全 文 ：结果样品杂质峰对喜树碱峰有干扰。经改用甲醇-水
( 55∶ 45)、流速为 0. 8 mL /min后 ,样品的分离效果
较好。 经对 3批样品 ( 000809、 011008、 011012)进行
试验 ,喜树碱峰与相邻杂质峰的分离度分别为 1. 9,
1. 8和 2. 4,均大于 1. 5,且峰形对称尖锐。 说明甲
醇 -水 ( 55∶ 45)作为流动相适用于该药喜树碱的测
定。以 2. 2. 1项下色谱条件对 3批样品 (批号同上 )
进行测定 ,结果理论塔板数按喜树碱峰计算 ,分别为
3 242, 3 227, 4 100。考虑到用不同品牌和规格的色
谱柱测定可能有偏差 ,故暂定理论塔板数按喜树碱
峰计算应不低于 2 000。
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大孔树脂富集三裂叶蟛蜞菊倍半萜内酯 A和 B的研究
黄雪松 1 ,黄荣春 2
( 1. 暨南大学理学院 食品科学与工程系 ,广东 广州　 510632; 2. 香港中文大学 生物系 ,香港 沙田 )
摘　要:目的　大量富集三裂叶蟛蜞菊倍半萜内酯 A, B( WT A, W TB)。 方法　采用气相色谱法测定 W TA和
WTB,并以 W TA和 W TB的含量、洗脱率、精制度为考察指标 ,研究 D101大孔树脂吸附 W TA和 WTB的工艺条件
及参数。结果　通过大孔树脂吸附后 , W TA和 W TB的洗脱率达 90% , 50%乙醇洗脱部分中 W TA和 W TB的含量
为总固物的 4. 01% ～ 4. 09%。 结论　可以采用大孔树脂富集 W TA和 WTB。
关键词: 三裂叶蟛蜞菊 ;三裂叶蟛蜞菊倍半萜内酯 A, B;大孔吸附树脂 ;气相色谱
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 08 0701 04
Studies on enriched yield of wedeliatrilolactone A and B
inWedelia trilobata by macroporous resin
HUANG Xue-song
1 , V IN CEN T E. C. Ooi
2
( 1. Depar tment of Food Science and Engineering , Jinan Univ ersity , Guang zh ou 510632, China;
2. Depar tment of Bio lo gy , Chinese Univ ersity of Hong Kong , Shatin, China )
Abstract: Object　 To enrich the yield o f w edeliat rilolactone A and B (W TA and W TB) f rom Wedelia
trilobata ( L. ) Hi tchc. Methods　W TA and W TB were determined by gas chroma tog raphy and thei r elut-
ing ra tio and puri ties were analysed by determining thei r contents in dif ferent f ractions eluted f rom D101
macropo rous resin. Results　 The eluting ra tio of WT A and W TB was increased up to 90% and thei r con-
tents w ere 4. 01%～ 4. 09% in 50% alcoho l f raction. Conclusion　W TA and W TB can be sepa ra ted by
D101 macropo rous resin.
Key words: Wedelia trilobata ( L. ) Hi tchc. ; w edeliat ri lolactone A and B ( WTA and WTB) ; macrop-
o rous resisn; GC
　　三裂叶蟛蜞菊为菊科植物三裂叶蟛蜞菊
Wedelia trilobata ( L. ) Hi tchc.的干燥地上部分 ,在
香港、深圳、广州等地广泛用作花园、路边、池塘等地
的观赏植物。除叶子三裂外 ,其根、茎、花等植物学特
征与我国民间常用的蟛蜞菊 W . chinensis ( Osb. )
M err.类似。因此 ,当地常将其视为蟛蜞菊使用。文
献报道三裂叶蟛蜞菊中含有倍半萜内酯 [1, 2 ]。倍半萜
内酯类物质具有抗肿瘤、细胞毒、刺激组织胺释放、
·701·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-09-29作者简介:黄雪松 ( 1957— ) ,男 ,山东汶上人 ,教授 ,博士 ,曾两次赴香港中文大学生物系研修 ,主要从事食品化学、食品功能因子及食品加工工艺方面的研究。
Tel: ( 020) 85226630-6635　 E-mai l: xsh uang@ sdau. edu. cn
抑制植物生长和抑制脱发等多种生物活性。三裂叶
蟛蜞菊倍半萜内酯的提取、分离、富集、纯化等鲜有
报道。 作者通过硅胶柱色谱等方法获得了 5个倍半
萜内酯的晶体 ,其中的两个单晶结构完整 ,利用 X
衍射技术分析证实为 C5差向异构三裂叶蟛蜞菊倍
半萜内酯 A, B(W TA与 W TB) (图 1) ,并证实其具
有较好的体内、体外抗肿瘤作用 [3 ]。但为了满足更大
范围研究的需要 ,有必要探索大量提取蟛蜞菊倍半
萜内酯的工艺。 本实验旨在利用 D101型大孔树脂研
究富集、纯化 WT A与 WTB的工艺条件与参数 ,为
其大量提取及建立工业化生产的质量控制体系提供
必要的依据。
图 1　 WTA与 WTB的分子结构
Fig. 1　Molecular structure of WTA and WTB
1　仪器、材料和试剂
HP6890气相色谱仪 , Bǜ CHI Ro tavapo r R-200
旋转蒸发仪 , Beckman J2-M I离心机。
所用药材经香港中文大学胡秀英教授鉴定 ,系
菊科植物蟛蜞菊属三裂叶蟛蜞菊 W . trilobata的全
草或花。 D101型大孔吸附树脂 (天津制胶厂 ) ,其他试
剂均为 AR级。
倍半萜内酯对照品系作者在香港中文大学生物
系天然产物及其药理实验室研究期间经分离纯化而
精制的 WT A与 WTB(纯度分别为 95%与 93% ) ,
并经香港中文大学化学系采用 X衍射技术鉴定。
2　方法与结果
2. 1　W TA与 WTB的 GC测定
2. 1. 1　溶液制备: 利用 WT A与 WTB对照品对照
定性 ,以 1 mg /m L阿魏酸为内标。吸取 60μL内标
液 ,加入到 180μL样品液中 ,混匀后自动进样测定。
2. 1. 2　气相色谱条件: HP-5毛细管柱 ( 32 mm×
0. 32 mm, 0. 25μm) ,柱温: 初温 60℃ ,以 25℃ /
min升至 215℃并保温 10 min后 ,再以 30℃ /min
升温至 270℃并保温 15 min,共记录 30 min。 然后
冲洗 10 min后 ,再进行下一次自动进样。进样量: 2
μL,载气: 氩气 ,流速: 2 mL /min,氢焰检测器 ,进样
器和检测器温度均为 250℃。 色谱数据处理采用
GC Chemstation Rev . A. 06. 03 [509] integ rator。
WT A、 WTB和阿魏酸的保留时间分别为 24. 8,
21. 5, 6. 2 min。结果见图 1。
1-内标物阿魏酸　 2-W TB　 3-W TA
1-feru lic acid internal s tandard　 2-WTB　 3-WT A
图 2　WTA和 WTB的 GC图谱
Fig. 2　 GC chromatograms of WTA and WTB
2. 2　原料中 W TA与 WTB的含量: 称取 1. 000 g
冻干、粉碎的三裂叶蟛蜞菊全草或干燥花的粉 ( 60
目 ,由香港中文大学校园采取 ,含水量为 85% ～
87% ) ,以 70%乙醇回流提取 1 h,提取液于冰箱中
放置 24 h后 ,过滤、浓缩 ,并用甲醇定容至 50 mL
( 0. 02 g干生药 /mL)。按照上述 GC条件测定 W TA
和 WTB的含量 ,结果见表 1。
　　表 1　原料中 WTA与 WTB的含量 (n= 3)μg· g- 1
Table 1　WTA and WTB in raw materials (n= 3) μg· g- 1
样品 W TA W TB W TA+ W TB WT A /W TB
全草 238 156 394 1. 52
花　 233 171 404 1. 36
　　由表 1可以看出: 三裂叶蟛蜞菊全草和花中
WT A的含量均高于 WTB的含量 ,且全草中 W TA
的含量更高些。 这种含量差异可能与 W TA的结构
比 WTB的结构更稳定有关。
2. 3　大孔树脂富集 W TA和 WTB条件的优选
2. 3. 1　上柱样品的制备:称取一定量新鲜三裂叶蟛
蜞菊 ,沸水煎煮两次 ,每次 1 h。合并水煎液 , 60℃下
减压浓缩至原体积的 1 /10,用 95%工业乙醇调整乙
醇浓度至 80% ,在 4℃ , 12 000 r /min ( 22 095 g )条
件下离心 30 min,收集上清液 ,减压浓缩至干 ,称
重 ,并用水调整到含生药 0. 2 g /m L,用作大孔树脂
分离上柱样品。
2. 3. 2　大孔吸附树脂的预处理 [5 ]:以甲醇湿法装柱
( 20 mm× 90 mm ,树脂干重 5. 00 g)。继而用甲醇洗
脱 ,不时检测流出的甲醇。当流出的甲醇与水混合不
呈白色混浊时即可 ,然后用大量蒸馏水洗至无醇味。
2. 3. 3　不同浓度乙醇洗脱液对 WT A和 W TB的
洗脱能力:吸取三裂叶蟛蜞菊上柱液 10 mL上柱 ,
依次用蒸馏水 400 mL, 25%乙醇、 50%乙醇、 70%乙
·702· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
醇各 200 mL梯度洗脱 ,洗脱液流速为 1. 5 mL /
min。蒸馏水洗脱液先收集 100 mL 2份 ,再收集 500
m L 4份 ; 25%乙醇、 50%乙醇、 70%乙醇洗脱液分别
收集 50 mL 4份。每份均浓缩至干 ,并用甲醇定容至
2. 00 mL后 ,测定 W TA与 W TB的含量。以容量瓶
编号和 WTA与 WTB总含量为坐标绘制洗脱曲
线 ,结果见图 3。
A-WTB　 B-WT A
图 3　WTA和 WTB在 D101大孔吸附树脂上的流出曲线
Fig. 3　 Elution curve of WTA and WTB
from D101 macroporous resin
　　由图 3可见 , W TA与 WTB主要集中在 25%
和 50%乙醇洗脱液中 ,占全部醇洗脱液量的 97% ,
其中 , 25%乙醇洗脱部分占总洗脱量的 11. 37% ,
50%乙醇洗脱部分占总洗脱量的 85. 04% (表 2)。而
且 50%乙醇洗脱的解吸速度比 25%乙醇快。综合考
虑纯度、洗脱率、洗脱液等方面的影响 ,确定大量提
取时的洗脱条件为:先用 10%乙醇洗去大量的水溶
性杂质和大部分强极性物质 ,再用 50%乙醇洗脱 ,
收集 50%乙醇洗脱部分。
表 2　不同洗脱部分中 WTA与 WTB的含量比较 mg　　
Table 2　Comparison of WTA and WTB
among diff erent f ractions mg　　
　洗脱
　部分 WTA WTB
W TA
+
W TB
W TA /
W TB
W TA+ WTB
占总洗脱固体
质量分数 /%
WTA+ W TB
占总洗脱量的
质量分数 /%
25%乙醇 4. 90 14. 60 19. 56 0. 033 　0. 15 　 11. 37
50%乙醇 61. 10 47. 67 108. 77 1. 280 4. 20 85. 04
75%乙醇 2. 32 1. 56 3. 88 1. 490 25. 00 3. 04
总计　　 68. 32 63. 89 132. 14 1. 070
　　表 2还显示:在 25%乙醇洗脱液中 , WTB的洗
脱量大于 WT A,而在 50%与 70%乙醇洗脱液中 ,
W TA的洗脱量大于 WTB。 这种差异显然与 WT A
和 W TB的分子结构及其与树脂结合能力有关。其
有关机制有待进一步研究。
　　由表 2还可以看出: 各洗脱液中 ,不仅 W TA+
W TB的含量有差异 ,而且各洗脱部分的纯度也有
差异。 70%乙醇洗脱液中 , W TA+ W TB的量占总
洗脱固体物的 25% ,但产品总得率比较低 ,仅为总
洗脱量的 3. 04% ,且乙醇用量比较高。而 50%乙醇
洗脱液中 , WT A+ W TB量占总洗脱固体物的
4. 2% ,但占总洗脱量的 85% 。因此 ,大量提取 W TA
和 WTB,宜选用 50%乙醇作为洗脱液。但是 ,若为
获得少量的、高纯度的 WT A和 WTB,则宜收集
70%乙醇洗脱部分。 作者就是从该部分获得了
WT A和 W TB的结晶。
2. 3. 3　 D101大孔树脂对 WT A+ W TB的吸附容量:
吸取三裂叶蟛蜞菊样品液 50 mL,缓慢上柱约 1 h,
至流出液有内酯反应 ,停止上柱 ,并将过柱流出液重
吸附 1次 ,收集每份 50 mL,流速 1. 5 mL /min,平行
3份。 每份均浓缩至干 ,并用甲醇定容至 5. 00 mL,
GC测定 W TA与 WTB的含量 ,计算树脂的吸附容
量。结果 D101大孔吸附树脂对 W TA和 WTB的吸附
容量为 34. 9 mg /g。
2. 3. 4　洗脱液的用量: 吸取三裂叶蟛蜞菊样品液
45 mL 3份上柱 ,分别采用 10%乙醇 400(条件 1) ,
300(条件 2) , 200 mL(条件 3) ,冲洗后 ,再分别用
50%乙醇 400 mL,依次洗脱 ,分段收集 ,每段 100
mL测定 WT A和 W TB含量。取 50%乙醇洗脱液
50 mL减压浓缩至恒重 ,测定固体质量 ,并用甲醇定
容至 5. 00 mL,测定 WT A与 W TB含量 (表 3)。
表 3　不同洗脱条件对 WTA+ WTB洗脱率的影响
Table 3　 Ef fects of elucidat ing condition on eluting
capacity of WTA+ WTB
洗脱剂
条件 1
洗脱
量 /mg
洗脱
率 /%
条件 2
洗脱
量 / mg
洗脱
率 /%
条件 3
洗脱
量 /mg
洗脱
率 /%
10%乙醇 　 5. 35 　 7. 06 　 3. 98 　5. 36 　 4. 60 　 6. 18
100 mL 5. 02 6. 80 4. 01 5. 40 4. 33 5. 82
50%乙醇 100 mL 59. 02 80. 39 62. 30 83. 86 61. 30 82. 90
100 mL 1. 00 1. 36 1. 11 1. 49 1. 60 2. 15
100 mL 0. 47 0. 60 0. 66 0. 51 0. 38 0. 51
总固物 /mg 1. 75 1. 76 1. 75
总固物中 WTA+
W TB含量 /% 4. 08 4. 09 4. 01
　　表 3结果表明: 3种洗脱条件所得总固体和
WT A与 W TB含量差异无显著性 ,其内酯含量均大
于 4%。洗脱条件 3的洗脱率为 6. 18% ,与洗脱条件
1的洗脱率 7. 06%相近 ,即基本除去了强极性杂质 ,
故可以确定洗去杂质时 ,用 10%乙醇 200 mL达到
这一目的。 另外 , 50%乙醇前 200 mL的洗脱率近
90% ,而后 200 mL洗脱率约为 20%。 因此 ,从节省
溶剂、降低生产成本等方面考虑 ,可以只收集前 200
mL 50%乙醇洗脱部分。如果将本实验结果放大到
·703·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
生产上 ,可以确定解吸洗脱液 ,即 50%乙醇用量为
200 mL,折合每克干树脂约为 40 mL。
3　讨论
　　三裂叶蟛蜞菊所含化学成分复杂 ,有内酯、黄酮
等。倍半萜内酯就有十多种。大都是γ-亚甲基内酯
同系物 ,其成环的数量及侧链的长短不同 ,其分离、
测定也比较困难 ,尤其是在目前对照品难以获得情
况下 ,分离、纯化工作的难度就更大。 本实验通过
GC行为的峰强度和保留时间定性 ,以阿魏酸为内
标测定药材中样品的 W TA和 WTB含量 ,方法精
确、可靠 ,唯操作较为烦琐。
大孔树脂吸附法适于从三裂叶蟛蜞菊原料中分
离、富集 WT A和 W TB。而且使用 D101型大孔树脂
具有吸附快 ,解吸率高、吸附容量大、洗脱率高等特
点 ,在分离、富集 WT A和 W TB方面有工业应用、
推广价值。但因其原料中含量低 ,所得产品的纯度仅
稍高于 4% ,更高纯度的产品还需其他的分离、纯化
方法。 这方面的工作有待进一步研究。
国内外许多文献报道了蟛蜞菊 W . chinesis的
活性成分为蟛蜞菊内酯 (w edelolactone) ,大、小鼠体
内外实验证实其降低四氯化碳、半乳糖、毒伞素
( phalloidin)诱导的肝损伤作用 ,具有抗肝毒素、抗
炎症等生理活性 ,已通过化学方法合成了该天然产
物 ,并证实其含量随季节而变化 [6～ 10 ] ,作者在 GC-
M S分析中检测到该成分存在于三裂叶蟛蜞菊中 ,但
根据活性跟踪测定 ,该成分很少或没有抗肿瘤活性。
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蒙成药高尤-13中多糖的研究
赵玉英 ,赵玉琴 ,朴贵金 ,孙占才
(内蒙古民族大学化学学院 ,内蒙古 通辽　 028043)
　　多糖几乎存在于所有生物体中 ,具有能量储存、
防御功能、抗肿瘤作用、免疫促进活性等多方面的生
物功能 ,所以近年来多糖成为天然药物研究的热
点 [1, 2 ]。 高尤-13为丸剂 (水丸 ) ,由槟榔、肉豆蔻、沉
香、当归、木香、草乌 (制 )、筚拨、紫硇砂、葶苈子、丁
香、广枣、干姜、胡椒等组成 ,调节“赫依” ,安神止痛 ,
用于心悸 ,失眠 ,精神失常 ,游走刺痛等症 [3 ]。本实验
在研究广枣多糖组分 [4 ]的基础上 ,研究了高尤 -13水
溶性多糖组成和含量。关于高尤 -13化学组分的研
究尚未见报道。
1　仪器及药品
HP5890气相色谱仪 , 721型分光光度计 (上
海 )。 高尤 -13由内蒙古蒙药制药厂提供 ,批号为
990102。木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、鼠李
·704· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-10-25基金项目:内蒙古自然科学基金资助课题 ( ZD9924)作者简介:赵玉英 ( 1960— ) ,女 ,内蒙古赤峰林东人 ,教授 , 1982年毕业于内蒙古师范大学化学系 , 1984年在南开大学进行研究生课程学习 , 1993年在东北师范大学进行课题研究。 研究方向为配位化学和蒙药化学。 Tel: ( 0475) 8313485