全 文 ：组相比均有明显减慢心肌缺血时心率的作用 ;经两
两比较 q检验 ,党参组和黄芪组差异显著 ,黄芪组
作用强于党参组。但各组动物给药后的 S-T段位移
经方差分析差异无显著性。
4　讨论
　　据报道黄芪注射液可减少血清肌酸磷酸激酶
MB同功酶 ( CPK-MB)含量 ,并使心肌缺血大鼠心
电图 J点位移明显减小 ,对心肌损伤起保护作用 [5 ]。
另报道黄芪中的 3种提取物总皂苷、总黄酮和甲苷
均能改善心肌缺血-再灌注时心功能的损伤 ,总皂苷
和甲苷主要通过增加心肌环腺苷酸 ( cAMP)含量、
抑制心肌细胞膜 Na+ , K+ -ATP酶活性发挥正性肌
力作用 ,而总黄酮则主要通过抑制自由基的生成和
清除氧自由基发挥正性肌力作用 [6 ]。
文献报道党参有显著的抗心肌缺血作用 [ 7] ,但
对 Pit引起的心律失常并无影响 ,其机制可能与解
除冠脉痉挛 ,改善心肌代谢过程 ,降低心肌耗氧或使
心肌对低氧的耐受性增强有关 ,表明党参是一种实
验有效的抗心肌缺血药物。 而党参中各成分对心肌
缺血的改善作用未见报道 ,有待于进一步研究。
本实验表明 ,黄芪和党参均可对 Pi t所致实验
性心肌缺血起明显保护作用。并且对于减轻 T波抬
高作用党参强于黄芪 ,而对于减慢心率的作用黄芪
要强于党参 ,这可能是由于二者所含有效成分不同
而对心肌缺血保护作用机制有所不同。 本实验中党
参和黄芪均为水提取物 ,党参中有效成分主要为皂
苷 ,黄芪中有效成分主要为皂苷和黄酮。由此 ,推测
党参皂苷抗心肌缺血损伤作用强于黄芪皂苷。
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银杏提取物对细胞毒素 MPP+ 致小脑颗粒细胞损伤的保护作用
翟所迪 1 ,姜大为 1 ,蒲小平 2
( 1. 北京大学第三医院 药剂科 ,北京　 100083; 2. 北京大学药学院 分子与细胞药理学系 ,北京　 100083)
摘　要: 目的　探讨银杏提取物 (Ginkgo biloba L. ex tr act, GBE) 对 1-甲基 -4苯基吡啶离子 ( 1-methyl-4-
ph eny lpy ridiniumion, M PP+ )所致大鼠小脑颗粒细胞损伤的保护作用。 方法　用 GBE预先孵育大鼠小脑颗粒细
胞 ,然后用 MPP+ 处理细胞 ,分别用 M TT法和神经丝蛋白的免疫组织化学方法进行检测。 结果　 50μmol / L的
M PP+ 使小脑颗粒细胞损伤 , 20μg /m L的 GBE具有保护作用。结论　 GBE对神经毒素 M PP+ 致细胞损伤有保护
作用 ,提示 GBE可能具有抗帕金森病 ( Pa rkinson s Disease, PD) 的潜在功效。
关键词: 银杏提取物 ; 1-甲基 -4-苯基吡啶离子 ( M PP+ ) ; 小脑颗粒细胞
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 11 1020 03
Protective effect ofGinkgo biloba extract on cerebellar
granule nerurons injury induced by MPP
+
ZHAI Suo-di1 , JIANG Da-w ei1 , PU Xiao-ping2
( 1. Depa rtment o f Pharmacy, Third Hospita l o f Peking Univ e rsity , Beijing 100083, China; 2. Depa rtment o f Mo lecula r
·1020· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-02-26作者简介: 翟所迪 ( 1956— ) ,男 ,北京大学第三医院药剂科副主任药师 , 1992年赴日本北海道大学进修 ,主要从事新药研发、医院药学研究。 Tel: ( 010)
62017691-2737　 E-mail: zhaisuodi@ 263. net
* 通讯作者　
and Cellula r Pha rmaco lo gy , Schoo l o f Pharmaceutical Sciences, Peking Univ er sity , Beijing 100083, China)
Key words: Ginkgo biloba L. ex t ract; 1-methy l-4-pheny lpy ridiniumion ( M PP+ ) ; cerebel la r g ranule
neurons ( CGNs)
　　银杏叶含有多种药用活性成分 ,包括银杏内酯
( ginkgolides) 和黄酮类 ( f lav onoides ) [ 1] ,以槲皮
素、山柰素和水杨梅素等为主 ,但由于银杏内酯成分
复杂 ,单体成本昂贵 ,故银杏叶提取复合成分的药理
作用研究和分析更为重要。银杏叶提取物 (Ginkgo
biloba L. ex t ract, GBE)的主要作用为调节血管张
力 ,改善血液流变、改善微循环 ,抗自由基、抑制脂质
过氧化反应 ;选择性拮抗血小板活化因子 ( PAF)
引起的血小板聚集和血栓形成 ,提高红细胞超氧化
物歧化酶 ( SOD)的活性 ,防止血管内皮细胞损伤。
国外研究表明 GBE可改善认知功能缺损 ,促进学
习和记忆 ,使记忆信息的过程速度加快 [ 2]。 目前
GBE主要用于阿尔茨海默病、动脉粥样硬化症、脑
血管循环障碍等疾病的治疗。
帕金森病 ( Parkinson s disease, PD) ,目前认
为是锥体外系功能障碍引起的一种慢性中枢神经系
统疾病。 用神经毒素 1-甲基 -4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢
吡啶 ( 1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tet rahydropy-
ridinium, M PTP) 复制的 PD动物模型常用于抗
PD药物的研发。 MPTP的脑中代谢产物 1-甲基 -4-
苯基吡啶离子 ( M PP+ )可特异性地导致多巴胺能
神经元或小脑颗粒细胞 ( cerebella r g ranule neu-
rons, CGNs) 损伤。 本实验采用 MPP+ 诱导产生
PD样的细胞模型 ,探讨 GBE对 M PP+ 造成的细胞
损伤是否具有保护作用 ,为开发其新用途提供依据。
1　材料
1. 1　动物: 7～ 8 d龄 Wista r大鼠 ,北京大学医学
部实验动物科学部提供。
1. 2　试剂: M EM 培养基 ( Gibco ) ,牛胰蛋白酶
( Dfico ) ,牛胰蛋白酶抑制剂、 RNA酶 (中国科学院
上海生物化学研究所东风生物公司 ) ,蛋白酶 K
( M erck) ,多聚赖氨酸 (相对分子质量大于 3× 104 ,
Sigma) , M TT和 M PP+ ( Sigma ) ,其余试剂均为国
产分析纯。神经丝蛋白 (广谱 )单克隆抗体 ,生物素
标记的山羊抗鼠 IgG,辣根酶标记链酶卵蛋白 ( SP-
9000通用型 )试剂盒 , DAB Kit均为 Santa Cruz公
司产品。 GBE取自银杏叶胶囊 (商品名:百路达 ,上
海信谊制药厂 ,批号 D000901,含总黄酮醇苷 9. 6
mg /粒 ,实验时药物浓度换算为总黄酮醇苷的量 )。
1. 3　仪器: CO2培养箱 (美国 Precision Scienti fic) ,
JJT— 900型超净工作台 (北京半导体设备一厂 ) ,
倒置显微镜 (重庆光学仪器厂 ) ,高速低温离心机
(美国 So rv all)。
2　方法
2. 1　小脑颗粒细胞的培养与药物处理 [3 ]: 7～ 8 d龄
Wistar大鼠 ,常规消毒后 ,无菌分离小脑 ,剔除软脑
膜 ,切成 1 mm3的小块 ,加入质量体积分数为 0. 1%
Trypsin的 Krebs-Ringer缓冲液 ( K RB) , 37℃ 消
化约 10 min,其间振荡数次 ,再加入含 83 mg /L胰
蛋白酶抑制剂的 KRB缓冲液 (消化终止液 ) ,终止
消化 ,经 200目不锈钢网滤过 ,离心 ( 500× g , 10
min)后将细胞再次悬浮于上述消化终止液中。用吸
管轻轻吹打 ,沉降 5 min后 ,吸取上清液 ,沉淀中再
加入相同溶液 ,重复上述操作 ,合并上清液 , 1 000×
g离心 5 min,沉淀悬浮于体积分数为 10% 小牛血
清 M EM培养液中 ,细胞计数后 , 2× 109 /L接种于
预先经 5 mg /L多聚赖氨酸铺板的 96孔培养板
( M TT测定 )或 12孔板 (免疫组化 )。置于 37℃
含 5% CO2培养箱中培养 , 24 h后更换 10μmo l /L
阿糖胞苷的培养液 ,以抑制非神经细胞的增殖 ,分为
空白对照组、模型组和药物组。培养第 5天药物组
分别加入 10, 20, 40μg /mL GBE,培养第 6天 ,模型
组和药物组分别加 50μmol /L M PP+ 溶液 ,空白对
照组加等体积的培养基 , 37℃ , 5% CO2培养箱中继
续培养 ,观察加 M PP+ 溶液后 12, 24, 36 h不同组别
细胞生长状况 ,并进行以下检测。
2. 2　 MT T的测定: 以上各组于 12, 24, 36 h从培养
箱中取出 96孔板 ,向每孔中加入 5 mg /mL 的
M TT 20μL (终浓度为 0. 5 mg /mL) ,反应 4 h后 ,
吸去培养液 ,向每孔中加入 200μL DMSO,轻轻吹
打 ,使蓝色颗粒溶解 ,采用全自动酶标仪在 570 nm
波长处测其吸光度 ( A ) ,实验重复 3次。
细胞存活率= 实验组 A值 /对照组 A值× 100%
2. 3　免疫组织化学染色: 按 SP法进行免疫组织化
学染色 ,按 2. 1项下方法 ,将经 MPP+ 处理后细胞
用体积分数为 4% 多聚甲醛室温下固定 , 0. 3%
H2O2蒸馏水阻断内源性过氧化物酶 ,加山羊血清封
闭 ,洗涤后加稀释 200倍的神经丝蛋白单克隆抗
体 ,洗涤 ,加稀释 200倍的生物素标记的山羊抗鼠
IgG,进一步洗涤 ,加稀释 100倍的辣根酶标记链酶
·1021·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
卵蛋白 ( SP)试剂 ,洗涤后 DAB溶液染色 ,显微镜
下观察 ,并照相 ,染色过程中严格设立阴性对照。
2. 4　统计学处理:数据以 x± s表示 ,组间比较进行
t检验。
3　结果
3. 1　 MT T法测定细胞存活率: 结果表明 50μmo l /
L M PP
+ 作用 12 h后 ,小脑颗粒细胞存活率降低 ,
24 h后更加明显 ,细胞存活率与对照组比显著下
降 , 36 h后最明显 ,和对照组相比 A值可下降 50%
以上。 20μg /mL GBE可明显提高细胞存活率 ,在
12, 24, 36 h均有作用 ,差异显著 ( P < 0. 001) , GBE
提高细胞存活的作用存在剂量依赖关系 ,见表 1。
表 1　 GBE对 MPP+ 诱发 CGNs死亡的
保护作用 ( x± s, n= 3)
Table 1　 Protect ive ef fect of GBE on CGNs death
induced by MPP+ (x± s , n= 3)
组　别 剂　量
/(μg· mL- 1 )
加入 MPP+ 后不同时间 A值
12 h　 24 h　 36 h　
正常 - 0. 929± 0. 018 1. 011± 0. 003 0. 554± 0. 009
M PP+ 模型 - 0. 998± 0. 004 0. 733± 0. 019 0. 241± 0. 011
GBE 10 1. 047± 0. 017 1. 204± 0. 050* * * 0. 536± 0. 018* * *
20 1. 359± 0. 198* * * 1. 433± 0. 016* * * 0. 410± 0. 027* *
40 1. 418± 0. 026* * * 1. 035± 0. 015* * * 0. 398± 0. 007* *
　　与 M PP+ 模型组比较: * * P < 0. 01　* * * P < 0. 001
　　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001 vs M PP+ model g rou p
3. 2　神经丝蛋白免疫组化染色:神经丝蛋白可用于
标记神经元 ,在中枢和外周神经系统的神经元细胞
核周围、特别是在小脑神经元的胞浆和轴突有高表
达。本实验通过免疫组化方法 ,标记小脑颗粒细胞的
胞体和轴突 ,从而准确观察药物对 MPP+致细胞损
伤的保护作用。 正常对照组小脑颗粒细胞的胞体呈
杏核状、且突起交织形成网状 , M PP+组小脑颗粒细
胞轴突消失 ,胞体变小 ,胞浆浓缩 ,死细胞碎片增多 ,
而 GBE组小脑颗粒细胞生长完好 ,突起长且交织
成网状 (图略 )。
4　讨论
　　本研究表明 , GBE能够明显的保护 MPP+造成
细胞损伤 ,提高细胞的存活率 , M PT P或 MPP+ 造
成细胞损伤的机制是氧化应激、线粒体功能障碍及
诱导细胞凋亡 [4～ 6 ]。 GBE具有抗自由基、抑制脂质
过氧化反应的作用 , GBE是通过抗细胞氧化应激还
是其他机制保护 M PP+ 造成细胞损伤还有待进一
步研究。 本实验结果提示 , GBE可能具有抗帕金森
病的潜在功效。 其药效学研究还在进一步探讨中。
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紫金龙总生物碱的镇痛作用及其机制初探
吴　勐 ,王银叶 ,艾铁民
(北京大学 医学部 ,北京　 100083)
摘　要: 目的　研究紫金龙总生物碱的镇痛作用及其机制。方法　采用热板法、扭体法研究紫金龙总生物碱的镇痛
作用 ,采用福尔马林实验、纳洛酮拮抗实验和竖尾实验研究其镇痛机制。结果　紫金龙总生物碱可以明显抑制醋酸
导致的小鼠扭体反应 ,但对热刺激所致小鼠疼痛无明显镇痛作用。 紫金龙总生物碱对福尔马林所致小鼠两相疼痛
均有明显镇痛作用。纳洛酮未能拮抗其镇痛作用且紫金龙总生物碱给药组动物均未出现 S形竖尾反应。结论　紫
金龙总生物碱既具有外周镇痛作用 ,又具有中枢镇痛作用 ,但其作用不同于吗啡类药物 ,也不同于非甾体抗炎药。
提示其可能作用于阿片受体以外的疼痛相关受体。
关键词: 紫金龙总生物碱 ; 镇痛 ; 纳洛酮
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 11 1022 04
·1022· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 11期 2003年 11月
收稿日期: 2003-01-27作者简介: 吴　勐 ( 1978— ) ,女 (回族 ) ,北京人 ,北京大学医学部天然药物学系硕士研究生。
Tel: ( 010) 85773895　 E-mail: almond715@ sina. com