全 文 ：HPLC-EL SD 法测定三七叶中人参皂苷 Rb3、Rc、Rb1 的含量
朱 洁1, 2, 杨 蓉2, 张洪彬1, 2Ξ
(11 云南大学药学院, 云南 昆明 650091; 21 云大科技股份有限公司, 云南 昆明 650118)
三七为五加科人参属植物三七 P anax notog i2
neseng (Bu rk1) F1 H 1 Chen) 的干燥根。在三七叶
中以人参皂苷 R b3、R c 和 R b1 含量最高, 是三七叶
总皂苷中的主要活性成分。从三七茎叶中提取三七
叶总皂苷主要含有 20 (S ) 2原人参二醇型皂苷。具有
镇静安神、清热消肿、活血止血之功效, 能治疗神经
衰弱, 神经衰弱综合症, 风湿性关节炎等疾病[1 ]。目
前, 其质量控制标准采用的是碘量法[2 ] , 为完善其质
量标准, 本实验对三七叶总皂苷的定量分析方法进
行了研究, 以人参皂苷 R b1、R b3 和 R c 作为质量指
标, 采用H PL C2EL SD 法进行检测, 并与H PL C2UV
法进行了比较。
1 仪器与材料
A gilen t 1100 高效液相色谱仪: 具有可变波长
紫外检测器和色谱工作站; 英国 PL —EL S 1000 型
蒸发光散射检测器; 乙腈、甲醇为色谱纯; 水为二次
重蒸水; 人参皂苷 R b1、R b3 和 R c 对照品由云南省
天然药物研究中心提供 (纯度分别为: 98136% ,
95136% , 96156% , 归一化法测定) ; 三七叶总皂苷
(批号: 20010901, 20010902, 20010904) 为云南文山
特安呐制药有限公司提供。
2 方法与结果
211 溶液的制备
21111 对照品溶液的制备: 精密称取人参皂苷R b1
315 m g, 人参皂苷 R b3 715 m g 和人参皂苷 R c 10
m g, 置于 10 mL 量瓶中, 加入甲醇稀释至刻度, 摇
匀, 即得混合对照品溶液。避光保存, 备用。
21112 供试品溶液的制备: 精密称取三七叶总皂苷
0105 g (精确到 01000 2 g) , 置于 10 mL 量瓶中, 加
入适量甲醇, 超声处理 10 m in, 冷却至室温, 加甲醇
至刻度, 摇匀, 即得。
212 H PL C2UV 与H PL C2EL SD 的比较试验
21211 H PL C2UV 的色谱条件: 色谱柱: A gilen t
Ex tend2C 18柱 (250 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相为
乙腈 (A ) 2水 (B ) , 采用梯度洗脱: 0 m in 25% A , 8
m in 35% A , 15 m in 40% A ; 体积流量为 110 mL ö
m in; 柱温为 22 ℃; 检测波长为 205 nm。人参皂苷
R b3、R c、R b1 对照品以及三七叶总皂苷样品的
H PL C2UV 的色谱图见图 1。
12人参皂苷Rb1 22人参皂苷Rc 32人参皂苷Rb3
12ginseno side Rb1 22ginseno side Rc 32ginseno side Rb3
图 1 混合对照品 (A)和三七叶苷 (B)的 HPLC-UV 图
F ig11 HPLC-UV chromatogram s of m ixed reference
substances (A) and notog in seng leaf tr iterpen s (B)
21212 H PL C2EL SD 的色谱条件: 色谱柱: A gilen t
Ex tend2C 18柱 (250 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相为
乙腈 (A ) 2水 (B ) , 采用梯度洗脱: 0 m in 25% A , 8
m in 35% A , 15 m in 40% A ; 体积流量为 110 mL ö
m in; 柱温为 22 ℃。
EL SD 参数: 氮气流速为 115 mL öm in, 气化温
度为 80 ℃, 蒸发温度为 90 ℃。人参皂苷 R b3、R c、
R b1 对照品以及三七叶总皂苷样品的H PL C2EL SD
的色谱图见图 2。
12人参皂苷Rb1 22人参皂苷Rc 32人参皂苷Rb3
12ginseno side Rb1 22ginseno side Rc 32ginseno side Rb3
图 2 混合对照品 (A)和三七叶苷 (B)的 HPLC-EL SD 图
F ig12 HPLC-EL SD chromatogram s of m ixed reference
substance (A) and notog in seng leaf tr iterpen s (B)
通过比较实验可以看出: H PL C2UV 受噪音和
梯度洗脱的影响, 造成基线漂移严重, 重现性差, 定
量不准确。而H PL C2EL SD 灵敏度高, 重现性好, 并
·5631·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203221
作者简介: 朱 洁 (1973—) , 女, 分析化学硕士, 主要研究方向为药物分析。T el: (0871) 503569928814 E2m ail: zhu jie@eunida1com
不受梯度洗脱的影响, 较H PL C2UV 优越。
213 标准曲线和线性范围: 精密吸取上述对照品溶
液 5、10、15、20、25、30 ΛL , 在上述 H PL C2EL SD 色
谱条件下进样, 以峰面积 (Y ) 为纵坐标, 进样量 (X )
为横坐标作标准曲线, 回归方程和线性范围见表 1。
表 1 各组份的回归方程和线性范围
Table 1 Standard curves equation and relevan t
data of g in senosides Rb1, Rc, and Rb3
人参皂苷 回归方程 r 线性范围öΛg
Rb1 Y = 217138 X + 341789 01998 8 1175～ 10150
Rc Y = 871116 X + 251201 01999 1 510～ 3010
Rb3 Y = 134183 X + 211033 01999 7 3175～ 22150
214 精密度试验: 取上述对照品溶液重复进样 6
次, 测得人参皂苷R b1、R c 和R b3 峰面积的R SD 分
别为 0152%、0123%、0116%。
215 稳定性试验: 取上述对照品溶液, 每隔 30 m in
进样, 连续 4 h, 结果 4 h 内人参皂苷R b1、R c 和R b3
的峰面积积分值基本稳定, 峰面积的R SD 分别为
115%、119%、018%。
216 重现性试验: 取三七叶总皂苷样品 (批号:
20010901) 共 5 份, 制备供试品溶液, 测得人参皂苷
R b1、R c 和 R b3 的质量分数的 R SD 分别为 119%、
218%、212%。
217 加样回收率试验: 取已知含量的三七叶总皂苷
样品 01050 g, 分别添加人参皂苷R b1、R c 和R b3 对
照品溶液 1 mL , 一式 5 份, 按 21112 项下处理并测
定, 结果测得平均回收率分别为 99121%、97132%、
98125% , R SD 分别为 211%、119%、219%。
218 样品测定: 按上述方法对不同批号的三七叶苷
进行了含量测定, 结果见表 2。
3 讨论
表 2 样品含量的测定结果 (n= 3)
Table 2 Results of samples’ determ ination (n= 3)
批 号
人参皂苷ö(m g·g- 1)
Rb1 Rc Rb3 总量
20010901 2518 12816 12718 28212
20010902 3116 13017 14013 30216
20010904 2717 12911 12919 28617
311 在三七叶总皂苷中人参皂苷 R b1、R c 和 R b3
为三萜皂苷成分, 仅在 200 nm 左右有末端吸收, 因
此采用H PL C2UV 进行测定时, 噪音对结果影响较
大, 灵敏度也较低。蒸发光散射检测器为质量型通用
检测器, 其响应值取决被分析物质颗粒的数量和大
小, 能用于检测那些不含发色团的化合物, 即响应不
依赖样品的光学特性, 任何挥发性低于流动相的样
品都能被检测。
312 提取溶剂的选择: 取三七叶总皂苷适量, 分别
用甲醇、75% 乙醇、水饱和正丁醇溶液 3 种提取溶剂
提取, 按前述方法进行测定, 结果表明, 3 种提取溶
剂提取后测得的人参皂苷R b1、R c 和R b3 的含量几
无差别, 说明 3 种提取溶剂都可以选用。由于甲醇提
取后制备的供试品溶液杂质含量少, 干扰小, 处理方
便, 所以选择甲醇作为提取溶剂。
313 超声时间比较试验: 取三七叶总皂苷适量, 按
前供试品溶液制备方法制备, 曾比较超声时间: 10、
20、30、40、50 m in, 发现 10 m in 即可以将三七叶总
皂苷中的有效成分提取完全。
References:
[ 1 ] Chen D C1 T he M anua l of Chem ica l R ef erence S ubstance on
Ch inese M ed icine1 (中药化学对照品工作手册) [M ]1 Beijing:
Ch ina M edico2Pharm aceu tical Science and T echno logy Pub2
lish ing House, 20001
[ 2 ] D rug S tand ard in Y unnan P rov ince (云南省药品标准) [S ]1
Q öW S 78421985, 1985.
HPLC-EL SD 法测定银杏叶提取物中内酯的含量
单鸣秋, 张 丽, 曹雨诞Ξ
(南京中医药大学, 江苏 南京 210029)
银杏叶为银杏科植物银杏G inkg o biloba L 1 的
干燥叶, 味苦涩、性平, 有毒, 归肺经, 是传统的止咳
平喘药。明代李时珍《本草纲目》即有记载。银杏叶
主要含有银杏黄酮及内酯等成分, 具有收敛定喘、止
带缩尿之功效, 主治哮喘痰嗽、带下白浊、小便频数、
遗尿等, 用于肺虚咳喘以及高血压、冠心病心绞痛、
脑血管痉挛等的治疗。银杏叶提取物常用的质量控
制指标是黄酮和银杏内酯[1, 2 ]。因银杏内酯紫外吸收
·6631· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004202226
作者简介: 单鸣秋 (1978—) , 男, 江苏南京人, 中药硕士, 从事分析化学教学及药品质量研究。