全 文 ：津 OD S 柱进行分析, 原儿茶酸的保留时间基本一
致, 样品分离情况良好。
217　样品的测定: 按 214 项制备供试品溶液, 分别
精密量取对照品溶液和供试品溶液各 10 ΛL , 注入
液相色谱仪, 用峰面积按外标法计算, 几批市场上购
得的五味子药材中原儿茶酸的含量结果见表 2。
表 1　五味子中原儿茶酸含量测定结果
Table 1　Protocatechuic ac id in S. ch inens is
产地 原儿茶酸ö(m g·g- 1) RSD ö%
　辽　宁21 01221 017
　辽　宁22 01238 015
　河　北 01099 018
　吉　林 01130 316
　020801 01204 113
　011001 01398 117
　021101 01303 110
　韩　国 01276 012
3　讨论
311　分别采用甲醇2水2酸、乙腈2水2酸的流动相系
统进行分析, 发现乙腈2水2酸系统的分离效果较甲
醇2水2酸好。在流动相中加入醋酸铵可使原儿茶酸
保留时间缩短, 并改善原儿茶酸和相邻组分的分离。
用二级管阵列检测器检测, 发现原儿茶酸在 224、
258、295 nm 处均有最大吸收, 其中 258 nm 处吸收
最强, 故选择 258 nm 为检测波长。
312　提取溶剂的选择: 曾采用乙醇2水、水系统进行
提取, 发现水煎法比较费时费力, 且和最终采用的乙
醇2水超声提取的测定结果相比, 结果偏低, 故未采
用水煎法。分别用 10%、30%、50% 乙醇作为提取
溶剂, 结果以 50% 乙醇为溶剂的测定结果最高, 且
10%、30% 乙醇的提取物有大量的絮状物。故采用
50% 乙醇作为提取溶剂加入 1 % 冰醋酸可以提高
提取率。
313　提取条件的优化: 对放置时间和超声提取时间
等条件进行了优化, 结果表明, 放置 1 h 和放置 3 h
测定结果无明显差别, 故选择放置 1 h。放置 1 h 后
分别超声 20 、30 m in 后测定, 结果基本一致, 可以
认为超声 20 m in 已提取完全。
314　测定结果表明, 从市场上购买及雅安三九药业
有限公司提供的 8 个五味子样品中均含有原儿茶
酸, 原儿茶酸的质量分数在 011～ 014 m gög。
315　华中五味子 S ch isand ra sp henan thera R ehd.
et W ils. 干燥果实习称“南五味子”, 经测定, 其中也
含有原儿茶酸, 采用本法测定了南五味子中原儿茶
酸的含量, 4 批南五味子药材中原儿茶酸的质量分
数为 0115～ 014 m gög。本法也可以用于南五味子中
原儿茶酸的含量测定。
316　生脉注射液中含有五味子, 本法也可以用于生
脉注射液中原儿茶酸的含量测定, 人参和麦冬的成
分不干扰原儿茶酸的测定。
References:
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Constituen ts in P hy tom ed icine (植物药有效成分手册) [M ]1
Beijing: Peop le’s M edical Pub lish ing House, 19861
HPLC 法测定秦皮中香豆素类成分的含量
刘丽梅1, 李曼玲2, 冯伟红2, 陈　琳1, 王瑞海1, 吴　萍1Ξ
(11 中国中医研究院基础理论研究所, 北京　100700; 21 中国中医研究院中药研究所, 北京　100700)
　　秦皮为常用中药,《神农本草经》列为上品。《中
华人民共和国药典》2000 年版一部规定秦皮为木犀
科植物苦枥白蜡树 F rax inus rhy nchop hy lla H ance、
白蜡树 F. ch inensis Roxb. 、尖叶白蜡树 F. sz 2
aboana L ingelsh. 或宿柱白蜡树 F. sty losa L in2 gelsh. 的干燥枝皮或干皮。本实验对苦枥白蜡树树皮进行了研究, 从中分离到 5 种香豆素类成分, 并进行了结构鉴定, 它们是秦皮乙素 (É )、秦皮素(Ê )、6, 72二甲氧基282羟基香豆素 (Ë )、秦皮苷(Ì )、秦皮甲素 (Í ) , 化合物Ê～ Ì 为首次从该植物
·918·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003210211
基金项目: 国家重点科技攻关项目 (99292920122428)
中获得。对上述成分的提取、分离、鉴定已在秦皮化
学成分的研究中进行了报道[1, 2 ] , 这些香豆素类成分
具有抗菌抗炎, 止咳、化痰、平喘, 促进尿酸排泄, 镇
痛镇静, 调节血液循环, 抑制肠蠕动, 防紫外线等多
种功能。为了更好地控制秦皮药材的质量, 针对专属
性强的有效成分建立灵敏、快速的含量测定方法是
首要工作。秦皮的含量测定方法有纸色谱法, 柱色谱
法, 电泳法, 薄层光密度法, 高效液相色谱法和溴量
法[3 ]。目前《中华人民共和国药典》2000 年版一部秦
皮的含量测定采用的是分光光度法测定秦皮甲素的
含量。本实验采用了十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,
针对秦皮的主要有效成分香豆素类化合物, 建立了
一种灵敏、专属可靠的 H PL C 法测定秦皮药材中秦
皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷的含量, 用这 4 个
成分来共同标定秦皮药材的质量。
1　仪器和试药
　　W aters 600E (美国) 液相色谱仪, 四元泵, 996
二级管矩阵检测器及M illen ium 32色谱工作站。甲醇
为 GR , 其他试剂均为A R , 水为自制高纯水。秦皮甲
素、秦皮乙素对照品购于中国药品生物制品检定所
(批号: 秦皮甲素 74029403、秦皮乙素 7412200105)。
秦皮素、秦皮苷对照品为自制 (纯度均在 98% 以
上)。秦皮 F rax inus rhy nchop hy lla H ance, F. ch i2
nensis Roxb. , F. sz aboana L ingelsh. , F. sty losa
L ingelsh. 药材购自全国各地, 均经中国中医研究院
中药研究所谢宗万研究员鉴定为正品。
2　方法和结果
211　色谱条件: 色谱柱: D im asil C 18柱 (250 mm ×
4. 6 mm , 5 Λm ) , 流动相: 甲醇2水2冰醋酸 (6∶40∶
011) ; 检测波长: 340 nm ; 体积流量: 115 mL öm in; 柱
温: 40 ℃。理论塔板数按秦皮甲素峰计算不低于 2
000。
212　对照品溶液的制备: 分别精密称取对照品秦皮
甲素 2 m g, 置 5 mL 量瓶中, 秦皮乙素、秦皮素、秦
皮苷各 1 m g, 置 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇
匀, 即得 (含秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷分
别为 014、011、011、011 m gömL )。
213　供试品溶液的制备: 取样品粉末 (过四号筛)约
015 g, 精密称定, 置 50 mL 锥形瓶中, 精密加入甲
醇 25 mL , 称定质量, 加热回流 1 h, 取下, 放冷, 再
称定质量, 用甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过, 取续
滤液, 即得。
214　线性关系的考察: 精密吸取秦皮甲素对照品溶
液 (014 m gömL ) 3、6、9、12、15 ΛL , 秦皮乙素对照
品溶液 (011 m gömL ) 2、4、6、8、10 ΛL , 秦皮素对照
品溶液 (011 m gömL ) 2、4、6、8、10 ΛL , 注入高效液
相色谱仪, 按上述色谱条件测定峰面积, 以对照品峰
面积积分值为纵坐标, 对照品的量为横坐标绘制标
准曲线, 计算回归方程: Y 秦皮甲素 = - 6. 9×103 +
1. 33×106 X , r= 0. 999 4 (n= 5) , 表明秦皮甲素在
1. 2～ 6. 0 Λg 呈线性关系; Y 秦皮乙素= - 2. 28×104 +
1. 81×106 X , r= 0. 999 7 (n= 5) , 表明秦皮乙素在
0. 2～ 1. 0 Λg 呈线性关系, Y 秦皮素= - 1. 14×104 +
1. 15× 106 X , r = 0. 999 5 (n = 5) , 表明秦皮素在
0. 2～ 1. 0 Λg 呈线性关系。
215　精密度试验: 精密吸取供试品溶液, 重复进样
5 次, 测定质量分数, 秦皮甲素 R SD = 1. 77% , 秦皮
乙素 R SD = 1. 63% , 秦皮素 R SD = 1. 38%。
216　重现性试验: 取同一批样品同时制备 5 份, 按
照含量测定项下方法进行, 测定质量分数, 秦皮甲素
R SD = 1. 66% , 秦皮乙素 R SD = 0. 62% , 秦皮素
R SD = 2. 17%。
217　稳定性试验∶按照含量测定项下方法, 对同一
批样品进行了 0、1、2、4、8、16、24 h 测定质量分数,
秦皮甲素 R SD = 1. 84% , 秦皮乙素 R SD = 1. 94% ,
秦皮素 R SD = 0. 11%。
218　回收率试验: 采用加样回收法。取已知含量的
秦皮药材, 分别加入一定量秦皮甲素、秦皮乙素、秦
皮素对照品, 按上述色谱条件测定, 计算回收率。秦
皮甲素平均回收率为 97120% , R SD = 0182% (n=
5) ; 秦皮乙素平均回收率为 96198% , R SD = 0176%
(n = 5) ; 秦皮素平均回收率为 98120% , R SD =
1151%。
219　样品测定: 分别精密吸取对照品秦皮甲素、秦
皮乙素、秦皮素、秦皮苷溶液各 5 ΛL 与供试品溶液
5 ΛL , 依上述色谱条件测定, 按外标一点法计算即
得。样品的测定结果见表 1, 其色谱图见图 1。
　　根据测定结果, 暂定秦皮药材含秦皮甲素不得
少于 1137% ; 秦皮乙素不得少于 0126% ; 素皮素不
得少于 0113% ; 秦皮苷不得少于 0120%。
3　讨论
311　《中华人民共和国药典》2000 年版一部秦皮的
含量测定采用的是分光光度法测定秦皮甲素的含
量, 对资料研究发现, 秦皮中含有的秦皮甲素、秦皮
乙素不具有专属性。在菊科植物菊苣、茜草科植物土
连翘、大戟科植物续随子、茄科植物曼陀罗等一些植
物中都含有秦皮甲素[6 ]; 在芸香科植物黎檬、菊科菊
苣、狼把草、蝎尾菊、茄科植物唐古特莨菪、黄果茄、
·028· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
表 1　药材测定结果 (n= 2)
Table 1　Results of quan tita tive determ ination of crude drugs (n= 2)
编号 样品来源 样品品种 秦皮甲素ö% 秦皮乙素ö% 秦皮素ö% 秦皮苷ö%
1 四川成都 尖叶白蜡树 11102 01214 01112 01143
2 四川成都 尖叶白蜡树 01635 01681 01424 01106
3 四川成都 尖叶白蜡树 01889 01288 01185 01120
4 四川成都 尖叶白蜡树 21107 01259 01088 01082
5 四川成都 尖叶白蜡树 11092 01331 01197 01148
6 广东深圳 苦枥白蜡树 21747 01055 01109 01411
7 广东深圳 尖叶白蜡树 11454 01172 01131 01232
8 广东深圳 白蜡树 01680 01207 01090 01059
9 南京 苦枥白蜡树 11784 01420 01390 01324
10 上海 白蜡树 11293 01224 01149 01172
11 辽宁锦州 苦枥白蜡树 21207 01193 01177 01377
12 陕西洛南 宿柱白蜡树 31043 01126 01040 01216
13 山西大同 白蜡树 21335 01168 01123 01070
14 山西大同 尖叶白蜡树 11305 31025 01152 11518
15 陕西澄城 尖叶白蜡树 11387 41473 01272 11730
16 陕西澄城 尖叶白蜡树 41374 11919 01236 01919
17 陕西西安 尖叶白蜡树 11956 51111 01097 01336
18 陕西西安 尖叶白蜡树 01256 11028 01064 01374
19 陕西西安 尖叶白蜡树 11560 11093 01079 21002
20 陕西西安 尖叶白蜡树 11982 41025 01203 11991
a2秦皮甲素　b2秦皮乙素　c2秦皮苷　d2秦皮素
a2aescu lin　b2aescu letin　c2frax in　d2fraxetin
图 1　秦皮对照品 (A) 及样品 (B) 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s of refernece substances (A) and sample of Cor tex F rax in i (B)
萝摩科植物希腊杠柳、豆科植物草木犀中都含有秦
皮乙素[6 ]。这说明秦皮甲素、秦皮乙素不是秦皮的专
属性成分, 只是这两个成分在秦皮药材中的含量较
高; 但秦皮中的秦皮素、秦皮苷具有一定的专属性,
它们仅存在于木犀科 属当中。故对秦皮的含量测
定选择了在测定秦皮甲素、秦皮乙素含量的同时, 测
定具有一定专属性的秦皮素、秦皮苷的含量。用这 4
个成分共同标定秦皮药材的质量。
312　从上述样品的测定结果来看, 不同品种的秦皮
4 种香豆素成分的含量有差别, 即便是同一品种, 4
种成分含量也相差较大, 这与产地、用药部位和采收
期有直接关系, 观察样品发现, 枝皮的有效成分含量
较高, 干皮中含粗皮的有效成分含量较低, 这与资料
报道的结果相符[5 ]。另外 4 种秦皮所含有的成分也
各有侧重, 见表 2。
　　苦枥白蜡树树皮中秦皮甲素平均含量较高; 尖
叶白蜡树树皮中秦皮乙素、秦皮苷平均含量较高; 白
表 2　不同品种所含成分的对比 %
Table 2　Compar ison of componen ts in d ifferen t spec ies %
　　样　品 秦皮甲素 秦皮乙素 秦皮素 秦皮苷
苦枥白蜡树 (n= 3) 21246 0 01223 0 01225 0 01371 0
白蜡树 (n= 3) 11436 0 01199 0 01121 0 01100 0
宿柱白蜡树 (n= 1) 31043 0 01126 0 01040 0 01216 0
尖叶白蜡树 (n= 13) 11546 0 11738 0 01127 0 01768 0
蜡树树皮中秦皮乙素、秦皮苷平均含量较低; 宿柱白蜡
树树皮秦皮乙素、秦皮素平均含量较低; 但总体来看,
这 4 种成分在药材中秦皮甲素含量最高, 秦皮素含量
最低, 而秦皮乙素和秦皮苷的含量居中, 有的药材中秦
皮乙素含量高于秦皮苷, 有的药材中秦皮乙素含量低
于秦皮苷。这一结果再次提示: 要保证秦皮药材的质
量, 必须严格按照采收期和采收部位收购药材, 针对所
需的不同成分侧重采收不同品种、不同产地的秦皮。
313　本方法采用甲醇作为药材的提取溶媒, 有文献
报道采用 95% 乙醇作为提取溶媒[3 ] , 对甲醇、95%
乙醇及无水乙醇提取情况进行比较试验, 结果表明,
以甲醇作为提取溶媒测得各成分含量较高, 故采用
·128·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
甲醇为提取溶媒。在确定了甲醇为提取溶媒之后, 进
一步对提取溶媒用量 20、25、30 mL 甲醇进行了比
较试验, 结果表明, 提取溶媒用量为 25 mL 时测得
各成分含量较高。试验中对加热回流、超声处理及冷
浸 3 种提取方法进行了比较, 结果表明, 加热回流法
测得各成分含量略高于其他二法。确定选用加热回
流法为提取方法后, 分别又对加热回流不同时间 30
m in, 1、2 h 的提取结果进行了比较试验, 结果表明,
加热回流 1 h 测得各成分含量较高。
References:
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RP-HPLC 法测定芫花叶中 3 种黄酮苷的含量
李娆娆1, 刘延泽2Ξ
(11 中国中医研究院中药研究所, 北京 100700; 21 河南中医学院, 河南 郑州　450008)
　　芫花叶为瑞香科植物芫花 D ap hne g enkw a
Sieb1 et Zucc1 的干燥叶。为了扩大芫花及芫花根的
药用植物资源, 河南中医学院冀春茹教授等自 20 世
纪 80 年代以来对其化学成分进行了较系统研究, 从
中发现了多种黄酮苷元及苷类[1 ]、绿原酸类化合
物[2 ]及木脂素类成分[3 ] , 并发现其水溶性部位对心
血管系统有良好的作用, 能明显增加冠脉流量, 而对
心率的影响不明显, 并对心肌缺氧有保护作用, 还能
降低麻醉猫的血压, 抑制麻醉猫在结扎左冠状动脉
前降支血清磷酸激酶 (CPK) 活性的升高, 静脉注射
以后还可产生短暂但明显的降压作用[4 ]。该部位除
含有已分离得到的绿原酸类化合物及其他糖类、无
机成分等小分子化合物外, 可能含有较多的黄酮苷
类化合物。为了进一步探讨其活性成分和为开发新
的药用部位提供科学依据, 本实验采用R P2H PL C
法同时测定了芫花叶中芫花叶苷、木犀草苷和异槲
皮苷的含量。
1　仪器与试药
W aters 高效液相色谱仪 (W aters600E 泵,W a2
ters 996DAD 检测器, 美国W aters 公司) ; 乙腈、甲
醇为色谱纯, 其他试剂均为分析纯, 水为高纯水。
芫花叶采自河南信阳地区, 经河南中医学院刘
若墉教授鉴定为瑞香科植物芫花D ap hne g enkw a
Sieb1 et Zucc1 的干燥叶。
芫花叶苷、木犀草苷及异槲皮苷均为自制, 其光
谱数据与文献中 3 种黄酮苷的数据一致[1, 5, 6 ] , 经
H PL C 归一化法测定, 三者的纯度均在 99% 以上。
2　方法与结果
211 　 色 谱 条 件: 色 谱 柱 为 K rom asil2C 18 柱
(250 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相为乙腈2甲醇2
水2冰醋酸 (11∶21∶68∶014) , 体积流量 018 mL ö
m in; 柱温 25 ℃; 检测波长为 254 nm。该条件下芫花
叶苷、木犀草苷及异槲皮苷与其他干扰成分能基线
分离。按外标法以峰面积定量。
212　对照品溶液的制备: 称取芫花叶苷、木犀草苷
及异槲皮苷适量, 精密称定, 用甲醇溶解并定容至
10 mL 量瓶中, 即得 3 个黄酮苷的对照品溶液, 质量
浓度分别为 01246 8、01087 和 01060 6 m gömL。
213　供试品溶液的制备: 取本品于 60 ℃烘 6 h, 粉
碎后取约 2 g, 精密称定, 加入甲醇 25 mL , 称定质
量, 超声处理 30 m in, 放冷, 称质量, 用甲醇补足损
失质量, 摇匀, 滤过, 弃去初滤液, 取续滤液过微孔滤
膜 (0145 Λm )作为供试品液。
214　线性关系考察: 在上述色谱条件下, 分别精密
·228· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 7 期 2004 年 7 月
Ξ 收稿日期: 2003208212
作者简介: 李娆娆 (1974—) , 女, 2001 年毕业于河南中医学院中药系, 获硕士学位, 现攻读中国中医研究院中药专业博士学位。
T el: (010) 64014411- 2975　E2m ail: leerao rao@ho tm ail. com