全 文 ：2. 4　优化组方的验证:将各单味药按优化结果配成
组方 ,利用以上方法分别检测药效。 结果见表 5。
表 5　优化方对大鼠急性心肌缺血的影响 ( x± s, n= 10)
Table 5　 Ef fect of optimized compound on acute
myocardial ischemia rats (x± s , n= 10)
组　别 T波高度 /mV ΢ST /mV
溶剂对照 0. 26± 0. 12　 1. 25± 0. 51　
优化方　 0. 14± 0. 60* 0. 57± 0. 29*
　　与溶剂对照组相比: * P < 0. 05
　　* P < 0. 05 vs cont rol group
　　指标值为 0. 507,其值最小 ,说明药效优于其他
组方 ,证明川芎、香附、冰片、牡丹皮的最佳配比为
5∶ 1. 7∶ 1. 4∶ 4. 4(原提取物的质量比 ) ,剂量为
138 mg /kg (折生药 2. 78 g /kg )。
3　讨论
　　均匀设计是有别于正交设计的实验设计 ,它的
特点是有关因素的各个水平与水平数相等 ,减少了
多次试验 ,且实验结果可用计算机处理 ,通过回归方
程得出理论的最佳实验条件。因此均匀设计广泛应
用于工艺筛选 ,近年来也越来越多的应用于复方药
物筛选的药理研究 [4, 5 ]。
本试验研究表明 ,经均匀设计所得优化处方丹
心痛 138 mg /kg能对抗大鼠注射 Pi t后造成的冠状
动脉收缩痉挛 ,血氧供应障碍 ,降低大鼠心电图 T
波的抬高 ( P < 0. 05) ;对 β受体兴奋剂 Iso引起的心
率加快 ,心肌收缩力增加等增加氧耗 ,在心电图上主
要表现为 ST段 (΢ST)的偏移也有显著的对抗作用
( P < 0. 05)。同时证明均匀设计可作为有效筛选组
方最佳配比的方法 ,初步药效学实验证明其优化方
丹心痛对缺血心肌有一定的保护作用。
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液相色谱法制备丹参素钠
潘　见 ,徐　涛
(合肥工业大学 农产品生物化工教育部重点实验室 ,安徽 合肥　 230069)
摘　要: 目的　分离纯化丹参中的水溶性活性成分丹参素钠。 方法　采用亲脂性吸附树脂与制备型反相高效液相
色谱组合分离技术 ,将丹参水提粗制品经亲脂性吸附树脂柱色谱预分离后 ,再由制备型 RP-HPLC纯化精制。 结果
产品经熔点、 M S, IR, UV和 HPLC图谱鉴定 ,并与文献、标准对照品比较 ,证明为丹参素钠 ,纯度> 98%。结论　该
方法简单 ,重复性较好 ,采用的溶剂系统价廉易得、沸点低、易于回收。
关键词: 丹参素钠 ;分离 ;纯化 ;制备色谱
中图分类号: R284. 2; R286. 0　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 02 0125 03
Preparative separation of D (+ )-β-( 3, 4-dihydrophenyl)-lactate sodium
from Salvia miltiorrhiza by HPLC
PAN Jian, XU Tao
( Key Labo rato r y fo r Biochemical Eng ineering o f Agricultural Pr oducts o f Minist ry o f Education,
Hefei Univ ersity o f Techno lo g y, Hefei 230069, China )
Abstract: Object　 To develop a method fo r the isolation and purification of D (+ ) -β -( 3, 4-dihy-
drophenyl ) -lactate sodium from Salvia mil trorrhiza Bge. Methods　 Combined lipophilic adso rption resin
and preparativ e RP-HPLC, the w ater ex t ract o f S. miltrorrhiza was pre-iso lated by lipophilic adso rption
·125·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
收稿日期: 2002-08-02基金项目:国家自然科学基金重点项目 ( 20136020)作者简介:潘　见 ( 1955— ) ,男 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事天然产物分离纯化技术及装备研究。 Tel: ( 0551) 2900134
resin, the enriched ex t ract w as purified to giv e D (+ ) -β -( 3, 4-dihydrophenyl ) -lactate sodium by prepara-
tiv e RP-HPLC. Results　 By contra st wi th the litera ture and standard reference substance, D(+ ) -β-( 3, 4-
dihydrophenyl ) -lactate sodium was identified by M S, IR, UV, HPLC and melting point. The final puri ty
o f the compound is > 98% . Conclusion　 The developed method is simple, reproducible and easy to oper-
ate. The solv ent is cheap, wi th low boiling point and easy to recovery property.
Key words: D (+ ) -β-( 3, 4-dihydrophenyl ) -lactate sodium; sepa ra tion; purification; preparativ e HPLC
　　近年研究表明 ,丹参 Salv ia mil tiorrhiza Bge.
具有较强的抗氧化作用 [1 ] ,是目前治疗心血管疾病
不可缺少的天然药物。 丹参素及其酚酸类衍生物是
丹参中主要的水溶性活性物质 [2 ]。 研究丹参中各种
酚酸类化合物的药理活性和协同作用以及在体内的
代谢情况 ,开发丹参类新药 ,均需要大量高纯度的丹
参酚酸类单体。因此 ,研究丹参素单体的高效分离纯
化方法具有重要意义。
制备型 HPLC具有分离过程样品不易变性、产
品纯、回收率高和生产周期短的特点 ,特别适合某些
珍贵和难分离物质的分离纯化。 我们组合亲脂性树
脂吸附层析与制备型色谱 ,将丹参粗制品经过亲脂
性树脂柱色谱预处理后 ,再由制备型 HPLC纯化精
制 ,分离得到高纯度的产品。
1　仪器与材料
Waters Prep 4000型制 备色谱仪 , Waters
2487HPLC, Nico let Impact 410红外分光光度计 ,
Ag lient 1100 LC /M S,冷冻干燥机。亲脂性吸附树脂
AB-8为南开大学化工厂产品;超纯水。
2　方法与结果
2. 1　 HPLC检测条件: 色谱柱: W aters Novapak
C18 ( 3. 9 mm× 150 mm, 5μm);流动相:乙醇 -水-冰
醋酸 ( 14. 5∶ 85∶ 0. 5) ;检测波长: 278 nm;温度:
25℃。
2. 2　 HPLC制备条件: 色谱柱: W aters Novapak
C18 ( 40mm× 150 mm, 6μm);上样量: > 150mg;分
流比: 1∶ 30。 梯度溶剂系统见表 1。
表 1　丹参素钠制备型 RP-HPLC的梯度洗脱条件
Table 1　 Gradient elut ion condition
of preparative RP-HPLC
时间
/min
流速
/( m L· min- 1)
流动相
( EtO H-H2O-HAc)
梯度
曲线
0 45 10∶ 90∶ 0 线性
8 45 19. 5∶ 80∶ 0. 5 线性
25 45 70∶ 30∶ 0 线性
2. 3　丹参素的提取和纯化: 取丹参粉碎至 200～
300目 , 2%盐酸水溶液 (固液比 1∶ 3)索氏提取 3
次 ,每次 1. 5 h。冷却 ,过滤后用乙酸乙酯萃取 ,有机
相氮气流保护下减压浓缩 ,得丹参素粗品。粗品加水
溶解至 50 mL,水液经过 AB-8树脂柱层析 ,以丙
酮-水梯度洗脱 ,混合溶剂中水从 100%变化到 0% ,
同时丙酮从 0%变化到 100% 。 20 m L分段收集 ,
HPLC检测 ,合并浓缩主要含丹参素的流份。将上步
产品溶于适量甲醇 , 5% Na HCO3调节 pH至 6. 5,
加乙醚至浑浊 ,室温放置 ,析出类白色粉末状物质 [3 ]
(丹参素钠盐 ) ,过滤 ,充氮后低温保存。 接上步中间
品溶于适量高纯水中 ,直接经过 HPLC纯化 ,适当
浓缩 ,冷冻干燥得丹参素钠白色针状结晶。
2. 4　 RP-HPLC制备分离结果及产品鉴定: RP-
HPLC制备分离结果见表 2,色谱图见图 1。 纯化得
到的物质为白色针状结晶 ,分子式为 C9H9O5Na ,熔
点为 256℃～ 257℃ , [α]25D+ 36. 28(水 )。λMeOHmax nm:
278, 301 ( sh )。 IRνKBrmax cm- 1∶ 3 450～ 2 400(羟基 ) ,
1 525. 6, 1 462. 5(苯核 ) , 1 602. 7, 1 378. 6(羧基 ) ,
1 207. 0(酚羟基 ) , 1 115. 7(醇羟基 )。 ESI-M S m /z:
197. 0 [ M-H ]- , 123. 3 [M-H-CO2-CHOH]- 。 对照
文献数据 [3, 4 ]并与对照品比较 ,推断该化合物是丹参
素钠。
表 2　制备型 RP-HPLC分离效果
Table 2　 Separate ef f ect of preparative RP-HPLC
组别 质量 /mg 纯度 /% 提取率 /%
分离前 152. 4 34. 0 —
分离后 38. 5 98. 3 73. 0
3　分析与讨论
3. 1　制备条件由 HPLC分析条件扩展而得。 产品
制备在上样量和分离目的方面不同于样品分析 ,要
求在达到一定纯度的前提下获得尽可能多的产品。
分析型 RP-HPLC的参数在制备色谱中有重要参考
价值。
3. 2　 RP-HPLC分析条件:丹参素钠的 HPLC分析
条件 ,经优化 ,流动相选择乙醇 -水 -冰醋酸 ( 14. 5∶
85∶ 0. 5)。该流动相粘度适中 ,加入少量的冰醋酸调
节溶液 pH值 ,有利于增加溶质分子在反相键合相
上的保留时间、提高分离度和色谱的重现性。由色谱
图分析 ,丹参素钠与相邻色谱峰的分离度> 1. 7,分
析型色谱柱理论塔板数以丹参素钠计为 3 500。
·126· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
1-丹参素钠　 2-原儿茶醛
1-D (+ ) -β-( 3, 4-dih yd roph en yl ) -lactate s odium
2-protocatech uald eh yd e
图 1　丹参素钠的制备型 RP-HPLC色谱图
及中心切割示意图
Fig. 1　 Central incision of D (+ )-β-( 3, 4-dihydroph-
enyl)-lactate sodium by preparative RP-HPLC
3. 3　分析型 RP-HPLC条件转换至制备型 RP-
HPLC条件:分析型 HPLC条件向制备型 HPLC转
化时扩展因子 SF= ( rp ) 2× Lp /( ra ) 2× La= 105(式
中: p-制备型 HPLC, a-分析型 HPLC, r-色谱柱内
径 , L-色谱柱长度 )。
选择小的容量因子有利于分离时间的缩短和出
峰体积的缩小。高的分离度与制备型 HPLC可能出
现的过载相适应。
3. 4　分离参数 [5 ]:制备型 HPLC的效能取决于分
离速度、产品纯度和上样量 (制备量 )。为保证产品的
最终纯度 ,采用的方法是选择与分析型 HPLC粒度
相同的反相键合固定相、加快流动相的流速 ( 45
m L /min)和逐步加大上样量。
3. 5　洗脱程序优化:将分析型的填料直接应用于制
备型色谱 ,勿需对流动相作较大改动。为了提高色谱
的分离效率 ,扩大各组分的容量因子的差别 ,在分析
型 HPLC优化条件的基础上 ,选择梯度分离条件。
一次分离可在 30 min内完成 ,丹参素钠的纯度达
98. 3%。
3. 6　色谱柱的超载和色谱峰中心切割:为提高制备
HPLC的分离能力 ,由分析型 HPLC的分离规模和
扩展因子转化为制备型 HPLC分离时 ,逐步加大上
样样品的浓度 ,使色谱柱浓度超载。此时的分离为非
线性色谱 ,采用“中心切割”技术 (图 1)进行收集 ,有
效避免了丹参素钠色谱峰前后微量组分的污染。
3. 7　本实验以丹参干燥根为原料 ,采用预处理、稳
定化和 HPLC制备方法进行了丹参素钠的分离纯
化研究 ,得出如下结论:利用亲脂性吸附树脂和制备
型液相色谱组合分离技术 ,能较好地解决丹参素钠
在分离过程物理性质不稳定问题 ,初步筛选出批量
制备丹参素钠的工艺条件。分离所得丹参素钠产品 ,
经 LC-M S, IR, UV , HPLC和熔点鉴定以及与对照
品比较 ,纯度达到 98% 。
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高效液相色谱法和薄层色谱法测定重楼中薯蓣皂苷元的含量
李惠芬 1 ,平　渊 1* ,陈　刚 1 ,李军燕 2 ,何　 1
( 1. 天津医科大学药学院 ,天津　 300070; 2. 中国中医研究院广安门医院 ,北京　 100053)
摘　要: 目的　采用高效液相色谱和薄层色谱技术 ,分别测定重楼中薯蓣皂苷元的含量。 方法　采用 HPLC法 ,选
用 ODS柱 ,流动相:乙腈 -水 ( 90∶ 10) ,检测波长: 203 nm,柱温: 35℃ ; TLC法选用硅胶 G板 ,展开剂:环已烷 -乙酸
乙酯 ( 4∶ 1) ,测定波长: 610 nm,参比波长: 420 nm。结果　线性范围分别为 1. 2～ 7. 2μg (r= 0. 999 8) , 0. 2～ 1. 0
μg (r= 0. 995 7)。平均回收率分别为 102. 2% , RSD= 3. 39% (n= 6) ; 100. 9% , R SD= 2. 68% (n= 6)。结论　两种方
法均可用于重楼中薯蓣皂苷元的质量控制。
关键词: 重楼 ;薯蓣皂苷元 ;高效液相色谱 ;薄层色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 0127 03
·127·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
收稿日期: 2002-04-28
* 现在贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室