,肝癌细胞中 p53、 p21蛋白表达水平无明显
变化 ,而 bc1-2蛋白表达水平降低。 结论　青蒿酯钠可诱导人肝癌细胞 ( BEL-7402)凋亡 ,其凋亡的分子机制是
p53非依赖性的 ,即与 p53、 p21无关 ,而与凋亡调节基因 bc1-2下调有关。
关键词: 青蒿酯钠 ;凋亡 ;基因
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 09 0819 03
Induction of human tumor cell apoptosis by sodium artesunate and its molecular mechanism
YANG Xiao-ping, ZHANG Xing
( Cancer Institute, Sun Yat-sen Univ er sity o f Medical Sciences, Guang zhou 510016, China)
Abstract: Object　 To study the apoptosis induced by sodium artesunate ( SA) in human liv er cancer
cells and i ts molecular mechanism. Methods　 Induction of the apopto sis w as analyzed by f luo rescent mi-
croscope, t ransmission electron microg raph and f low lytometry ba sed on drug treated BEL-7402. Expres-
sions o f p53, p21 and bc1-2 w ere determined by Western blo t. Results　 The expression lev el of p53 and
p21 had no change remarkbly, but the expression lev el of bc1-2 w as reduced compa red to that o f the con-
trol g roup after the human liv er cancer cells w ere treated by SA. Conclusion　 The apopto sis in human liv-
er cancer cells ( BEL-7402) may be induced by SA, the mo lecular mechanism of apopto sis may be p53-inde-
pendent , that i s no relativ e to p53 and p21. Otherwise, i t i s rela tiv e to bc1-2 down-regulation.
Key words: sodium artesunate ( SA) ; apoptosis; gene
　　青蒿酯钠为青蒿素类衍生物 ,是一种新型的抗
疟药物。近年来发现青蒿酯钠有抗肿瘤作用 ,其对小
鼠艾氏腹水癌细胞、人鼻咽癌细胞 ( SUN E-1和
CN E-1)、人宫颈癌细胞 ( HeLa)生长有明显的抑制
作用 [1, 2 ] ,我们已证明青蒿酯钠对人肝癌有体内外抗
肿瘤作用 [3 ]。 本实验旨在从诱导肿瘤细胞凋亡的角
度来探讨青蒿酯钠抗肿瘤作用机制 ,并研究青蒿酯
钠对肝癌细胞中凋亡调控基因 p53、 p21和 Bc1-2
的影响 ,从而探讨青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡的
分子机制。
1　材料和方法
1. 1　药物与细胞系:青蒿酯钠由广西桂林第二制药
厂出品 ,系白色结晶 ,用前以 5% NaHCO3助溶 ,用生
理盐水配成相应浓度。肝癌细胞株 ( BEL-7402) 由
·819·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 9期
收稿日期: 2001-12-08基金项目:广东省自然科学基金资助项目 ( 970087)作者简介:杨小平 ( 1942-) ,女 ,广东人 ,研究员 , 1967年毕业于北京医学院医疗系 ,毕业后至 1979年在北京中国医学科学院抗菌素研究所 ,
1979年至今在中山医科大学肿瘤防治中心 ,研究方向为肿瘤药理。 Tel: ( 020) 87765368-7340　 E-mai: yangxiaoping 88@ hotmai l.
com