全 文 ：RP-HPLC法测定金银花糖浆中绿原酸的含量
喻贵英 1 ,潘宏春 2 ,刘红梅 1 ,郭平牯 1⒇
( 1. 重庆桐君阁药厂 理化检测室 ,重庆　 400066; 2. 重庆桐君阁药厂中药研究所 ,重庆　 400066)
　　金银花糖浆由金银花和忍冬藤煎制而成。 绿原
酸为金银花糖浆中的主要抗菌消炎成分。 标准中仅
对药材进行了定性鉴别 ,而无有效成分的含量测定。
为了有效地控制产品质量 ,本实验参考文献 [ 1～ 3] ,采
用 HPLC法测定该制剂中有效成分绿原酸的含量 ,
方法简便、快速 ,结果满意。
1　仪器与试药
HPLC 1050(美国惠普公司 ) , UV— 2501PC(日
本岛津 ) ,绿原酸对照品 (中国药品生物制品检定
所 ) ,金银花糖浆 (重庆桐君阁药厂提供 )。 试剂除乙
腈为色谱纯外其他均为分析纯。
2　实验部分
2. 1　色谱条件:色谱柱: Kromai l C18柱 ( 5μm, 100
mm× 4. 6 mm ) (惠普公司 ) ;检测波长: 327 nm;流
动相: 乙腈 -0. 4%磷酸水溶液 ( 13∶ 87) ;流速: 1. 0
m L /min;柱温:室温 ;进样量: 10μL。色谱图见图 1。
* -绿原酸
* -chlorog enic acid
图 1　绿原酸对照品 (A)和金银花糖
浆样品 (B)的 HPLC色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatogram of chlorogenic acid
(A) andFlos Lonicerae Syrup (B)
2. 2　对照品溶液的配制:精密称取低温真空干燥至
恒重的绿原酸对照品适量 ,用 50%甲醇溶液定容于
10 mL的容量瓶中 ,配成 0. 566 mg /mL的贮备液。
精密吸取贮备液 1 mL,用 50%甲醇溶液定容于 10
mL容量瓶 ,配成 0. 056 6 mg /m L的对照品溶液。
2. 3　测定波长的选择:取对照品溶液适量 ,在 200～
600 nm波长进行紫外扫描 ,绿原酸在 327 nm波长
处有特征吸收 ,故选择 327 nm作为检测波长 ,光谱
图见图 2。
图 2　绿原酸的紫外光谱图
Fig. 2　 UV spectra of chlorogenic acid
2. 4　线性考察:精密量取上述对照品溶液 ,分别进
样 2, 4, 8, 12, 16μL测定 ,并以峰面积为纵坐标 ,进
样体积为横坐标进行线性回归 ,得回归方程: Y=
14 823. 9X - 2 796. 8, r= 0. 999 8。 结果表明 ,绿原
酸在 0. 113 2～ 0. 905 6 mg与其色谱峰面积积分值
呈良好的线性关系。
2. 5　精密度试验:精密吸取上述对照品溶液 2, 8,
16μL照上述色谱条件 ,各连续重复进样 5次 ,测得
绿原酸峰面积的 RSD分别为 0. 74% , 0. 11% ,
0. 70% (n= 5)。
2. 6　重现性试验:取样品 ,精密量取 5份 ,按“样品
的测定”项下方法测定绿原酸含量 ,计算得其 RSD
为 1. 27% (n= 5)。
2. 7　稳定性试验:分别吸取上述对照品溶液和同一
供试品溶液 ,按照上述色谱条件 , 2 h测定 1次 ,连
续测定 5次。在 8 h内对照品溶液峰面积积分值
RSD为 0. 14% (n= 5) ,供试品溶液峰面积积分值
RSD为 0. 10% (n= 5)。结果表明 8 h内基本一致。
·808· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2003-01-11作者简介:喻贵英 ,女 ,重庆人 ,助理工程师 , 1998年毕业于中国药科大学 ,主要从事中成药质量标准的研究。 Tel: ( 023) 62881640
2. 8　加样回收率试验:精密吸取已测得绿原酸含量
的样品 1 mL,加入 0. 566 mg /mL绿原酸对照品贮
备液 1 mL,按“样品的测定”项下的方法 ,在上述色
谱条件下进行含量测定 ,计算回收率。结果平均回收
率为 97. 96% , RSD为 1. 76% (n= 6)。
2. 9　样品的测定:精密吸取样品 1 mL于 50 mL容
量瓶中 ,用 50%甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 5 min,
滤过 ,弃去初滤液 ,取续滤液 1 mL,离心 10 min,进
样 10μL,用回归方程计算绿原酸含量 ,结果见表 1。
表 1　金银花糖浆中绿原酸的测定结果 (n= 5)
Table 1　 Chlorogenic acid inFlos Lon icerae Syrup (n= 5)
批　号 绿原酸 /( mg· mL- 1 ) RSD /%
010518031 1. 935 1. 05
010519032 2. 017 0. 93
010520033 1. 821 2. 10
010521034 2. 236 1. 74
010522035 2. 124 1. 29
3　讨论
3. 1　绿原酸为含有羧基和邻二酚羟基的极性有机
酸 ,易溶于水和甲醇。实验中分别以甲醇和水为溶
剂 ,结果显示 ,用水做溶剂 ,对绿原酸峰有影响 ;用甲
醇做溶剂时 ,绿原酸不稳定 ;而采用 50%甲醇水溶
液效果较佳。
3. 2　曾分别选用甲醇 -水-冰醋酸、甲醇 -10%磷酸
氢二钠溶液 ( pH2. 7)、乙腈-0. 4%磷酸溶液。结果以
乙腈 -0. 4%磷酸溶液为最佳 ,绿原酸与相邻峰基线
分离较好。
3. 3　含量测定结果表明 ,各批样品中绿原酸含量有
一定差异 ,作为质量控制绿原酸含量应不低于 1. 20
mg /mL。但工艺过程中也应该严格控制绿原酸的含
量。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
[2 ]　 Yu S L, Zhang L, Sun L. Research prog res s of Flos Lonicerae
[ J ]. Lishizhen Med Mater Med Res (时珍国医国药 ) , 2002,
13( 8): 498-500.
[3 ]　 Guo Y Z, Liao C Z, Zhai X F, et al . Study on quality s tandard
for Jinyinhua Recipe Granule [ J ]. Ch in Trad it Pat Med (中成
药 ) , 2002, 24( 6): 423-425.
HPLC法测定金宝片中橙皮苷的含量
戚宝婵⒇
(辽宁省药品检验所 ,辽宁 沈阳　 110023)
　　金宝片由陈皮、太子参、山药等 10味中药组成 ,
为中药保健品 ,具有理气健脾、燥湿化痰、止咳平喘
之功效。 为了更好地控制产品质量 ,本实验采用
HPLC法测定金宝片中橙皮苷的含量。 经方法学考
察 ,数据可靠 ,方法可行 ,可用于控制产品质量。
1　仪器与试药
Waters高效液相色谱仪 , Waters 515泵 , Wa-
ters 2487检测器 ,大连依特利色谱工作站。 橙皮苷
对照品购自中国药品生物制品检定所 ,批号为
0721-200010。金宝片由辽宁天龙药业有限公司提
供 ,批号为 000701。
2　方法与结果
2. 1　供试品溶液的制备:取本品 10片 ,研细 ,取 3
g ,精密称定 ,加水 10 mL溶解 ,加乙醚振摇、超声提
取 2次 ,每次加乙醚 20 mL,超声 15 min,放置分层 ,
弃去乙醚液 ,水层挥干乙醚 ,加醋酸乙酯振摇、超声
提取 4次 ,每次加醋酸乙酯 20 mL,超声 15 min,放
置分层 ,合并醋酸乙酯液 ,蒸干 ,残渣加甲酰胺溶解 ,
并转移至 10 mL量瓶中 ,加甲酰胺至刻度 ,摇匀 ,
即得。
2. 2　色谱条件:色谱柱为迪马 C18柱 ( 20 mm× 4. 6
mm , 5μm) ,流动相为甲醇 -水 ( 45∶ 55) ,检测波长
为 283 nm,进样量为 10μL。在此条件下橙皮苷与其
他成分达到基线分离。
2. 3　线性关系考察: 取橙皮苷对照品 ,加甲酰胺溶
解制成 0. 100 3 mg /m L的溶液 ,作为对照品溶液。
精密吸取该溶液 3, 6, 9, 12, 15μL注入液相色谱仪 ,
按上述色谱条件测定。以进样量为横坐标 ,峰面积值
为纵坐标绘制标准曲线 ,得回归方程为 A =
30 868. 24C+ 76. 55, r= 0. 999 6。结果表明进样量
在 0. 300 9～ 1. 504 5μg与峰面积呈良好的线性关
系。 标准曲线基本通过原点 ,采用一点法测定。
·809·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2002-12-23作者简介:戚宝婵 ( 1963— ) ,女 ,山东济宁人 ,副主任药师 , 1986年毕业于沈阳药学院 ,从事中药材、中成药检验及质量标准研究工作 ,发表论文 10余篇。 Tel: ( 024) 25425645